EP4受体配体在制备治疗IL-6相关疾病的药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及ＥＰ４受体配体在制备用于治疗ＩＬ－６相关的疾病的药物中的应用。还涉及一种分析测试，其包括用试验化合物培养外周全血，然后测定化合物对ＰＧＥ２－介导的人全血细胞活化的效果。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术的特点是EP4受体配体的新用途。本专利技术还包括鉴定影响外周全血细胞活性的药物的方法。具体地说，包括用来确定通过调节PGE2-介导的活性影响外周全血细胞分泌IL-6的化合物的分析测试。本专利技术另一特点是EP4受体拮抗剂的新用途。本专利技术的分析测试包括将外周全血细胞与化合物和PGE2接触测试外周全血细胞活性，而这可经测量IL-6的产生由细胞活性来确定。
技术介绍
前列腺素E2(Prostaglandin E2，PGE2)是与关节炎的发病有关的潜在调节剂。PGE2结合至少四个亚型PGE受体，命名为EP1，EP2，EP3，和EP4。分子研究已经显示所有亚型为7-经膜跨膜受体，而7-经膜跨膜受体属于G蛋白偶联受体总科(Robert等，Am.Soc.Pharm.Exp.Ther.46205-29，1994)。EP1激活通过G蛋白-介导机理刺激内细胞钙释放；EP2和EP4经刺激性G蛋白使腺苷酸环化酶(adenylate cyclase)活化，但对某些配体有不同的应答；EP3经抑制性的G-蛋白抑制腺苷酸环化酶(Robert等，见上，Negishi等，Biochimica Biophys.Acta 1259109-20，1995)。有人已经提出，白(细胞)介素(interleukin-6，IL-6)，一种多效炎性细胞因子，的浓度增加是大量病理紊乱如类风湿性关节炎自身免疫疾病和动脉粥样硬化的作用因素。白细胞介素-6(IL-6)是原生质细胞诱导、抗体分泌、B细胞生长、急性期蛋白质合成的激活、T细胞激活、造血干细胞生长和维持光学免疫功能所需的关键细胞因子。其作用确保在感染过程中和应答其它炎性刺激物时免疫系统被激活和滋养。已有详细的描述，IL-6对哺乳动物慢性炎性疾病如类风湿性关节炎生成和保持起重要作用。在最近的临床研究中，抗-IL-6受体抗体改善了类风湿性关节炎患者四肢强直、关节痛和肿胀(Yoshizaki等，SpringerSemin Immunopathol.Vol.20，247-259，1998)。这一证据暗示调节IL-6的产生是慢性炎性疾病有希望的对策动脉粥样硬化是一种复杂疾病，特征是胆固醇沉积到和单核细胞渗入到内皮下空间，导致泡沫细胞生成(Ross R.(1993)Nature 362801-809)。粥样硬化病变中巨噬细胞和胸腺依赖性淋巴细胞的存在暗示免疫系统和炎症性过程在动脉粥样硬化致病中起到重要作用(Libby等(1993)Curr.Opiii.Lipidol.4355-363)。在人粥样硬化病变中，已经检测出IL-6的mRNA转录物(Seine等，细胞因子1994，6，87-91)。这一现象由免疫组织化学研究得到证实和发展。免疫组织化学研究显示人(动脉)粥样硬化斑块中平滑肌细胞和巨噬细胞的IL-6蛋白定向表达(Kishikawa H.等，Virchows.Arch.A Pathol.Anat.Histopathol.1992，423，433-442)。此外，IL-6已经显示出对粥样硬化病变成分中细胞类型有重要作用。IL-6可以使THP-1巨噬细胞产生增加量的肿瘤坏死因子以应答脂多糖(LPS)(Cochran FR等，Immunopharmacology，1992，23，97-103)，这暗示IL-6在刺激巨噬细胞获得其全部炎性能力方面有重要作用。IL-6已经显示出以血小板衍生生长因子-依赖方式刺激血管平滑肌细胞生长(Ikeda U.等，Am.J.Physiol.1991，260，H1713-H1717)。最近的数据显示脱辅基脂蛋白E-敲除鼠发生动脉粥样硬化，而动脉粥样硬化与人病理学有关(Bourassa P-AK等，Proc.Natl.Acad Sci USA 1996，93，10022-10027；Kauser K.等，J.Vasc.Res.1996，33(suppl 1)48，Abstract)。从apoE-KO鼠离体的主动脉分泌IL-6表明相同apoE-KO主动脉的损伤区的阳性相关性。免疫组织化学的染色(法)揭示巨噬细胞主要地产生IL-6(Sukovich D.A.等，ArteriosclerThromb Vase Biol.1998，18，1498-1505)。因此，IL-6似乎在动脉粥样硬化生成方面起着重要作用。另一方面，现有的数据支持以下的假说动脉粥样硬化是一种炎性疾病(Ross，R.，等，Nature，1993，362，801-809；Alexander，R.W.，等，N.Engl.J.Med.，1994，331，468-469)。对炎症标记检查的研究显示出炎症增加与心肌梗塞危险的关系(Rider，P.M.等，N.Engl.J.Med.，1997，336，973-979；Liuzzo，G.等，N.Engl.J.Med.，1994，331，417-424)。导致血栓形成的板破裂(plaque rupture)是梗塞中主要的现象，并显示出与板中炎症增加有关(van der Wal.A.C.，等，Circulation，1994，89，36-44)。此外，炎症应答的减少可能与继发性局部缺血危险降低有关(Rider，P.M.等，N.Engl.J.Med.，1997，336，973-979)。有人提议阿斯匹林(一种环氧合酶抑制剂)降低心肌梗塞危险的有益效果部分归于抗炎症作用。这一证据暗示，除了细胞因子和生长因子之外，前列腺素还似乎在动脉粥样硬化中起到枢轴的作用。前列腺素通常是由酶环氧合酶-1(COX-1)产生的，而环氧合酶-1构成上是由血管的内皮(组织)、血小板、肾和其它处表达的(Monkada，S.等，Nature，1976，263，663-665)。另外，在几种不同类型的细胞中已检测出细胞因子-可诱导的环氧合酶，COX-2。COX-2的表达在基本条件下受到限制，并且在炎症过程如类风湿关节炎中并未经调节(Needeleman，P.等，J.Rheumatol，1997，24(suppl 49)，6-8)。在人粥样硬化病变中，在巨噬细胞里，在一些平滑肌细胞里和上皮细胞里发现了COX2(Christopher，S.R.，等，Arterioscler Thromb.Vasc.Biol.1999，19，646-655；Stemme，V.等，Eur.J.Vase.Endovasc，Surg.，2000，20，146-152)。由于COX2的激活产生前列腺素，被公认为炎症重要和阳性因子的E2和I2如PGE2和/或PGI2在粥样硬化病变病症中起重要作用。几种途经的证据暗示在炎症位置或粥样硬化病变由巨噬细胞产生前列腺素和IL-6与疾病的生成和保持有关。事实上，已有报导，当人外周血单核细胞用PGE2和钛颗粒共刺激时，PGE2在很大程度上增强了IL-6的产生(Blaine，T.A.等，J.Bone Joint Surgery，1997，10，1519-1528)。在本研究中，我们还显示PGE2增强了IL-6在刀豆素A(ConA)-处理的人外周血单核细胞(PBMC)中的产生。我们令人意外地发现EP4亚型选择性拮抗剂抑制了经PGE2和ConA共刺激的外周全血和PBMC中IL-6的产生(见本专利技术的详细描述)。本文档来自技高网...

【技术保护点】
ＥＰ４受体配体在制备用于治疗ＩＬ－６相关的疾病的药物中的应用。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：下条正人，谷口加奈，
申请(专利权)人：美国辉瑞有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]