全血检测制造技术

一种评估全血样品的血浆成分中的目标物质（例如，胆固醇或ＣＲＰ）的浓度的方法和设备，该方法不需要在检测前将血红细胞与血浆分离，从而简化了检测仪器的设计和构造。本发明专利技术通过测量在时间依赖性（生物－／免疫－）化学反应中的待研究的被分析物，并分别测量用于评估血红细胞体积的标记物质（例如，血红蛋白）和使用对样品的加入具有固有过滤效应的反应混合物的物理性质的非时间依赖性改变（此时，为透射率），而实现本发明专利技术。这种非时间依赖性改变不是化学反应的一部分，而是通过连续测量和数学建模由检测化学试剂引起的时间依赖性物理性质变化所得到的。使用将这两个参数结合起来的运算法则计算目标物质，并且补偿样品的百分比血细胞比容的变化。本方法补偿了患者样品中的细微变化（例如，血细胞比容）的检测响应。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉M全血样品中的物质进行检测的方法。
技术介绍
英国专利申请0606450.5描述了通过荧光猝，糖化蛋白进行检测，在荧光检测中m区分归因于内在过滤作用糊印寸间依赖性改变和由分析化学物质弓胞的时间 性改变，使用一种方法和设备测定非萤光物质(例如，血红蛋白)的浓度(测 定血红蛋白-Alc)。这种方法避免了进行分另啲光度观i淀和其它测定的要求，从而简 化了检湖仿法和相关仪器。本专利技术是这种方法用于领懂其它物质的一种改进，不需要使用荧光计，通过持 续地监测和JOT逐渐形成的信号(例如，透射率)，不仅测量正在进行反应的物质， 而且测量和补偿加入样品的初始量。现有技术包括对一系列物质进行检测，通过特定的反应化学试齐鹏时间的光度 变化，例如，通过应用一种对被分析物有特异性的涂覆在微细的乳，粒上的抗体， 测量增强的浊度，该增强的浊度是随着被分析物/抗原和抗体之间的反 程被测 量的被分析物{，乳胶微粒的聚集时产生的。可以使用常规的光度计和使用与光度 测量相关的科学原理实现这种对增强的浊度的测量。然后将这种浓度依赖性浊度与 现有技术已确定的标准产生的浊度相比较。其它适宜的方纟跑括在溶液中进行一系列的酶联反应，其中，全血样品中的血 浆成分中的被分析物通过酶促反应而改变，最终由无色的反应物生成有颜色的染料。 该颜色是以时间依赖性的方式产生的，并由光度计进行监测。这种对颜色变化的测 量也可以通过使用常规的光度计和使用与光度测量相关的科学原理实现。然后将这 种浓度依赖性透射率变化与由标准产生的邀寸率相比较，标准的测定方法也已在现 有技术中确定。在分析血浆成分中存在的物质时，必须考虑全血样品中的可变量。这就是血细 胞比容(haematocrit)或血红细胞在全血样品中的体积百分比，这个值可以广泛地随年龄、气候、营养和疾病状况以及其它因素而改变。例如，40%的血细胞比容是 指在一定体积的全血中，40%的体积由血红细胞占据，60%是血桨。当患者血液的 血细胞比容的上升时，方i(A检观蝶置中的固定体积的样品中的血浆的体积M^,反 之亦然。由于正 浆成分唯一地含有待观糧的被分析物，因而加入至仮应混合物 中的血浆成分的体积越少，反应混合物中得到的被测量的物质的浓度越低，测得的 〈繊小，反之亦然。弓胞全血中的血浆物质浓縮的任何分析方法都必须进行血细胞比容变化的校正，以得到正确的血浆浓度。正是由于这个原因，这种检测通常是使用预先M:过滤或者离心与血红细胞分离的血清或血^3S行的。就护理、医务室或诊所而言，可 以通皿滤或其它机 作将小体积的全血样品中的血浆成分分离，这会增加系统 设计的复杂性，从而增加成本。在这种情况下，测量两种物质可能是最有用的， 一种是待研究的被分析物，另 一种是被当作标记的物质，通过该物质对样品的血细胞比容进行测定或标准化。已知的是，在血红细胞溶解后，全血的血红蛋白浓度与该全血样品中的血红细 胞的体积直接成比例。如上BM，可以通过已知的方法用光度计在各种波长或通过各种反应化学试剂 (即，浊度或酶催化生色)评估血红蛋白的浓度。在最初进行了必需的空白测量后， 在分析化学试剂(生色或产生浊度)和血红细胞中均可以通过使用英国专利申请0606450.5描述的运算法则测量的可见光谱的一个点，评估初始的透射率，从而i啊古 被分析物反应化学过程之前的血红细胞浓度(因为这个结果是瞬时的，而且不依赖 于樹可化学反应)。也使用同样的运算法则对最终的透射率进行测量，该最终的邀t 率通过微分分析表示时间依赖性经受在研究中被分析物的化学反应。计算这两种评 估值之间的关系的运算法则可以用于获得不受血细胞比容的变化影响的血浆值。
技术实现思路
本专利技术的第一个方面提供了一种对全血样品中的物质进行检测的方法，该方法 包括(a) 在溶液中使全血样品中的被分析物与特定的试剂发生反应，所述样品与所 述试剂混合的时间为V,(b) 在反应进行时，以适当的波长连续地监所述溶液的透射率；(C)由检观啲邀寸率的值记^gl寸率，T,鹏为加入样品前反应溶液的謝率；计算To和L， To为加入样品后在时间to时的邀才率，L为在时间tj寸的邈寸率， 此时全部的所述被分析物均已与所述试剂反应，或者己经达到平衡；(d) 由T,^口To的值计算加入血液后的样品的光密度，并由此定量加入到所 述样品中的血红蛋白；(e) 由To和T①的值计算由步骤(a)中的反应弓胞的透射率的变化；以及(f) 由这些测量值之间的关系得至,品中被分析物的浓度，该浓度是经过了血 细胞比容变化校正的。本专利技术的一个目前主要用途是检测全血中的血浆被分析物。下面描述了两个实 施例以说明以下观糧方法中所应用的原理通过免疫比浊的方法测量被分析物，例 如，C-反应蛋白(CRP)，或者通过由一系列酶促连锁反应以生成有色终点测量不同 的被分析物，例如，胆固醇。在免疫比浊法的实施例中， 地，使抗CRP的抗体与在抗体和被分析物之间 发生反应时能够聚集的颗粒结合，例如，乳胶珠。在酶促系列连锁反应中，，地，关键的酶为对待测量的物质具有特异性(例 如，胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶)。由步骤(f)中To和T①的测量值得到的关系im地使用如下形式的运算法则 获得y=ax2+bx+c其中，a、 b和c为校准常数，y为被分析物化学物的测量值，例如，由log[(To -丁00)/丁0]计算得出，x为血红蛋白的测量值，例如，由log[(T鹏—To)/T鹏]计算得 出。在全自动化的设备系统中，将血液加入到试剂中，并通过该设备进行混合，在 化学反 行中可以测得的最初的透射率可以在加入血液并混合后约5秒内测定。 但是，在非自动化的系统中，由于需要操作员手动向含有试齐啲反应比色皿中加入 血液样品，然后混合并将该反应比色皿转移到光度计中，从而更加延迟了初始的结 合反应的监测。因此，无论是在手动系统还是自动系统中，都不能直接测得加入血 液样品后即刻的to点的实际透射率值。为了克服这点，在时间to点的邀寸率T() (g卩，加入样品后的即刻，而在反应发 生之前)iM地基于化学结合反应的速率平衡，通过将时间过程中的SJ率数据的拟合曲线反向外推得到。 地，这包括将测得的31M率数据对时间作图，对作图 点做出最佳的拟合曲线。作图可以是物理的，或者甚至是手动的，但是一般通过拟合与数据最佳匹配的数学函数并将该函数外推至时间为化和U，而自动地数学地实现，而不生戯p样的曲线图。可以通过任何适当的数学方法实m0f述曲线拟合，在 本说明书的后面部分将描述实施例方法。使用这样的方式，用记录的数据将变化最小化，然后将曲线外推以得出To的值。此外，通过将该拟合曲线正向外推到数据采集区域以外，也可以确定反应终点 too点的iSM率水平TTO。已经发现用这种方法确定化和点的透射率水平能得到可靠 而准确的结果。测量反应混合物的激t率的时间区间可以为适于进行检观啲任意区间。时间长 则精确度高，但检测过程慢；而时间短则方便，但是由于用于外推的数据的量变得 稀疏会导致结果的精确衝氐。测量时间的适宜长度取决于被分析的物质及其与抗体 反应的时间特性。关于使用易得的试剂的CRP免疫比浊测试和,旦固醇测试，测 量时间一般以约3併中为宜。也可以通过由少量数据的结果外推，并在反应过程中 不断校验该夕滩的准确本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种对全血样品中的物质进行检测的方法，该方法包括：　（ａ）在溶液中使全血样品中的被分析物与特定的试剂发生反应，所述样品与所述试剂混合的时间为ｔ↓［０］；　（ｂ）在反应进行时，以适当的波长连续地监测所述溶液的透射率；　（ｃ） 通过检测的透射率的值记录透射率，Ｔ初始为加入样品前反应溶液的透射率；计算Ｔ↓［０］和Ｔ↓［∞］，Ｔ↓［０］为加入样品后在时间ｔ↓［０］时的透射率，Ｔ↓［∞］为在时间ｔ↓［∞］时的透射率，此时全部的所述被分析物均已与所述试剂反应，或者已经达到平衡；　（ｄ）由Ｔ初始和Ｔ↓［０］的值计算加入血液后的样品的光密度，并由此定量加入到所述样品中的血红蛋白；　（ｅ）由Ｔ↓［０］和Ｔ↓［∞］的值计算由步骤（ａ）中的反应引起的透射率的变化；以及　（ｆ）由这些测量值之间的关系得 到所述样品中被分析物的浓度，该浓度是通过血细胞比容变化校正的。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】GB 2007-3-22 0705495.01、一种对全血样品中的物质进行检测的方法，该方法包括(a)在溶液中使全血样品中的被分析物与特定的试剂发生反应，所述样品与所述试剂混合的时间为t0；(b)在反应进行时，以适当的波长连续地监测所述溶液的透射率；(c)通过检测的透射率的值记录透射率，T初始为加入样品前反应溶液的透射率；计算T0和T∞，T0为加入样品后在时间t0时的透射率，T∞为在时间t∞时的透射率，此时全部的所述被分析物均已与所述试剂反应，或者已经达到平衡；(d)由T初始和T0的值计算加入血液后的样品的光密度，并由此定量加入到所述样品中的血红蛋白；(e)由T0和T∞的值计算由步骤(a)中的反应引起的透射率的变化；以及(f)由这些测量值之间的关系得到所述样品中被分析物的浓度，该浓度是通过血细胞比容变化校正的。2、 根据权利要求1所述的方法，其中，所述步骤(a)中的反应为免疫比浊性的。3、 根据权利要求2所述的方法，其中，所述试齐抱括对与微粒结合的被分析物有特 异性的抗体。4、 根据权利要求3所述的方法，其中，所述微粒为乳胶珠。5、 根据前述任意一项权利要求所述的方法，其中，所述被分析物为C-反应蛋白。6、 根据权利要求1所述的方法，其中，所述步骤(a)中的反应为比色性的。7、 根据权利要求6所述的方法，其中，所述试剂包括酶，该酶能够生成驱动一系列 连锁反应以生成有色的终点的酶。8、 根据权利要求6或7所述的方法，其中，所述被分析物为胆固醇...

【专利技术属性】
技术研发人员：约翰菲利普瓦塞，安德利安理查德格雷，大卫皮尔斯沃，
申请(专利权)人：商诊疗有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]