本发明专利技术涉及一种新的筛查人食管癌癌前病变的蛋白质芯片，以及由此蛋白质芯片衍生的筛查试剂盒。该蛋白质芯片包含了１６种特定人蛋白质的蛋白斑点，使用该蛋白质芯片可以检测来自被检人的样品中这１６种蛋白质各自相应抗体的存在和／或存在，联合分析这１６种蛋白质的相应抗体的检测结果，可以判断被检人是否存在食管癌癌前病变。本发明专利技术进一步提供了该蛋白质芯片在健康人群或高危人群中筛查食管癌癌前病变的应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种用于癌症筛查和/或早期诊断的蛋白质芯片，以及由此蛋白质芯片衍生的筛查试剂盒。具体而言，本专利技术提供了用于筛查食管癌癌前病变的蛋白质芯片和由此蛋白质芯片衍生的筛查试剂盒及其在健康人群或高危人群中进行食管癌癌前病变的筛查和/或早期诊断中的应用。
技术介绍
食管癌是人类常见肿瘤之一，发病率高、死亡率高，目前食管癌的五年死亡率仍然在90％以上，严重威胁着人类的生命健康。食管癌死亡率高的最重要的原因是食管癌的诊断率低，早期食管癌病人无明显体征，因而到医院就诊的病人绝大多数是中晚期病人。食管癌的发生、发展具有明显的阶段性，通常经历食管炎、食管鳞状上皮不典型增生(包括轻中重三级不典型增生)、原位癌，最终发展为浸润癌。食管鳞状上皮不典型增生是食管癌的癌前病变，这一阶段称之为食管癌发生的癌前阶段。将食管癌癌前病变患者从人群中筛查出来，进行干预性治疗可以将食管癌的发生阻断在癌前阶段，这对于提高食管癌的治愈率及降低死亡率具有重大意义。目前常用的食管癌癌前病变的诊断技术包括中国食管气囊拉网脱落细胞检查、日本海绵球拖拉脱落细胞检查、胃液隐血检测技术、食管镜检查及食管粘膜碘染色。二十世纪五十年代末，河南医科大学首先开展了应用“双腔管带网气囊”进行食管拉网脱落细胞学检查。1993年的一组204个病例的报告显示，依据食管拉网细胞学筛查发现和诊断的早期癌手术切除后5、10和25年的生存率分别为92.6％、71.6％和48.0％，效果令人满意。但在普查过程中发现该技术也存在诸多问题。1972到1996年间，在我国食管癌高发区进行的多次共71890人的普查中，食管拉网脱落细胞学检查对食管癌重度不典型增生的检出率在1％-10％之间，差别较大。造成这一问题的原因可能是由于该技术受到拉网操作医生、细胞病理学医生的水平，诊断标准等多因素的影响。1980年后，随着食管内镜技术的普及，发现拉网细胞学检查的敏感性低，漏诊率高。1995年和2002年两次对437人和742人的食管拉网细胞学检查与食管镜及食管粘膜碘染色检查的双盲对比研究发现，食管拉网细胞学检查对不典型增生的敏感性分别为33.6％和30.3％，即有接近70％的患者被漏诊。而且由于食管拉网过程太痛苦，患者的接受率越来越低。日本海绵球拖拉脱落细胞检查与食管拉网相比，具有操作简单，受检者痛苦少，接受率效率高的优点。但是，但食管上皮脱落细胞收集率低，效果差，敏感性低。一组460例45-65岁高发区的自然人群，每人连续3项三盲检查，先海绵球，然后食管拉网，最后内镜检查(术中加碘染色)，三者最后确诊为食管者分别为0，11，23例，可见日本海绵球拖拉脱落细胞检查普查应用价值不大。由于吞咽食物和食管蠕动的摩擦，使食管粘膜表面脆弱的病灶易受到损伤并导致病变细胞的脱落和出血。这些细胞和血液可随食物或唾液流入胃内，存入胃液。按此设想，秦德兴设计了胃隐血检测筛查法。在一个速溶胶囊内装棉球，胶囊在胃液中溶化释放棉球，棉球吸附1ml的胃液，拿出体外进行潜血试验。魏德兴报告一组4970例胃液隐血检测，(++)和(+++)阳性者共372例，其中284例接受内镜检查，21例诊断为食管癌。对食管癌的敏感度52.5％，特异度74.9％，漏诊率47.5％，不能检测出食管癌癌前病变。形若齐设计的一组隐血试验和内镜检查的双盲试验(495例)，证明胃隐血检测筛查法对食管癌的敏感度21.3％，特异度90.2％，癌漏诊率达78.7％，对癌前病变的检出率为0。陆建邦1994年对476人的检查结果认为该方法对食管癌及其癌前病变的漏诊率为100％。由于胃隐血检测筛查法的灵敏度低漏诊率高，对食管癌及其癌前病变没有筛查的价值。食管内镜检查时应用碘染色的检查方法是为了提高食管癌及其癌前病变的发现率和诊断率。1993-1994年日本yokoyama首先将此方法应用于食管癌的筛查。对629例40岁以上的无任何食管癌有关症状的男性进行检查，发现了21例食管癌，其中包括8例原位癌，检出率为3.3％。1995年王国清等在河南林县用此方法筛查食管癌高危人群460例，检出食管癌16例，检出率3.47％。同时发现重度不典型增生26例，检出率5.65％。2002年王国清等报道了一组3022例40-69岁的高危地区人群的筛查结果。用该方法检出食管鳞癌131例，检出率4.33％；轻度不典型增生676例，检出率22.4％；中度不典型增生506例，检出率16.7％；重度不典型增生153例，检出率5.1％；原位癌100例，检出率3.3％。实践说明食管内镜加碘染色的方法重复性高可靠性好，发现食管癌和癌前病变的准确性在99％以上，漏诊率很低。鉴于以上优点，曾考虑用该方法作为筛查的手段。但是，由于该方法成本高，检查效率低，不适合作大规模的人群筛查。另外，由于此方法为侵入性检查，受检者过于痛苦，受检者顺从率低。因此，在我国现有国情下不可能成为大规模食管癌高危人群的普查方法。随着分子生物学的迅速发展，在研究食管癌病因的同时，也在分子水平上对食管癌发生发展有了更多的了解。已有的研究表明在食管癌发生发展的多阶段过程中，细胞形态的恶性生物学改变伴随着其分子水平的多种基因参与和改变，它们包括癌基因的扩增、过度表达、突变和抑癌基因的缺失、突变、易位、重排等等多种基因的改变。到目前为止，已报道的与食管癌发生相关的基因异常改变约有十余种。最常见的癌基因改变有细胞周期蛋白cyclinD、cyclinE等，表皮生长因子EGF及其受体EGFR和c-erbB-2基因，mdm-2、HER2、myc基因的扩增和过度表达等等。同时发现P53、Rb、p16、Bcl-2、int-2、E-Cadherin等抑癌基因的突变、缺失、转导、易位及甲基化等改变。细胞遗传学和分子生物学技术的分析还发现，多个染色体上某些区段的扩增或缺失与食管癌的发生发展密切相关，如1q、3q2、5p、8q和20q染色体DNA拷贝数增加和3p、9p、13q、18q和Xp拷贝数减少等。为检测这些基因的改变，相继建立和发展起来多种分子生物学检测技术，如各种PCR技术(RT-PCR、PCR-SSCP和PCR-RFLPs)，各种核酸杂交技术(Southern、Northern、比较基因组杂交技术等)，以及近年来发展起来的荧光原位杂交技术(FISH)和微卫星多态性分析技术等。但这些技术对病患的判断均需依赖于病灶组织或病变细胞的获得。然而阳性样本的获取难度较大，而且很难在食管癌的癌前阶段采集到所需的标本，使这些技术在食管癌癌前病变的筛查中难以发挥相应的作用。加之这些技操作复杂，技术难度高，重复性差，需要特殊试剂和仪器，其敏感性、特异性和准确性尚难以定论，目前国内外均未将这些技术作为人群普查筛检食管癌癌前的手段和方法。目前大约已经发现了50余种人食管鳞癌生物标志物，它们或与人食管鳞癌的易感性相关，或与食管鳞癌发生直接相关，或与食管鳞癌预后相关，或与食管鳞癌转移相关，或与食管鳞癌临床分期相关，或与食管鳞癌耐药相关等等。这些标志物包括P53、p63、MDM2、RB、cdk4、cdk6、cyclin D1、cdk2、cyclin E、P16INK4A、p21Cip1/WAF1 EGFR、c-erbB-2、int-2、hst-1、TGF-b本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种筛查人食管癌癌前病变的蛋白质芯片，其包含选自以下一组的多肽或其抗原性片段： （１）具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１所示氨基酸序列的Ｈ３Ｆ３Ｂ多肽； （２）具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示氨基酸序列的ＤＮＡＪＡ１多肽； （３）具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３所示氨基酸序列的ＴＫ１多肽； （４）具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４所示氨基酸序列的ＲＢＰＳＵＨ多肽； （５）具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５所示氨基酸序列的ＰＣＮＡ多肽； （６）具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６所示氨基酸序列的ＥＩＦ４Ｇ３多肽； （７）具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７所示氨基酸序列的ＲＰＳ３多肽； （８）具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８所示氨基酸序列的ＲＰＬ３２多肽； （９）具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９所示氨基酸序列的ＣＯＰＢ２多肽； （１０）具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０所示氨基酸序列的ＴＰ５３多肽； （１１）具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１所示氨基酸序列的ＥＦＨＤ２多肽； （１２）具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２所示氨基酸序列的ＨＮＲＰＡ１多肽； （１３）具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３所示氨基酸序列的ＲＰＬ６多肽； （１４）具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４所示氨基酸序列的ＥＥＦ１Ａ１多肽； （１５）具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５所示氨基酸序列的ＴＲＡＦ４多肽；和 （１６）具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６所示氨基酸序列的ＭＡＧＥ－３多肽。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨治华，冉宇靓，李江伟，胡海，
申请(专利权)人：中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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