另外的植酸酶变体和方法技术

本发明专利技术涉及植酸酶变体，其具有改善的热性质，如热稳定性、加热稳定性、BSA稳定性、pH稳定性、蒸汽稳定性、温度概况和/或造粒稳定性；本发明专利技术还涉及含有该变体的组合物，以及该变体在动物饲料中的用途。

【技术实现步骤摘要】
另外的植酸酶变体和方法相关申请的交叉引用本申请要求于2019年3月21日提交的美国临时专利申请号62/821,649的优先权，其通过引用以其整体明确地并入。序列表本申请包含序列表，该序列表已经以ASCII格式电子提交，并且在此通过引用以其整体并入。创建于2019年9月4日的所述ASCII副本的名称为114095-5010-US_WO_ST25.txt，且大小为77千字节。专利技术背景植酸盐是基于植物的饲料中找到的磷的主要但难消化的形式。它被认为是一种需要从基于谷物的食品和饲料中减少或除去的抗营养因子(ANF)。在酸性条件下，植酸盐与带正电荷的膳食蛋白相互作用，导致形成植酸盐-蛋白质聚集体和沉淀，这导致蛋白酶的可及性降低，并因此导致蛋白质消化效率低下。植酸盐还起强螯合剂作用，其在单胃生物体的小肠中结合食物和饲料中的不同重要金属离子，导致动物中许多重要矿物质如钙，锌等的营养缺乏。植酸酶是一种催化植酸盐中O-P键的水解并释放无机可用磷的磷酸酶。植酸酶在农业和饲养领域中扮演着广泛的角色。反刍动物如牛和绵羊可以利用谷物中的植酸盐作为磷的来源，因为它们具有产生植酸酶的肠道中的细菌。非反刍动物如猪、家禽、鱼、狗、鸟等需要外源植酸酶来释放无机磷。因此，向单胃动物的饲料添加无机磷(一种不可再生且昂贵的矿物质)是常见实践，这给饲料工业带来沉重的成本。因此，从各种来源产生的植酸酶已经成为这些物种饮食的最有效且有利可图的补充物之一以增强动物饲料的营养价值并减少导致环境污染的动物磷排泄。饲料中的植酸酶可以受到饲料加工(造粒)期间的温度，受到动物胃肠道上部中的低pH或胃蛋白酶而失活。Selle和Ravindran展示理想饲料酶的特性，即；1)每单位蛋白质的高比活，2)饲料加工期间良好的热稳定性，3)动物肠道的典型pH范围内的高活性，4)对胃蛋白酶的抗性，和5)在环境温度下的良好稳定性。(SELLE,P.H.andRAVINDRAN,V.(2007)Microbialphytaseinpoultrynutrition.AnimalFeedScienceandTechnology135:1–41)。饲料的热处理可以包括单独的加热或者加热和压力两者的组合。家禽饲料生产中最常见的热处理形式是造粒。造粒过程首先涉及通过调节器(conditioner)的粉状饲料(mashfeed)。在调节器中，将冷冻饲料暴露于在压力下添加的干蒸汽。此过程有助于改善团粒持久性，并且还增加碾磨机通量并降低能耗。在这些条件下，碾碎植物细胞，这有利于动物的消化过程。Nissinen发现低于85℃的湿度调节(conditioning)对于肉鸡性能是最佳的，而95℃的高调节温度导致较差的体重增加和饲料转化率(NISSINEN,V.(1994)Theeffectsandinteractionsofenzymesandhydrothermalpre-treatmentsandtheircontributiontofeedingvalue.InternationalMillingFlourandFeed,May:21–22.)。在65-85℃的造粒过程通常导致由于细胞壁基质的破裂(PICKFORD,J.R.(1992)Effectsofprocessingonthestabilityofheatlabilenutrientsinanimalfeeds,于:GARNSWORTHY,P.C.,HARESIGN,W.&COLE,D.J.A.(编)RecentAdvancesinAnimalNutrition,pp.177–192(Butterworth-Heinemann,Oxford,U.K.)和谷物中存在的酶抑制剂的失活(SAUNDERS,R.M.(1975)α-Amylaseinhibitorsinwheatandothercereals.CerealFoodsWorld20:282–285)而改善营养物的可用性。由于高压所致的对植酸酶活性的损伤效应似乎较小；它主要是源自使酶失活的高能量输入的高温。因此，开发热稳定性植酸酶为饲料工业中划算的工艺提供了有吸引力的解决方案。植酸酶在人类食品中的新应用与动物饲料中的应用同样重要，因为难消化的植酸盐螯合必需的矿物质并导致约20亿至30亿人缺乏这些营养物。植酸酶在人类健康和医药中的应用代表了其他新的令人兴奋的领域。另外，植酸酶在包括食品加工和生物燃料生产在内的工业应用中具有较大的潜力。已经提示了热稳定性植酸酶与木聚糖酶一起是纸浆和造纸工业中的有效添加剂。专利技术概述因此，本专利技术提供了植酸酶变体以及产生和使用它们的方法。本专利技术的氨基酸序列号列于表1中。表1.氨基酸序列号。在一方面，本专利技术提供了包含植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQIDNO:1具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性，其中所述植酸酶变体具有植酸酶活性，并且不是SEQIDNO:17。在另一方面，本专利技术提供了包含植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQIDNO:1相比包含至少一个氨基酸取代，其中所述氨基酸取代在选自下组的位置编号处：4、5、6、7、10、11、25、27、31、35、46、53、55、58、61、62、63、65、67、69、70、72、73、75、76、80、89、90、110、111、113、114、119、120、121、130、134、135、136、137、139、142、146、151、153、157、158、161、165、173、174、176、179、180、181、182、185、187、189、191、192、193、194、197、202、225、230、233、238、240、242、244、261、266、272、276、277、279、280、281、282、288、292、295、302、311、315、316、339、341、346、352、362、363、364、365、366、370、371、372、378、381、384、385、394、395、398、401、402、403、409和410，其中所述植酸酶变体与SEQIDNO:1至少90％相同，且不是SEQIDNO:17；并且其中所述植酸酶变体具有植酸酶活性。在进一步的方面，本专利技术提供了包含植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQIDNO:1相比包含至少一个氨基酸取代，其中所述氨基酸取代在选自下组的位置编号处：4、5、6、7、10、11、25、27、31、35、46、53、55、58、61、62、63、65、67、69、70、72、73、75、76、80、89、90、110、111、113、114、119、120、121、130、134、135、136、137、139、142、146、151、153、157、158、161、165、173、174、176、179、180、181、182、185、187、189、191、192、193、194、197、202、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.包含植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQ ID NO:1相比包含至少一个氨基酸取代，其中所述氨基酸取代选自下组：A277T、P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T、P4W、E5K、L6F、L6M、L6Y、K7E、K7L、K7N、K7Q、K7S、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、D31I、D31N、D35E、D35F、D35N、D35R、D35Y、W46E、W46G、E53D、E53N、V55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、V67A、G70E、L72S、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、P80S、V89T、D90N、I110L、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、S119R、R120K、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、P137C、P137F、P137G、P137H、P137I、P137L、P137M、P137V、P137W、P137Y、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、Q157A、Q157P、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、P173N、P173S、P173T、P173Y、Q174A、Q174E、F179L、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、S187T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、T238A、T238F、T238G、T238K、T238N、T238P、T238Q、T238R、T238S、T238Y、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、T292G、G302S、L316F、T364C、T364E、T364I、T364L、T364N、T364Q、T364S、T364T、T364V、T364W、P365W、L366R、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、G381A、G381C、G381L、G381N、G381R、E384D、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、A403G、A403I、A403K、A403L、A403N、A403Q、A403W、A403Y、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R；/n其中所述植酸酶变体与SEQ ID NO:1至少90％相同，且不是SEQ ID NO:17；并且其中所述植酸酶变体具有植酸酶活性。/n...

【技术特征摘要】
20190321 US 62/821,6491.包含植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQIDNO:1相比包含至少一个氨基酸取代，其中所述氨基酸取代选自下组：A277T、P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T、P4W、E5K、L6F、L6M、L6Y、K7E、K7L、K7N、K7Q、K7S、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、D31I、D31N、D35E、D35F、D35N、D35R、D35Y、W46E、W46G、E53D、E53N、V55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、V67A、G70E、L72S、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、P80S、V89T、D90N、I110L、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、S119R、R120K、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、P137C、P137F、P137G、P137H、P137I、P137L、P137M、P137V、P137W、P137Y、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、Q157A、Q157P、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、P173N、P173S、P173T、P173Y、Q174A、Q174E、F179L、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、S187T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、T238A、T238F、T238G、T238K、T238N、T238P、T238Q、T238R、T238S、T238Y、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、T292G、G302S、L316F、T364C、T364E、T364I、T364L、T364N、T364Q、T364S、T364T、T364V、T364W、P365W、L366R、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、G381A、G381C、G381L、G381N、G381R、E384D、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、A403G、A403I、A403K、A403L、A403N、A403Q、A403W、A403Y、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R；
其中所述植酸酶变体与SEQIDNO:1至少90％相同，且不是SEQIDNO:17；并且其中所述植酸酶变体具有植酸酶活性。


2.权利要求1的组合物，其中所述植酸酶变体进一步包含至少一个氨基酸取代，并且其中所述氨基酸取代选自下组：QlS、QlV、QlN、Q30K、A36K、T39D、H60S、K74P、K74L、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、N69L、N69R、N69Y、A73P、Q79L、Q79R、Q79A、Q79G、Q79F、I85V、A101L、A109D、A109D、A109E、A109G、A109F、A109P、T111I、A116Y、A116P、A116R、A116S、T118R、T118S、R120S、P137N、P137S、A138V、A138H、A138D、A138P、N139A、N139H、N139P、T141E、T141G、T141A、T141R、S146E、S146P、Q157G、N176K、N180K、K183R、Q184S、D185N、E186V、El86A、S189L、S189N、S189T、G233A、T245E、M276K、H282N、A288R、V291I、T295N、V297L、G311A、E315G、E315S、R339M、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363R、N369P、T370K、A380R、A380T、E383S、R385T和E402D。


3.权利要求1或权利要求2的组合物，其中所述植酸酶变体表现出与SEQIDNO:1至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性。


4.权利要求1或权利要求2的组合物，其中所述氨基酸取代发生在一个所述位置、两个所述位置、三个所述位置、四个所述位置、五个所述位置、六个所述位置、七个所述位置、八个所述位置、九个所述位置、十个所述位置、十一个所述位置、十二个所述位置、十三个所述位置、十四个所述位置、十五个所述位置、十六个所述位置、十七个所述位置、十八个所述位置、十九个所述位置或二十个所述位置处。


5.权利要求1-4中任一项的组合物，其中所述氨基酸取代选自下组：G70E/A73P/K75C/A277T、Q62W/A73P/G302S、Q62W/A73P/A288R/E315G、G70E/A73P/K75C、W46E/Q62W/S146E/E402D、W46E/Q62W/A73P/N180K/M276K/A277T/E402D、Q62W/A277T/E315G、Q62W/A288R、G70E/P80S/E315G、W46E/Q62W/A73P、M276K/A288R、G70E/A73P/E402D、W46E/Q62W/E315G、W46G/A277T/A288R、W46E/Q62W、W46E/G70E/E315G、Q62W/G70E/F179L/A277T/A288R、W46E/Q62W/P80S/H113Q/E315G/E402D、M276K/E315G、M276K/A277T、K75W/M276K/A288R、W46E/Q62W/A73P/K75C/A277T/A288R/E315G、W46E/Q62W/N180K/E315G、M276K/A288R/E315G、W46E/Q62W/F179L/M276K、W46E/Q62W/M276K、A277T/A288R/E402D、W46G/Q62W/A73P/S146E/A277T、N180K/M276K/A277T/E315G/E402D、G70E/A73P/M276K/E315G、M276K/E315G/E402D、W46E/Q62W/K75C/F179L/A277T、P80S/M276K/E315G、G70E/A288R、M276K/A277T/E315G/E402D、Q62W/P80S/M276K、M276K/A277T/E315G、G70E/A73P/M276K、W46E/Q62W/P80S、W46E/G70E/K75C/A288R、Q62W/P80S/A277T、N180K/M276K/E315G/E402D、F179L/A277T/A288R、Q62W/A73P/P80S/A288R、A73P/E402D、Q62W/A73P/E402D、P137H/L316F、P4L/T280C、T238S/P372T、P4T/T280P、P4K/T280N、T364V/P371M、P4M/T280G、D35Y/T238G、L272S/A403Y、A193T/E384D、L58S/S409R、A153Y/Q157P/E165D/P261L、L72S/L410F、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G、
P4N/K7N/D35N/V67A/P121A/D136S/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/Q346S/T364W/T378A/G381A/A403G、K7N/D35R/V67A/P121A/D136S/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/Q346S/T364W/T378A/G381A/A403G、P4N/K7N/D35R/V67A/P121A/D136S/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/T378A/G381A/A403G、P4N/K7N/D35N/V67A/P121A/D136S/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/T378A/G381A/A403G和K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/Q346T/T364W/G381A/A403G/L410A。


6.权利要求1-4中任一项的组合物，其中所述植酸酶变体包含氨基酸取代M276K/A277T/E315G，以及至少一个另外的选自下组的氨基酸取代：P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T、P4W、E5K、L6F、L6M、L6Y、K7E、K7L、K7N、K7Q、K7S、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、D31I、D31N、D35E、D35F、D35N、D35R、D35Y、W46E、W46G、E53D、E53N、V55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、V67A、N69L、N69R、N69Y、G70E、L72S、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、P80S、V89T、D90N、I110L、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、S119R、R120K、R120S、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、P137C、P137F、P137G、P137H、P137I、P137L、P137M、P137N、P137S、P137V、P137W、P137Y、N139A、N139H、N139P、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、Q157A、Q157G、Q157P、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、P173N、P173S、P173T、P173Y、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、D185N、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、T238A、T238F、T238G、T238K、T238N、T238P、T238Q、T238R、T238S、T238Y、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、A288R、T292G、T295N、G302S、G311A、L316F、R339M、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363R、T364C、T364E、T364I、T364L、T364N、T364Q、T364S、T364T、T364V、T364W、P365W、L366R、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、G381A、G381C、G381L、G381N、G381R、E384D、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402D、A403G、A403I、A403K、A403L、A403N、A403Q、A403W、A403Y、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。


7.权利要求1-4中任一项的组合物，其中所述氨基酸取代选自下组：M276K/A277T/E315G/A73P/A288R、M276K/A277T/E315G/A288R、M276K/A277T/E315G/Q62W/A288R、M276K/A277T/E315G/Y61C/Q62W/A73P、M276K/A277T/E315G/A73P、M276K/A277T/E315G/Q62W、M276K/A277T/E315G/Q62W/A73P/A288R、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/P173Y/T364I、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/Q192K、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/P173Y/T364W、M276K/A277T/E315G/K7N/Q192L/T238A/T364W、M276K/A277T/E315G/K7N/Q192K/T364W/T370K、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/T238A/T364I、M276K/A277T/E315G/K7N/Q192L/T364I、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/Q192K/T364W、M276K/A277T/E315G/K7N/T238G/T364W、M276K/A277T/E315G/K7N/T238A、M276K/A277T/E315G/K7N/P173Y/Q192K/A403G、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/P173Y/T238A/T364I、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/T364I、M276K/A277T/E315G/K7N/P173Y、M276K/A277T/E315G/K7N/P173Y/A403G、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/Q192K、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/G381L、M276K/A277T/E315G/K7N、M276K/A277T/E315G/K7N/P173Y/Q192K/T364I、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/P173Y、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A、M276K/A277T/E315G/K7N/T364I/G381L、M276K/A277T/E315G/K7N/P173Y/G381L、M276K/A277T/E315G/S146P、M276K/A277T/E315G/V67A/T364I、M276K/A277T/E315G/P173N/T364W、M276K/A277T/E315G/V67A/T238G/G381A、M276K/A277T/E315G/T238G、M276K/A277T/E315G/P173S、M276K/A277T/E315G/T238N/T364W、M276K/A277T/E315G/T238A/T364W、M276K/A277T/E315G/V67A、M276K/A277T/E315G/T364W/G381A、M276K/A277T/E315G/V67A/T238A/T364W、M276K/A277T/E315G/V67A/T364W、M276K/A277T/E315G/T364W、M276K/A277T/E315G/T238A/T364W/G381A、M276K/A277T/E315G/T364I、M276K/A277T/E315G/V67A/P173N/T238A/T364W、M276K/A277T/E315G/P173N/T238N、M276K/A277T/E315G/P173T、M276K/A277T/E315G/V67A/T238A、M276K/A277T/E315G/P173T/G381A、M276K/A277T/E315G/S119R/L279F、M276K/A277T/E315G/N244I/T280N、M276K/A277T/E315G/T238P/T280N/P371Y/A403W、M276K/A277T/E315G/S119R/A403K、M276K/A277T/E315G/T280N/P371Y/A403W、M276K/A277T/E315G/S119R/P371Y/A403K、M276K/A277T/E315G/T280N/A403K、M276K/A277T/E315G/T280N、M276K/A277T/E315G/T280N/P371Y、M276K/A277T/E315G/T238Y、M276K/A277T/E315G/T238P/P371Y、M276K/A277T/E315G/P371Y/A403W、M276K/A277T/E315G/S119R/T280N、M276K/A277T/E315G/T238P、M276K/A277T/E315G/S119R/P371Y/A403L、M276K/A277T/E315G/P371Y/A403L、M276K/A277T/E315G/S119R、M276K/A277T/E315G/T238Y/A403W、M276K/A277T/E315G/S119R/T280N/P371Y、M276K/A277T/E315G/A403W、M276K/A277T/E315G/R65G/L410R、M276K/A277T/E315G/Q346T/S409V/L410A、M276K/A277T/E315G/E182T/D362G、M276K/A277T/E315G/E182S/S187T/P281S、M276K/A277T/E315G/D362G/S409V、M276K/A277T/E315G/P281S/S409H、M276K/A277T/E315G/E182T/A202R、M276K/A277T/E315G/R65G/S187T/Q346T、M276K/A277T/E315G/P281S/Q346T、M276K/A277T/E315G/E182S/P281S、M276K/A277T/E315G/P281S、M276K/A277T/E315G/S187T/Q346T/L410A、M276K/A277T/E315G/R65G/P281S/S409V、M276K/A277T/E315G/D31N、M276K/A277T/E315G/D31N/D362G/L410A、M276K/A277T/E315G/Q346T/L410A、M276K/A277T/E315G/P281S/Q346S、M276K/A277T/E315G/D31N/P281S/Q346T、M276K/A277T/E315G/S409H/L410A、M276K/A277T/E315G/D31N/Q346P、M276K/A277T/E315G/E182S/S187T、M276K/A277T/E315G/R65G/P281S、M276K/A277T/E315G/A202R/P281S/D362G/L410R、M276K/A277T/E315G/D31N/R65G/S187T/S409V/L410A、M276K/A277T/E315G/D31N/P281S/Q346S/D362G/K363R/S409H、M276K/A277T/E315G/Q346S、M276K/A277T/E315G/E182S/Q346S、M276K/A277T/E315G/N401P、M276K/A277T/E315G/P4N/N401P、M276K/A277T/E315G/T292G/T378A、M276K/A277T/E315G/D362G/N401P、M276K/A277T/E315G/E182A/T292G、M276K/A277T/E315G/P4N/T292G、M276K/A277T/E315G/P4N/D362G/G395P、M276K/A277T/E315G/G395P、M276K/A277T/E315G/P4N/G395P、M276K/A277T/E315G/P4N、M276K/A277T/E315G/P4N/I110L/G395P、M276K/A277T/E315G/P4N/D31I、M276K/A277T/E315G/P4N/D31I/E182A、M276K/A277T/E315G/D31I、M276K/A277T/E315G/P4N/S240G、M276K/A277T/E315G/P4N/I110L/S240R、M276K/A277T/E315G/D31I/S240A/N401P、M276K/A277T/E315G/T378A、M276K/A277T/E315G/D31I/S240A/D362G、M276K/A277T/E315G/G76C/A394M、M276K/A277T/E315G/R65G/E165P/Q242E、M276K/A277T/E315G/R65S/E165P/D362S、M276K/A277T/E315G/R65S/A193I/Q346P、M276K/A277T/E315G/Q242E/Q346P、M276K/A277T/E315G/R65G/E165P/D362S、M276K/A277T/E315G/R65P/E165P、M276K/A277T/E315G/R65S/E165P、M276K/A277T/E315G/R65S/E165P/Q242E/A394M、M276K/A277T/E315G/R65G/E165P、M276K/A277T/E315G/R65C/A193S/A394P、M276K/A277T/E315G/R65G/Q346P、M276K/A277T/E315G/R65S/E165P/Q242E/D362S、M276K/A277T/E315G/R65G、M276K/A277T/E315G/R65S、M276K/A277T/E315G/R65S/E165P/D362S/A394P、M276K/A277T/E315G/Q346P、M276K/A277T/E315G/Q242E、M276K/A277T/E315G/R65S/E165P/S240K、M276K/A277T/E315G/R65S/E165P/G381R、M276K/A277T/E315G/R65S/A394I、M276K/A277T/E315G/E165P/S240K/D362S、M276K/A277T/E315G/R65G/Q242E、M276K/A277T/E315G/Q242E/A394P、M276K/A277T/E315G/R65G/D362S、M276K/A277T/E315G/R65S/E165P/Q346P、M276K/A277T/E315G/R65G/S240K/Q242E、M276K/A277T/E315G/A394L、M276K/A277T/E315G/E5K/A153S/P281S/S409L、M276K/A277T/E315G/E5K/P281S/S409H、M276K/A277T/E315G/S151F/A153S/P281S/L410G、M276K/A277T/E315G/A153N/P281S、M276K/A277T/E315G/E5K/P281S、M276K/A277T/E315G/E5K、M276K/A277T/E315G/P281S/L410R、M276K/A277T/E315G/P281S/Q346K/S409L/L410G、M276K/A277T/E315G/E5K/V11I/Q346K、M276K/A277T/E315G/V11I/P281S、M276K/A277T/E315G/A153S、M276K/A277T/E315G/E5K/P365W、M276K/A277T/E315G/E5K/P281S/L410G、M276K/A277T/E315G/E5K/T111I/P281S/P365W、M276K/A277T/E315G/E5K/A153N/P281S、M276K/A277T/E315G/E5K/A153N/P281S/Q346K、M276K/A277T/E315G/Q346K、M276K/A277T/E315G/A153N/S409L、M276K/A277T/E315G/E5K/A153N/P281S/L410G、M276K/A277T/E315G/K7E/S409H、M276K/A277T/E315G/E5K/A153N/P281S/S409R、M276K/A277T/E315G/E5K/P281S/L410I和M276K/A277T/E315G/E5K/A153S/P281S。


8.权利要求1-4中任一项的组合物，其中所述植酸酶变体包含氨基酸取代M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G，以及至少一个另外的选自下组的氨基酸取代：P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T、P4W、E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、D31I、D31N、W46E、W46G、E53D、E53N、V55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、N69L、N69R、N69Y、G70E、L72S、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、P80S、V89T、D90N、I110L、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、S119R、R120K、R120S、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、P137C、P137F、P137G、P137H、P137I、P137L、P137M、P137N、P137S、P137V、P137W、P137Y、N139A、N139H、N139P、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、Q157A、Q157G、Q157P、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、P173N、P173S、P173T、P173Y、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、D185N、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、A288R、T292G、T295N、G302S、G311A、L316F、R339M、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363R、P365W、L366R、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、E384D、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402D、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。


9.权利要求1-4中任一项的组合物，其中所述氨基酸取代选自下组：M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P121A、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/D136G、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/T130G、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/Q174E、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/Q174A、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/Q27D、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/Q134A、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/T161D、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/T130R、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/Q27P、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/E53N、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/D136F、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/S151R、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/Q27V、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/Q134T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/E53D、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/D136S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/T295N、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/S189L、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/S189T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/T191S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P230S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/S189N、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/E197S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/L194I、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P4N/T378A、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/S409V、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/T378A、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P4N、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/T378A、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P4N、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/T111I、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P4N/T378A、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P173S/E182S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P173S/E182T/Q346T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P173S/E182T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238N/T364I/G381A/A403G/P173S/E182T/S187T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238N/T364I/G381A/A403G/E182S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238N/T364I/G381A/A403G/Q346T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/Q346S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238N/T364I/G381A/A403G/E182T/Q346S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238N/T364I/G381A/A403G/P173S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238N/T364I/G381A/A403G/E182T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238N/T364I/G381A/A403G/P173S/E182T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238N/T364I/G381A/A403G/P173S/E182S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/E182S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/Q346T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P173S/Q346T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/R65S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/A153N和M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/K363R。


10.权利要求1-4中任一项的组合物，其中所述植酸酶变体包含氨基酸取代K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G，以及至少一个另外的选自下组的氨基酸取代：P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T、P4W、E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、D31I、D31N、W46E、W46G、E53D、E53N、V55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、N69L、N69R、N69Y、G70E、L72S、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、P80S、V89T、D90N、I110L、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、S119R、R120K、R120S、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、P137C、P137F、P137G、P137H、P137I、P137L、P137M、P137N、P137S、P137V、P137W、P137Y、N139A、N139H、N139P、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、Q157A、Q157G、Q157P、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、D185N、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、A288R、T292G、T295N、G302S、G311A、L316F、R339M、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363R、P365W、L366R、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、E384D、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402D、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。


11.权利要求1-4中任一项的组合物，其中所述氨基酸取代选自下组：K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N176K/D185N/H282N/A288R/R385T、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315S/T364W/G381A/A403G/N139A/D185N/R385T、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N139H/N176K/D185N/A288R、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/T161D/A288R、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N139H/N176K/D185N、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N139A/T161D/N176K/D185N、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/D185N/H282N、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N139P/N176K/D185N/K363A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/D185N、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/D185N/R385T、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/A288R、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/R385T、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/D185N/H282N/L341V/R385T、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/H282N、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N139A/D185N/H282N/A288R/K363A/R385T、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N176K/D185N、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N139A/N176K/D185N、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N176K/L341V、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/D185N/H282N/A288R、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N139A/N176K/D185N/L341V、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/T161D/D185N、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/D136F/E197S/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/E197S/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/Q346S、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/P121A/E182T/E197S/Q346S/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/D136S/E182T/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/P121A/D136F/E182S/Q346S、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/P121A/E197S、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/E197S/Q346S、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/Q346S、K7N/D35R/V67A/P173S/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/D136S/E182S/Q346S、K7N/D35R/V67A/P173S/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/D136S/E182S/Q346S/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/D136S/E182T、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/E197S/Q346S/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/E182T/E197S/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q346S、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/D136F/E182T/E197S、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/P121A/D136S/Q346S/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/D136S/E197S/Q346S/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/P121A/D136S/E182T/T378A、K7N/D35R/V67A/P173S/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P121A/D136S/E182S/E197S/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q62W/P80S/D142E/A288R/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/W46E/Q62W/A73P/K75G/A288R/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/A288R/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q62W/A73P/K75G/D142E/F179L/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q62W/A288R/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q62W/G70E/A73P/D142E/F179L/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/...

【专利技术属性】
技术研发人员：林柔英，杨劼，张淅芸，G班纳吉，T福岛，EL胡，IN萨瓦亚，SJM米莱蒂，曾继蛟，吕文华，
申请(专利权)人：福尼亚生物处理股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US