血液检查方法技术

一种血液检查方法，其特征是包括以下步骤，即，　　　　（ａ）将哺乳动物血样离心，分离成血浆成分和血细胞成分的步骤，　　　　（ｂ）从该血细胞成分除去棕黄层，得到红细胞的步骤，　　　　（ｃ）用缓冲生理食盐水洗涤该红细胞的步骤，　　　　（ｄ）向该洗净过的红细胞中加入缓冲生理食盐水，得到红细胞悬浮液的步骤，　　　　（ｅ）将该红细胞悬浮液离心，除去上清液成分，得到红细胞层的步骤，　　　　（ｆ）向该红细胞层中加入高渗压液，为得到含有利用浸透压渗出的红细胞细胞内成分的悬浮液，将得到的混合物在２５～４０℃下保持充分时间的步骤，　　　　（ｇ）将该悬浮液离心，收集含有上述红细胞细胞内成分的上清液的步骤，　　　　（ｈ）测定该上清液，确定选自葡萄糖浓度、丙酮酸浓度、乳酸浓度和氧化还原电位中至少１个因素的步骤。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及从血液中取出规定细胞内的成分，通过生物化学检查，可早期准确把握病态的。
技术介绍
以往，取出作为血液液体部分的血浆中的成分，进行生物化学分析的血液检查，作为有效把握患者病态的体检检查方法之一，在多数医疗现场进行。通过这种血液检查想要把握的病态有许多种，但是，例如以糖尿病的情况为例，测定患者空腹时和饭后血液中(血浆中)的葡萄糖浓度。这样，所测葡萄糖的浓度，即血糖值高达规定值以上时，可判定糖尿病乃至糖尿病发生的可能性很高。另外，例如是慢性呼吸器官疾病或心衰、肾衰的场合，可测定血液中(血浆中)的乳酸浓度，所测乳酸浓度高达规定值以上时，可以判定慢性呼吸器官疾病或心衰、肾衰发生的可能性很高。众所周知，人的细胞是将葡萄糖作为主要的能源，在夜间，脑，神经、血细胞、肌肉等全身的细胞都利用糖。另一方面，肝脏由脂肪或氨基酸合成糖并放出。通常肝脏的糖放出率与全身细胞的糖利用率一致，因此血糖值为一定值(109mg/dl)以下。这样，由全身细胞摄入并有效利用葡萄糖的是称作胰岛素的激素。当摄取食物时，糖质形成葡萄糖，由小肠迅速吸收，进入血液中，从而流遍全身。由此，当血糖值上升时，瞬间从胰脏分泌出足量的胰岛素。这样，肝脏停止糖的释放。另一方面，成为全身细胞摄取糖，上述饭后上升的血糖值会迅速恢复到饭前的数值。重复这种过程是健康人的血糖值的变化。然而，尽管饭后血糖值上升，但对于所谓“胰岛素分泌缓慢，或分泌量很少”的体质的人，再加上运动不足或过量饮食等，胰岛素的功能不断降低时，上述葡萄糖难以摄入到细胞内，血液中会积存过量的葡萄糖。这样，饭后即使经过相当长的时间，血糖值也不会降低。这种状况是“高血糖”状态，通过上述以前一般的生化，要想把握该高血糖状态时，如上所述，将血液中的血浆成分作为检测体，进行空腹时的血糖值(FBS)和饭后的血糖值的测定。结果，例如，空腹时血浆中的血糖值在140mg/dl以上，饭后该血糖值在200mg/dl以上时，一般诊断为糖尿病(2型糖尿病)。当这种高血糖状态长时间持续时，会出现视网膜症、肾病等糖尿病所特有的血管障碍。另外，如果血糖值越高，其持续时间也就越长，视网膜症和肾病也就越恶化。然而，近年来，使用上述以前一般的生化血液检查，即，血浆成分中的血糖值检查，对于诊断为糖尿病血糖值并不高的患者，心肌梗塞发病的情况增多。即，可以确认对于所谓的糖尿病予备大军的早期、轻症的糖尿病患者，也动脉硬化症也发作、进展。例如，饭前的血糖值在正常范围内，属于健康正常。然而，发现每次饭后血糖值异常增高的情况(所谓轻症2型糖尿病)。象这样，即使饭前血糖值在正常范围内，饭后血糖值异常增高时，胰岛素慢于该血糖值的升高，但是，受高血糖刺激，过量分泌。当然，对于具有运动习惯的患者来说，上述由胰脏分泌的胰岛素将葡萄糖摄入肌肉中，但对于缺乏运动的患者来说，被脂肪细胞摄入。摄入脂肪细胞内的糖变成脂防，加速了肥胖，引起高血脂症。这样，高胰岛素血症的持续导致高血压症。结果，具有上述所谓胰岛素分泌图形迟缓型体质的人，由于符合所说的「轻型糖尿病(轻症2型)」、「稍有肥胖」、「轻度高血脂症」、「轻度高血压」的恶化条件，所以动脉硬化症容易进展，这通过颈动脉壁的回波检查等，已经被证实。事实上，据报导，根据最近日本的研究，观察10年内已诊断为糖尿病的民众时，每10人中，就有1人并发心肌梗塞，还有1人并发脑梗塞。因此，如果直系亲属中有患糖尿病的人，在诊断为糖尿病之前，应当注意过量饮食和缺乏运动，说到此处，对于糖尿病，要求事前重视、早期掌握病态的必要性。然而，上述将血液的血浆成分作为检测体的以前的生化检查方法，只不过是相同成分从作为血液细胞的红细胞中向外部渗出，在血浆中表象，然后开始进行分析判断，因此无论怎样，判定缓慢，存在未必能有效应对上述早期掌握病态的要求的问题。到目前为止，临床进行的红细胞检查，只有红细胞数、血细胞比容值、血红蛋白量的测定、网状红细胞、异常血红蛋白的检查等，实际上，取出红细胞中细胞内液成分，简便地进行生化检查的还未提出。专利技术公开本专利技术人对能够进行早期准确把握病态的进行了悉心研究，结果发现分析先期支配血浆中葡萄糖浓度的血液细胞红细胞内的成分状态变化(葡萄糖浓度的升高，代谢状态等)本身，对于掌握早期病态是十分重要的。即，为了能够掌握本来早期的病态，作为血液细胞成分，具有将血浆中摄入的葡萄糖解糖分解的代谢功能，知道在上流侧先期支配血浆中血糖值的红细胞细胞内的葡萄糖浓度(血糖值状态)是非常重要的。另一方面发现，如果测定具有上述糖尿病及其他病态的患者的血液中氧化还原电位(ORP)，病态时，氧化还原电位处于氧化状态，健康时，处于还原状态。这些均成为能够把握上述早期病态的有益判定参量，此时，上述红细胞中乳酸浓度对确定该氧化还原电位具有很大的影响，和上述情况一样，与该红细胞内的氧化还原电位一起，知道作为糖质代谢物的丙酮酸浓度和乳酸浓度是非常重要的。本专利技术着眼于这样的事实，其目的是提供一种，其特别是通过测定血液的红细胞细胞内葡萄糖浓度、乳酸浓度和丙酮酸浓度，以及氧化还原电位等，分别利用这些参量或将这些参量综合，适当把握病态，从而对于一般血液生化检查有效的各种病态，能从早期轻症阶段准确且确实地把握病态。本专利技术为达到上述目的，提供一种具有如下(a)～(h)步骤的。(a)将哺乳动物血样离心，分离成血浆成分和血细胞成分的步骤，(b)从该血细胞成分除去棕黄层，得到红细胞的步骤，(c)用缓冲生理食盐水洗涤该红细胞的步骤，(d)向该洗净过的红细胞中加入缓冲生理食盐水，得到红细胞悬浮液的步骤，(e)将该红细胞悬浮液离心，除去上清液成分，得到红细胞层的步骤，(f)向该红细胞层中加入高渗压液，为得到含有利用浸透压渗出的红细胞细胞内成分的悬浮液，将得到的混合物在25～40℃下保持充分时间的步骤，(g)将该悬浮液离心，收集含有上述红细胞细胞内成分的上清液的步骤，(h)测定该上清液，确定选自葡萄糖浓度、丙酮酸浓度、乳酸浓度和氧化还原电位中至少1个因素的步骤。根据这样的构成，与以前使用作为血细胞外液体成分的血浆成分进行血液检查的方法不同，由先期支配血浆中成分状态的血液细胞即红细胞内的成分，测定血糖值，或丙酮酸值、乳酸值、氧化还原电位，在时间上，先期知道尚未在血浆侧表现的红细胞细胞内的血糖值上升和丙酮酸值、乳酸值、氧化还原电位的变化，这与在血浆侧表现出相比要早。为此，对糖尿病、慢性呼吸器官疾病、心衰、肾衰等各种病症状况，可作出早期诊断，并进行准确的相应治疗。结果，如果利用本专利技术的，则可以正确判断利用以往由血液细胞外成分即血浆测定血糖值、丙酮酸值、乳酸值等，判定糖尿病等病态的不能准确判定病态的正常血糖值状态、正常丙酮酸值或低丙酮酸值状态、正常乳酸值或低乳酸值状态患者的真实病态，从而能作出更准确的早期诊断和早期治疗。关于本专利技术的的详细内容，以下更详细地进行说明。附图说明图1是表示利用本专利技术的，求出红细胞内氧化还原电位时制作的标准曲线的图。具体实施例方式本专利技术的，由以下(a)～(h)步骤构成。(a)步骤中，将静脉血样离心，分离成血浆成分和血细胞成分。例如，使用装入规定量肝素或EDTA作为防止红细胞凝固的血液凝固防止剂的采血管，从被检者采集静脉血。将得到的静脉血样(例如2ml本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：堀口升，堀口裕，
申请(专利权)人：堀口升，
类型：发明
国别省市：