癌症的长期CAR治疗制造技术

本文提供了瞬时表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞群及其在过度增生性疾病例如癌症的长期治疗中的用途。在一些方面，本公开提供了通过长期施用多于一次剂量的经修饰的未刺激的单核细胞群体来治疗癌症的方法，其中所述未刺激的单核细胞获自外周血并用编码嵌合抗原受体的mRNA转染。在一些实施方案中，本公开提供了一种组合物，其包含：瞬时表达由编码嵌合受体的mRNA编码的转基因的转染的单核细胞，其中嵌合受体在转染的单核细胞的表面上表达；和药学上可接受的载体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】癌症的长期CAR治疗相关申请的交叉引用本申请要求2018年1月5日提交的美国临时申请号62/613,900的优先权和权益，其全部内容通过引用整体并入本文用于所有目的。背景嵌合抗原受体(CAR)被用于包括癌症治疗的许多临床应用中。CAR是包括细胞外抗原结合结构域和细胞内T细胞信号传导结构域的重组受体。当在T细胞中表达时，CAR将T细胞重定向以靶向以人白细胞抗原(HLA)非依赖性方式表达靶向抗原的癌细胞。为了产生表达CAR的细胞，将编码CAR的核酸转染到免疫细胞中，然后在具有呈递在表面上的抗原结合区的细胞中稳定表达CAR。抗原结合区与其在受试者中的靶标的结合激活细胞质中的CAR信号传导区，并使免疫细胞繁殖并引发针对带有抗原的细胞的免疫反应，从而破坏这些细胞。嵌合抗原受体(CAR)修饰的T细胞的使用是一种创新的免疫治疗方法。CAR细胞疗法依赖于重新改造T细胞以表达允许细胞识别靶细胞的受体。通常，CAR治疗包括从患者收集T细胞，然后将嵌合抗原离体导入所收集的细胞中，扩增转染的细胞，然后将其输注入患者体内。向患者施用表达嵌合抗原受体的稳定转染的免疫细胞存在问题。首先，CAR转染的细胞可能导致细胞因子大量快速释放到血液中，并导致细胞因子释放综合征(CRS)，其能够导致发烧、恶心、心跳加快、血压低、呼吸困难和死亡。CAR疗法的另一潜在副作用是脱靶效应，称为B细胞发育不全，其中患者的B细胞被注入的CAR细胞杀死。为了弥补这种副作用，经治疗的患者在余生中必须接受免疫球蛋白治疗。在用稳定转染的CAR-T细胞治疗后，还已经观察到神经毒性和脑肿胀。专利技术概述产生CART细胞疗法的一种方法包括使用信使核糖核酸(mRNA)瞬时修饰单核细胞。使用mRNA重新改造患者的单核细胞以表达靶向肿瘤抗原的CART细胞可以在几个小时内完成，从而允许现场制备并部署到多个治疗部位。mRNACAR单核细胞具有有限寿命的安全系数，并具有类似于抗体治疗剂的半衰期。此外，这些细胞缺乏快速的免疫激活和增殖，从而限制了严重细胞因子释放副作用的风险。本公开内容通过向患者施用瞬时表达嵌合抗原受体的细胞，提供了针对在稳定转染的CAR治疗后观察到的不想要的和危险的副作用的解决方案。这些细胞在有限的时间(在一些情况下约7天)内表达CAR。此外，由于细胞仅瞬时表达CAR，因此它们可以在更长的时间内以多次剂量施用，从而提供用以减少患者症状的长期治疗和具有减少的或没有有害副作用的疾病。在一些方面，本公开内容提供了通过长期施用多于一次剂量的经修饰的未刺激的单核细胞群体来治疗癌症的方法，其中所述未刺激的单核细胞获自外周血并用编码嵌合抗原受体的mRNA转染。在一些实施方案中，每天、每周或每月重复剂量。在一些实施方案中，每周重复剂量。在一些实施方案中，每周重复剂量持续至少三周。在一些实施方案中，剂量是1×107或5×107个细胞。在一些实施方案中，嵌合抗原受体包含抗原结合区、4-1BB共刺激信号区和CD3ζ信号区。在一些实施方案中，抗原结合区是scFv。在一些实施方案中，抗原结合区与肿瘤抗原结合。在一些实施方案中，肿瘤抗原是与选自以下的癌症相关的抗原：乳腺癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、脑癌、肝癌、宫颈癌、结肠癌、肾癌、皮肤癌、头颈癌、骨癌、食管癌、膀胱癌、子宫癌、淋巴癌、胃癌、胰腺癌、睾丸癌、白血病、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、急性髓细胞性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性髓细胞性白血病(CML)和套细胞淋巴瘤(MCL)。在一些实施方案中，肿瘤抗原选自CD-19、FBP、TAG-72、CEA、CD171、IL-13受体、G(D)2、PSMA、间皮素、Lewis-Y和CD30。在一些实施方案中，嵌合抗原受体包含抗间皮素结合区。在一些实施方案中，抗间皮素结合区是scFv。在一些实施方案中，单核细胞选自B细胞、T细胞、天然杀伤细胞或PBMC。附图的简要说明图1证明了瞬时表达的CAR(MCY-M11)的体外表达。图2证明了MCY-M11抑制裸鼠中表达人间皮素的肿瘤(ID8)细胞的生长。图3显示了MCY-M11的多次(每周)施用导致总体生存益处的延长。详细描述术语“瞬时转染”和“瞬时修饰”是指使用转染过程将核酸分子引入细胞，所述转染过程不会导致将引入的核酸分子插入核基因组中。因此，当细胞经历有丝分裂时，引入的核酸分子丢失。可以使用任何适当的转染方法。在一些实施方案中，转染方法是物理方法。在一些实施方案中，转染方法是化学方法。在一些实施方案中，转染方法是脂质转染方法。在一些实施方案中，转染方法是电穿孔。在一些实施方案中，转染方法是微流控。在一些实施方案中，转染方法是生物弹颗粒递送系统方法(例如“基因枪”)。在一些实施方案中，转染方法是磷酸钙转染方法。在一些实施方案中，转染方法选自树枝状聚合物辅助的转染、阳离子聚合物转染、fugene、纳米颗粒辅助的转染、声穿孔、光学转染、流体动力递送、impalefection和颗粒轰击。相反，“稳定转染”是指选择将导入的核酸分子整合到细胞的基因组中的转染过程。这样，在有丝分裂后，稳定转染的核酸保留在细胞及其子细胞的基因组中。术语“瞬时表达”是指核酸分子在瞬时转染的细胞中的瞬时表达。除非明确指出仅指代替代方案或替代方案是互斥的，否则在本公开内容中术语“或”的使用用于意指“和/或”，但是本公开内容支持仅指替代方案和“和/或”的定义。术语“约”在本文中用于指示值包括用于确定该值的装置或方法的误差的标准偏差。除非明确指出，否则词语“一个(a)”和“一种(an)”在权利要求书或说明书中与词语“包含”结合使用时表示一个或多个/一种或多种。如本文所用，术语“长期施用”包括在一段时间(例如，每周、每月、每年等)内以多于一次剂量施用本公开内容的瞬时转染的CAR细胞。在一些实施方案中，不施用后续剂量，直到先前剂量的细胞不再表达CAR。在一些实施方案中，将本公开内容的瞬时转染的CAR细胞施用于患者直到发生复发或患者显示疾病进展。在一些实施方案中，施用本公开内容的瞬时转染的CAR细胞，直到患者症状改善、癌症生物标志物表达改变、癌症大小/患病率降低或改善(例如部分响应)或癌症不再可检测(例如完全响应)。术语“未刺激的”(在本文中与术语“静息”可互换使用)是指未被激活的细胞，例如被细胞因子或抗原激活。在一些实施方案中，未刺激的细胞不表达由刺激的细胞表达的标志物。在一些实施方案中，未刺激的细胞不表达PD1、HLA-DR、CD25、CXCR3和/或CCR4。瞬时表达嵌合抗原受体的细胞组合物在一些方面，本公开内容提供了包含瞬时转染的单核细胞或由其组成的组合物，所述瞬时转染的单核细胞通过用mRNA而不是DNA加载细胞而制成。在一些实施方案中，组合物是瞬时转染的单核细胞的细胞群。在一些实施方案中，使用US9,669,058中描述的方法制造瞬时转染的细胞，其全部内容通过引用整体并入本文用于所有目的。用mRNA加载细胞带来若干优点，并克本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种通过长期施用多于一次剂量的经修饰的未刺激的单核细胞群来治疗癌症的方法，其中所述未刺激的单核细胞获自外周血，并且用编码嵌合抗原受体的mRNA转染。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180105 US 62/613,9001.一种通过长期施用多于一次剂量的经修饰的未刺激的单核细胞群来治疗癌症的方法，其中所述未刺激的单核细胞获自外周血，并且用编码嵌合抗原受体的mRNA转染。


2.根据权利要求1所述的方法，其中每天、每周或每月重复所述剂量。


3.根据权利要求2所述的方法，其中每周重复所述剂量。


4.根据权利要求3所述的方法，其中每周重复所述剂量持续三周。


5.根据权利要求1所述的方法，其中所述剂量是1×107或5×107个细胞。


6.根据权利要求1所述的方法，其中所述嵌合抗原受体包含抗原结合区、4-1BB共刺激信号传导区和CD3ζ信号传导区。


7.根据权利要求6所述的方法，其中所述抗原结合区是scFv。


8.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗原结合区结合...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·V·佩什瓦，L·李，
申请(专利权)人：麦克赛特股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US