肝相关的抑癌基因及用途制造技术

本发明专利技术涉及一种肝相关的抑癌基因ＬＦＩＲＥ－１。ＬＦＩＲＥ－１在人肝脏中特异表达、在人肝癌中低表达或不表达，对肝癌细胞生长和成瘤有抑制作用。本发明专利技术还涉及人ＬＦＩＲＥ－１多核苷酸和多肽的制法和用途，尤其是用于肝癌诊断和治疗。本发明专利技术还公开相应的检测试剂盒和药物组合物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术涉及一种肝相关的抑癌基因LFIRE-1及其用途。LFIRE-1在人肝脏中特异表达、在人肝癌中低表达或不表达，对肝癌细胞生长和成瘤有抑制作用。本专利技术还涉及人LFIRE-1多核苷酸和多肽的用途和制法。
技术介绍
肿瘤细胞区别于正常细胞的最基本特征是细胞生长失控和分化受阻。这种细胞生长失控和分化受阻是由于多种遗传性缺陷积累的结果，这主要表现在两个方面一是癌基因的激活或过度表达，阻止细胞分化，促进细胞生长；另一方面是肿瘤抑制基因的失活。在正常情况下，肿瘤抑制基因能够抑制细胞的恶性转化，对正常细胞的增殖起负调节作用；当肿瘤抑制基因失活后，正常细胞增殖失控，转化成肿瘤细胞。这两方面的研究为最终揭开细胞分化和癌变的机理，实现肿瘤的预防和有效的基因治疗，具有重大的理论和现实意义。肿瘤发生中的负调节因子的概念可以追溯到很早的年代，最早的文献记载是1902年由德国的细胞生物学家Theodor Boveri提出，他当时认为癌的发生受到正调节因子和负调节因子的影响。而现代肿瘤抑制基因的概念的提出始于20多年前，并推测在肿瘤的发生中，有肿瘤抑制基因的存在。但真正认识肿瘤抑制基因，则是从1986年分离克隆到人类第一个肿瘤抑制基因开始，并随着许多肿瘤抑制基因的分离和克隆以及功能的研究，现代肿瘤抑制基因的概念得以确立。肿瘤抑制基因(tumor suppressor genes)，又称抗癌基因(anti-oncogene)或癌抑制基因(onco-suppressor genes)，它是指一类可抑制细胞生长、增殖，诱导细胞凋亡，并有抑制癌变潜能的基因。当它失活时，同时由于癌基因的充分发挥其作用而导致细胞恶性转化。又因其功能上是隐性的，所以一般只在纯合状态下才发挥作用，故又称之为隐性癌基因(recessive oncogenes)。就目前已分离的肿瘤抑制基因来看，有与DNA结合直接作用于基因转录的，如p53、WT1；有间接调节基因转录的，如Rb、APC、可能BRCA1；有在细胞周期中起激酶抑制因子作用的，如p16；有细胞结构成分的，如VHL；有在信号通路中发挥主要作用的，如NF1、TGFβ，以及起调节DNA修复和基因组稳定性作用的MSH、MLH、p53等。1993年日本T.Yamamoto报告从一例肝癌分离到HFREP-1 cDNA。HFREP-1 cDNA 1231bp，编码312氨基酸的蛋白。Yamamoto仅仅比较了这一例临床肝癌标本，Northern杂交结果HFREP-1基因在这一肝癌中表达，而在癌旁肝组织中不表达。此外，Yamamoto在讨论中叙述“发现在高比例数的肝癌中有HFREP-1高表达”(在文中没有提供具体图和数据)。据此，Yamamoto认为HFREP-1是原癌基因。研究已表明，抑癌基因及其编码蛋白与一些疾病相关，例如多种恶性肿瘤。因此，为治疗目的研究和开发人的抑癌基因及其编码蛋白有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种新的抑癌基因LFIRE-1蛋白、多肽以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。本专利技术的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。在本专利技术的第一方面，提供新颖的分离出的LFIRE-1蛋白多肽，它包含具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。较佳地，该多肽选自下组(i)具有SEQ ID NO2所示氨基酸序列的蛋白；(ii)由(i)的蛋白发生一个或多个(较佳地1-10个)氨基酸的置换、缺失或插入而形成的且具有抑癌功能的蛋白。更佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。在本专利技术的第二方面，提供编码分离的这些多肽的多核苷酸，该多核苷酸包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少85％相同性(a)编码上述人LFIRE-1蛋白多肽的多核苷酸；和(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸在5’端还含有SEQ ID NO1中第67-127位所示的核苷酸序列。在另一优选例中，所述的多核苷酸多核苷酸编码具有SEQ ID NO2所示氨基酸序列的多肽。更佳地，该多核苷酸的序列选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中1-1282位的序列； (b)具有SEQ ID NO1中67-1080位的序列；(c)具有SEQ ID NO1中145-1080位的序列。在本专利技术的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。在本专利技术的第四方面，提供了一种人LFIRE-1多肽的制备方法，其特征在于，该方法包含以下步骤(a)在适合表达的条件下，培养本专利技术上述的宿主细胞；(b)从培养物中分离出人LFIRE-1多肽。在本专利技术的第五方面，提供了一种与本专利技术人LFIRE-1蛋白特异性结合的抗体，所述的LFIRE-1多肽选自下组(i)具有SEQ ID NO2所示氨基酸序列的蛋白；(ii)由(i)的蛋白发生一个或多个氨基酸的置换、缺失或插入而形成的且具有抑癌功能的蛋白。在本专利技术的第六方面，提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的LFIRE-1多肽或其编码序列以及药学上可接受的载体。在本专利技术的第七方面，提供了一种检测肝细胞是否发生癌变的试剂盒，它包括特异性扩增LFIRE-1的引物对，或与人LFIRE-1蛋白特异性结合的抗体。在另一优选例中，所述的引物对扩增出的扩增产物含有SEQ ID NO1中第67-127位中15-61个连续核苷酸。在本专利技术的第八方面，提供了一种体外检测肝细胞是否发生癌变或对个体的肝癌易感性进行诊断的方法，它包括步骤检测该个体的LFIRE-1基因、转录本和/或蛋白，并与正常的LFIRE-1基因、转录本和/或蛋白相比较，存在差异就表明该个体患肝癌的可能性高于正常人群。在另一优选例中，检测的是LFIRE-1的基因或转录本，并与正常LFIRE-1核苷酸序列比较差异。更佳地，所述的差异是以下的突变第391位T→G；第267和268位之间插入了一个T；第553位T→C；其中，核苷酸位置编号基于SEQ ID NO1。在另一优选例中，所述的差异是不表达LFIRE-1蛋白或LFIRE-1蛋白表达水平低于正常水平。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。附图说明下列附图用于说明本专利技术的具体实施方案，而不用于限定由权利要求书所界定的本专利技术范围。图1显示了LFIRE-1 cDNA序列，其中下划线为外显子1。图2显示了LFIRE-1蛋白的氨基酸序列。图3显示了LFIRE-1基因在人多种组织中的表达分析(Norhern杂交)显示LFIRE-1在人肝脏中特异表达图4显示了LFIRE-1基因在人肝癌与癌旁肝组织(A)和培养人肝癌细胞株(B)中的表达分析(Northern杂交)。结果显示LFIRE-1基因在多数肝癌组织和癌细胞株中低表达或不表达。图5显示了LFIRE-1基因在人肝癌与癌旁肝组织(A)和培养人肝癌细胞株(B)中的表达分析(RT-PCR)。结果显示LFIRE-1基因在多数肝癌组织和癌细胞株中低表达或不表达。图6显示了LFIRE-1基因在人肝癌与癌旁肝组本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多核苷酸，其特征在于，它包含一核苷酸序列，该核苷酸序列选自下组：（ａ）编码ＬＦＩＲＥ－１多肽的多核苷酸，所述的多肽选自下组：（ｉ）具有ＳＥＱＩＤＮＯ：２所示氨基酸序列的蛋白；（ｉｉ）由（ｉ）的蛋白发生一个或多个氨基酸的置换、缺失或插入而形成的且具有抑癌功能的蛋白；（ｂ）与多核苷酸（ａ）互补的多核苷酸。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：徐永华，严俊，余焱林，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]