一种复宫散对血液中TNF-α、IL-1α的测定方法技术

本发明专利技术公开了一种复宫散对血液中TNF-α、IL-1α的测定方法，该测定方法包括：选取病原菌株、分组与造模、制备复宫散、临床观察、白细胞分类计数、子宫分泌物检查、TNF-α和IL-1α含量测定；采用Excel和SPSS16.0统计软件进行数据分析，用平均值±标准误差表示、结果与分析。本发明专利技术复宫散能显著降低子宫内膜炎模型家兔血液中TNF-α和IL-1α的含量(P＜0.01)，而且降低程度与药物剂量呈正相关，相较常用的中药抗炎剂桃红四物汤，复宫散与之差异不显著，表明复宫散能减轻各种炎症因子对子宫及全身的影响，发挥抗炎作用，起到治疗子宫内膜炎的作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医学药剂
，尤其涉及一种复宫散对血液中TNF-α、IL-1α的测定方法。
技术介绍
子宫内膜炎是一种常见生殖疾病，是导致奶牛繁殖性能下降和产奶量降低的主要原因之一，主要病原是致病性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌。目前该病治疗主要依赖抗生素，但随着奶质量标准不断提高，中药相较温和、低残留等特点不断凸显，桃红四物汤是用于治疗子宫内膜炎的经典纯中药复方制剂，复宫散是中药制剂，在经典方剂基础上新加几味药制备，临床应用效果较好，但尚无数据说明。本专利技术基于炎性反应和引起炎性损伤的重要指标TNF-α和IL-1α的测定，以期科学判定复宫散的抗炎作用，并为其应用于子宫内膜炎防治上提供科学依据。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种复宫散对血液中TNF-α、IL-1α的测定方法，旨在解决引起炎性损伤的重要指标TNF-α和IL-1α的测定，以期科学判定复宫散的抗炎作用，并为其应用于子宫内膜炎防治上提供科学依据的问题。本专利技术是这样实现的，一种复宫散对血液中TNF-α、IL-1α的测定方法，该复宫散对血液中TNF-α、IL-1α的测定方法包括以下步骤：分组与造模：取家兔55只(体重3kg±0.5kg母兔，健康未怀孕)，5只空白对照，50只连续2d对其子宫灌注造模菌液，通过观测临床症状、体温变化、子宫分泌物检查、细菌分离鉴定确定造模成功率(50只家兔其中48只造模成功，成功率96％)；药物的制备：制备复宫散；指标观测：所述指标观测包括临床观察、白细胞分类计数、子宫分泌物检查、TNF-α和IL-1α含量测定；数据处理:测定数据采用Excel和SPSS16.0统计软件进行数据分析，用平均值±标准误差表示；结果与分析:临床表现及造模鉴定分析、复宫散对子宫内膜炎模型家兔血清TNF-α的影响分析、复宫散对子宫内膜炎模型家兔血清IL-1α的影响分析。进一步，所述分组与造模前需先进行选取病原菌株，所述病原菌株为致病性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌；所述病原菌株为致病性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌中致病性大肠杆菌为血清型O111。进一步，所述分组与造模中灌注造模菌液，所述造模菌液为致病性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌24h培养物复检计数后等比例混合，菌液浓度≥2.5×109/mL。进一步，所述指标观测中所述的临床观察，观察造模前后、给药前后家兔精神、饮食、阴门肿胀、阴道充血及子宫分泌物变化；所述白细胞分类计数，造模前后、空白对照组前后耳缘静脉抗凝采血1mL，用全自动血液细胞分析仪测定血常规，重点比较白细胞分类的变化；所述子宫分泌物检查，采用姬姆萨染色镜检；同时取2mL子宫分泌物，加入等体积4％氢氧化钠，混合煮沸，冷却后观察，检测分泌物中尿蓝母；所述TNF-α和IL-1α含量测定，对末次灌胃24h后的家兔耳缘静脉采血1mL并分离血清，同时取上述造模前后备用血清，按照兔TNF-α酶联免疫检测试剂盒、兔IL-1α酶联免疫检测试剂盒说明书测定血清TNF-α和IL-1α含量。本专利技术另一目的在于提供一种复宫散，所述复宫散组分按质量包括：桃仁40g，红花40g，川芎40g，当归50g，生地40g，赤芍40g，炮姜30g，炙甘草30g，益母草150g，石膏100g，牛膝40g。本专利技术另一目的在于提供一种复宫散的制备方法，该复宫散药物的制备方法包括以下步骤：水煎醇沉法制备，将药材按比例置于烧杯中，加入药材量的5倍蒸馏水浸泡1h，然后置于电炉上沸腾1h，滤出煎出液，再向药渣中加入适量水，煎煮1.5h，合并两次煎出液浓缩至250ml，制得1:1(1g药液相当于1g生药)的浓缩药液，生药含量为1g/mL，经高压灭菌后冷藏保存备用。进一步，所述制得1:1的浓缩药液中1g浓缩药液相当于1g生药。本专利技术复宫散能显著降低子宫内膜炎模型家兔血液中TNF-α和IL-1α的含量(P＜0.01)，而且降低程度与药物剂量呈正相关，相较常用的中药抗炎剂桃红四物汤，复宫散与之差异不显著，表明复宫散能减轻各种炎症因子对子宫及全身的影响，发挥抗炎作用，起到治疗子宫内膜炎的作用。本专利技术提供的TNF-α是参与炎症反应的重要炎症因子，TNF-α低浓度时是防御病原微生物的重要因素，浓度过高，则导致一系列炎性损害，其值是观测凝血与炎症的重要指标。IL-1α是在局部和全身炎症反应中起核心作用的细胞因子，它能诱导其它炎症细胞因子的合成，扩大炎症反应，是炎症免疫反应的主要诱导剂，感染炎症时，其值有不同程度的增高，局部低浓度的IL-1α有利于机体发挥免疫调节作用，因此TNF-α和IL-1α浓度高低是判定炎性反应和引起炎性损伤的重要指标；复宫散对子宫内膜炎模型家兔TNF-α的影响：桃红四物汤和复宫散均能降低子宫内膜炎模型家兔血清中TNF-α水平，减轻炎症损害，其中复宫散中、高剂量组能显著降低子宫内膜炎模型家兔血清中TNF-α水平，说明中、高剂量的复宫散在治疗子宫内膜炎模型家兔上疗效显著。复宫散低、中、高剂量组与桃红四物汤对照组相比差异不显著(P＞0.05)，且复宫散低、中、高剂量组之间相比差异也不显著(P＞0.05)，说明低、中、高剂量的复宫散与桃红四物汤在降低子宫内膜炎模型家兔TNF-α值上疗效相当。复宫散对子宫内膜炎模型家兔IL-1α的影响：桃红四物汤和复宫散均能降低子宫内膜炎模型家兔血清中IL-1α水平，从而起到抗炎作用。复宫散低、中、高剂量组与桃红四物汤对照组相比差异不显著，复宫散低、中、高剂量之间的差异不显著，说明了低、中、高剂量的复宫散与桃红四物汤在降低子宫内膜炎模型家兔IL-1α值上疗效相当。复宫散可显著调节IL-1α、TNF-α等炎症因子的含量水平，结合临床症状的减轻和机体的恢复，进而确定复宫散起到了治疗子宫内膜炎的作用，虽然其降低了机体血液IL-1α、TNF-α含量，但究其原因，是由于药物入血使细胞分泌和释放细胞因子降低还是由于到达靶点形成局部抗菌作用，还有待于进一步专利技术，此外，复宫散相较桃红四物汤配方味数更多，是否还具有其他有利于家畜的功效还有待于进一步专利技术。附图说明图1是本专利技术实施例提供的复宫散对血液中TNF-α、IL-1α的测定方法流程图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。TNF-α是参与炎症反应的重要炎症因子，TN本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种复宫散对血液中TNF‑α、IL‑1α的测定方法，其特征在于，该复宫散对血液中TNF‑α、IL‑1α的测定方法包括以下步骤：分组与造模：取家兔55只，5只空白对照，50只连续2d对其子宫灌注造模菌液，通过观测临床症状、体温变化、子宫分泌物检查、细菌分离鉴定确定造模成功率；药物的制备：制备复宫散；指标观测：所述指标观测包括临床观察、白细胞分类计数、子宫分泌物检查、TNF‑α和IL‑1α含量测定；数据处理:测定数据采用Excel和SPSS16.0统计软件进行数据分析，用平均值±标准误差表示；结果与分析:临床表现及造模鉴定分析、复宫散对子宫内膜炎模型家兔血清TNF‑α的影响分析、复宫散对子宫内膜炎模型家兔血清IL‑1α的影响分析。

【技术特征摘要】
1.一种复宫散对血液中TNF-α、IL-1α的测定方法，其特征在于，该复宫散
对血液中TNF-α、IL-1α的测定方法包括以下步骤：
分组与造模：取家兔55只，5只空白对照，50只连续2d对其子宫灌注造
模菌液，通过观测临床症状、体温变化、子宫分泌物检查、细菌分离鉴定确定
造模成功率；
药物的制备：制备复宫散；
指标观测：所述指标观测包括临床观察、白细胞分类计数、子宫分泌物检
查、TNF-α和IL-1α含量测定；
数据处理:测定数据采用Excel和SPSS16.0统计软件进行数据分析，用平
均值±标准误差表示；
结果与分析:临床表现及造模鉴定分析、复宫散对子宫内膜炎模型家兔血清
TNF-α的影响分析、复宫散对子宫内膜炎模型家兔血清IL-1α的影响分析。
2.如权利要求1所述的复宫散对血液中TNF-α、IL-1α的测定方法，其特
征在于，所述分组与造模前需先进行选取病原菌株，所述病原菌株为致病性大
肠杆菌、金黄色葡萄球菌；所述病原菌株为致病性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌
中致病性大肠杆菌为血清型O111。
3.如权利要求1所述的复宫散对血液中TNF-α、IL-1α的测定方法，其特
征在于，所述分组与造模中灌注造模菌液，所述造模菌液为致病性大肠杆菌、
金黄色葡萄球菌24h培养物复检计数后等比例混合，菌液浓度≥2.5×109/mL。
4.如权利要求1所述的复宫散对血液中TNF-α、IL-1α的测定方法，其特
征在于，所述指标观测中所述的临床观察，观察造模前后、给药前后家兔精神、
...

【专利技术属性】
技术研发人员：张传师，彭津津，雍康，母治平，杨庆稳，王敬，程文超，周亚，刘震坤，周乾兰，
申请(专利权)人：重庆三峡职业学院，
类型：发明
国别省市：重庆;50