肺组织胞浆菌（球状酵母菌）系列疫苗和诊断试剂及生产方法技术

本发明专利技术涉及一种ＳＡＲＳ流行性肺组织胞浆菌（球状酵母菌）系列特异性预防疫苗，和系列特异性诊断试剂及其生产方法，其特征是：由ＳＡＲＳ流行性肺组织胞浆菌（球状酵母菌）制成ＳＡＲＳ特异性预防疫苗，或用生物技术生产ＳＡＲＳ系列精制特异性疫苗和制造系列特异性诊断试剂及其各种不同剂型的制品，或作医药科学研究用途。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
属生物

技术介绍
由流行性肺组织胞浆菌(球状酵母菌)引起的局限性或传播性深部真菌病，属流行病，生活在流行区的人多数会被感染，临床表现分原发性和进行性两种，原发性是急性、自限性的肺部感染，但少数发展为进行性急性、播散性深部真菌病，可以侵袭脑、肺、内脏和器官，严重者可危及生命。流行性肺组织胞浆菌(球状酵母)是一种双相型真菌，寄生于人体组织内，本菌呈球形，称为球体，球体成熟时含有园形或不规则圆形内生孢子，(endospore)，数目可由数个至数十个，或充满球体。1周后球体成熟、破裂、释放出内生孢子，每个内生孢子又发教育成新的球体，球体成熟后又释放出生孢子，如此循环往复地生长繁殖，球体直径约有10-80μm，少数可达100μm；内生孢子直径1～2μm，少数可达10μm。菌体排出体外，在培养基上生长发芽，延长分支成为菌丝体，称为关节菌丝。SARS流行性肺组织胞浆菌病(球状酵母病)，是最新发现的烈性传染病，本病对人群呼吸系统高度易感，主要临床表现为发烧、咳嗽、气促、呼吸困难、软弱、白细胞减少，X光诊断为非典型性肺炎。本病原体属于真菌属，是一种双相真菌，在血琼脂和沙保罗氏琼脂培养生长缓慢，约2-3周才长出肉眼可见的白色小菌落，在动物模型病理组织切片中，肺、脾、肝、脑等组织可见大量园形、椭园形、周围有一光亮带的厚壁酵母样孢子粒颗，在液体纯培养中可形成大小不等的孢子体，(见附图)。3、
技术实现思路
采用SARS流行性肺组织胞浆菌(球状酵母菌)为原料制造灭活疫苗和减毒疫苗，制造提纯精制系列特异性预防疫苗，包括多糖疫苗(糖蛋白)、核酸疫苗、亚单位疫苗、合成和半合疫苗、胞壁疫苗、多肽疫苗、毒素、类毒素疫苗、基因重组疫苗、抗独特型抗体疫苗和生产特异性免疫球蛋白，以及用上述原料，制造出其他新生物制品，用SARS特异性预防疫苗。并同时通过免疫技术生产酶联免疫试剂，PCR诊断试剂，免疫萤光抗体诊断、胶体金诊断试和基因芯片等诊断用品，制造抗体、多克隆抗体和单克隆抗体。(1)技术关键①本专利技术制造的系列疫苗，主要通过菌株分离、扩增、纯化、灭活、脱毒(死菌)制造而成，其灭活方法是使在水浴中或相当的加温环境中用100℃10-40分钟，或60-95℃，1-6小时灭活，或采用1％-3％甲醛灭活和同时脱毒，达到灭活目的，并保持疫苗抗原的免疫活性的最佳状态。②本专利技术生产SARS系列预防疫苗，主要通过菌种培养、扩增、发酵、浓缩然后用物理、化学方法或生物技术，分离免疫活性组分，经层析、提取、纯化和精制。用细胞破碎器或用其他特殊的处理方法将细胞解体然后分离，提取、纯化、精制加工制造成系列特异性预防疫苗和系列特异性诊断试剂。(2)技术方案①本专利技术制造的疫苗，是采用一种前所未有的灭活和甲醛脱毒的方法制造出安全有效SARS的预防疫苗。②用细菌破碎器破碎菌体，除去细胞碎片，硅胶吸附粗提糖蛋白、核酸、亚单位、细胞壁、毒素，然后用疏水层析法精提，经硫氰酸盐或其他沉淀剂处理后，获取目的产品，稀释和除菌，然后进行纯化，产品检定。通过聚丙烯酸胺凝胶电泳、免疫印染、高压液相等程序，使制品达到所需要求，进入疫苗半成品生产成注射液和喷喉气雾剂以及滴鼻的粘膜免疫滴剂。成品检定合格后分装、包装、商品化进入市场。为实现上述目标具体方法如下本专利技术的SARS预防疫苗，根据抗原活性对动物产生的抗原抗体免疫反应和免疫耐受性，通过菌株分离扩增、纯化、灭活、脱毒和毒性、效力试验、安全试验等程序，SARS预防疫苗的临床用量单位按含菌数计算，供皮下或肌肉注射的疫苗，用于滴鼻和喷喉气雾剂。并制造球SARS预防苗的系列剂型，如气雾剂、滴鼻雾剂(液体)和用于舌下含的片剂、供皮下或肌肉注射针剂，以及冻干粉针剂等。供预防SARS感染之用。采用减毒活疫苗的剂量是灭活疫苗减量的2～20倍。(3)技术效果SARS病，当今被认为是一种烈性传染病，本专利技术研制成功特异性预防疫苗，是彻底解决本病的传播延和易感者预防的最佳途径。世界公认，疫苗是最有效、最方便、最安全、最经济的预防传染病方法，SARS预防疫苗的研制成功，将于人类健康作贡献。本专利技术流行性肺组织胞浆菌(球状酵母菌)其制造方法是采用上述灭活方法，经反复多次离心洗涤，加入适量无菌溶剂，用超声波粉碎和反复冻溶后，经毒性试验、安全试验、过敏试验，用适当溶剂以1∶100-10000稀释，无菌试验合格，供特异性诊断SARS皮试应用(0.1ml/次皮内)。对于急性流行病病原学的正确诊断，是消除流行病的传染源和对患者的及时治疗以及预防的关键，本发流行性肺组织胞浆菌素和球状孢子菌素研制成功，提供了一种特异性诊断用品，并同时用流行性肺组织胞浆菌(球状酵母菌)为原料生产酶联免疫试剂，PCR诊断试剂，免疫萤光试剂胶体金和基基芯片等特异性诊断试剂。为实现上述目标，本专利技术采用技术方案如下《SARS流行性肺组织胞浆菌(球状酵母菌)多糖疫、核酸疫苗制造方法》1.定义、组织及用途本品系用流行性肺组织胞浆菌(球状酵母菌)培养液，经提纯获得多糖抗原，并加入适宜稳定剂后冻干制成，供预防SARS感染之用。2制造2.1基本要求2.1.1设施与生产质量管理按中国《药品生产质量管理规范》要求实施。同时还必须具备三级安全实验和生产工作(P3)条件，并须在二级以上生物安全匮中操作；动物模型须在P3和P3级以上实验室中进行。2.1.2原料及辅料应符合现行《中国药典》或《中国生物制品主要原辅材料质控标准》的要求。未纳入上述标准的化学试剂，应不低于化学纯。2.1.3生产用水生产用水源水应符合国家饮用水标准；纯化水及注射用水应符合现行《中国药典》标准。2.1.4生产用器直接用于生产的金属或玻璃等器具，必须严格清洗及去热原质处理或灭菌处理。2.1.5生产及检定用动物小鼠、豚鼠应符合清洁级标准。2.2菌种2.2.1菌种名称及来源制造用疫区分离的SARS流行性肺组织胞浆菌(球状酵母菌)应经国家药品管理当局批准，并由国家药品检定机构或国家指定的单位保管和分发。2.2.2种子批的建立生产用菌种应采用种子批系统。原始种子批应验明其记录、历史、来源和生物学特性。从原始种子批传代、扩增后冻干保存为主种子批。从主种子批制备工作种子批。主种子批和工作种子批的各种特性应与原始种子批一致。工作种子批用于生产。2.2.3种子批的检定菌种接种在含10％羊血普通琼脂培养基上25℃，2周后生长出细小白色棉花样菌落，在GH改良液体培养24-48小时培养，涂片镜检应为纯的园形大小不等的孢子体。2.2.3.1生化反应接种葡萄糖、果糖及蔗糖，于35～37℃培养5-7日，发酵葡萄糖、麦芽糖，产酸不产气。2.2.3.3血清凝集试验将在25℃-37℃培养24-48小时培养悬液于0.5％ 甲醛生理氯化钠溶液或60℃加热60分钟杀菌以后，使每1ml含菌1.0×109-2.0×109，与特异血清定量凝集反应，应置35-37℃过夜，次日再放置室温2小时观察结果，以肉眼可见清晰凝集现象之血清最高稀释度(+)为凝集效价，必须达到原血清效价之半。参考血清由国家药品检定机构分发或同意。2.2.4菌种传代及保存2.2.4.1菌种应冻干保存于2～8℃。主种子批自启开后传代最多不能超过5代。2.2.4.2工作种子批生产前应检查菌种的全部特性，合格后方可用于生产。2.3本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：余国华，
申请(专利权)人：余国华，
类型：发明
国别省市：