结肠癌相关基因TOM34制造技术

本文描述了检测和诊断结肠癌的客观方法。在一个实施方案中，诊断方法涉及确定在结肠癌细胞和正常细胞之间有区别的ＴＯＭ３４的表达水平。最后，本发明专利技术提供了筛选结肠癌中有用的治疗剂的方法，治疗结肠癌的方法以及接种受试者抗结肠癌的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】结肠癌相关基因roM34本申请要求2005年7月27日提交的美国临时申请系列No.60/703,265 的权益，在此将上述申请的全部内容引用并入本文。专利
本专利技术涉及4企测和诊断结肠癌的方法以及治疗和预防结肠癌的方法。 专利技术背景结肠直肠癌是全世界癌症死亡的最常见原因之一。尽管各种结肠直肠 癌的诊断和治疗取得了各种进步，但许多晚期结肠直肠癌患者的死亡率很 高。为了改善他们的预后，有必要研制用于早期癌检测的敏感而特异的诊 断用生物标志以及更为有效且有害性更小的治疗性药物。为了达到这个目 的，有必要更清楚地了解结肠直肠癌发生的分子机制。最近的分子研究披 露了结肠直肠癌发生涉及遗传改变的积累，包括在肿瘤抑制基因和/或癌基 因包括APC、 p53 、 beta-联蛋白和K-ras的遗传改变(Nishisho I， et al. Science 253: 665-669, 1991; Baker SJ， et al.， Science 244: 217-221， 1989; Morin PJ, et al" Science 275: 1787-1790, 1997; Forrester K, et al.， Nature 327: 298-303, 1987)。除了这些类型的改变之外，表观遗传事件，例如改变的曱基化作用 (Jones PA & Laird PW， Nat Genet 21: 163-167， 1999)和印记的丟失(Cui H, et al., Nat Med 4: 1276-1280, 1998)和/或由于遗传变化或其它未知的才几制所致 的失调节的转录控制，与结肠直肠肿瘤的发生相关。在涉及癌发生的基因 中，我们预想对癌细胞的增殖和/或存活必需的基因产物的抑制将导致它们 的生长抑制或细胞死亡。因此，产生致癌活性并特异性地在癌细胞中表达 的分子，是用于研制新抗癌药的有希望的靶标。人TOM34是从人EST和cDNA数据库中发现的，并且被预测为线粒 体蛋白输入机构的组分，因为该被预测的蛋白质在一个62位残基基序的区 域中与已知的线粒体受体的酵母Tom70家族具有序列同源性(Nuttall SD, et al.，DNA Cell Biol 16: 1067-1074, 1997)。然而，最近的研究披露，在细胞和组织分级后，TOM34主要被包括在细胞质级分中，部分被包括在线粒体和 膜级分中(Chewawiwat N, et al.， J Biochem (Tokyo) 125: 721-727, 1999)。另一 项研究通过免疫组织化学染色显示了它在HeLa细胞的细胞质中的亚细胞 定位(Chun-Song Yand Henry Y. , Archives of Biochemistry and Biophysics 400: 105-110, 2002; Abhijit M, et al.， Archives of Biochemistry and Biophysics 400: 97-104, 2002)。酵母双杂交篩选系统已经显示TOM34在体外与含缬酪肽蛋 白(valosin-containing protein,VCP)、 一种AAA (与多种细胞活性相关的ATP 酶)家族成员(Chun-Song Y, et al" Archives of Biochemistry and Biophysics 400: 105-110, 2002)、或90-kDa热休克蛋白(Young JC, et al" J Biol Chem 273: 18007-18010， 1998)相互作用。然而，TOM34的生物学作用尚不清楚。已经证明，CD8+细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)识别提呈到MHC I类分子 上的来源于肿瘤相关抗原(TAA)的表位肽，并裂解肿瘤细胞。自MAGE家 族作为TAA的第一个例子被发现以来，应用免疫方法已经发现了许多其它 的TAA (Boon T.， Int J Cancer. 1993;54(2): 177-80.， Boon T & van der Bruggen P, J Exp Med. 1996;183(3):725-9.， van der Bmggen P, et. al., Science. 1991;254(5038):1643-7., Brichard V, et. al., J Exp Med. 1993;178(2):489-95" Kawakami Y, et, al., JExp Med, 1994;180(l):347-52),目前其中一些在临床研 究过程中已被当作免疫治疗的耙标。到目前为止发现的TAA包括MAGE (van der Bruggen P, et. al., Science. 1991;254(5038):1643-7)、 gplOO (Kawakami Y, et. al.， J Exp Med. 1994;180(l):347-52)、 SART (Shichijo S, et. al.， J Exp Med. 1998;187(3):277-88)、 NY-ESO-1 (Chen YT, et al" Proc Natl Acad Sci USA. 1997;94(5):1914-8)。同时已证明，肿瘤细胞以一定程度的特异性过高表达的 基因产物为被识别为细胞免疫应答的靶标。这些包括p53 (Umano Y， et. al., Br J Cancer. 2001 ;84(8): 1052-7)、 HER2/歸(Tanaka H， et. al" Br J Cancer. 2001;84(l):94-9)、 CEA (NukayaI， et. al" Int J Cancer. 1999;80(l):92-7)以及其 它产物。尽管这些是在基础和临床研究中已经取得显著进展的例子(Rosenberg SA， et. al., Nat Med. 1998;4(3):321-7.， Mukherji B, et. al.， Proc Natl Acad Sci U S A. 1995;92(17):8078-82" HuX， et. al" Cancer Res. 1996;56(11):2479-83)， 一般用于腺癌包括结肠癌治疗的候选TAA数量非常有限。如果有仅仅在癌细 胞中但不在正常细胞中大量表达的TAA,它们将是有希望的候选免疫治疗靶标。 专利技术概述为了验证在结肠直肠癌发生中的分子作用并为结肠直肠癌(CRC)患者 寻找新的治疗靶标，我们应用由23040个基因构成的cDNA微阵列进行了 表达模式分析(Lin YM， et al., Oncogene 21: 4120-4128， 2002)。在结肠直肠肿 瘤中显示上调表达的基因中，我们着眼于TOM34 ( 34kDa的线粒体外膜移 位酶)，因为它的表达水平在受检的20个CRC样品中在其中16个中频繁 提高。多组织Northern印迹分析显示该基因大量表达于睾丸和卵巢中，弱 表达于前列腺、脾脏和结肠中，但在受检的其它11个正常成人组织中均不 表达。TOM34的免疫组织化学染色显本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种诊断受试者中结肠癌或发生结肠癌的倾向性的方法，包括确定来源于患者的生物样品中ＴＯＭ３４的表达水平，其中与该基因正常对照水平相比，所述样品中表达水平的增加表明该受试者患有结肠癌或具有发生结肠癌的风险。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：中村佑辅，古川洋一，田原秀晃，角田卓也，松岛敏志，
申请(专利权)人：肿瘤疗法科学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：JP[日本]