五味子乙素抗PRRSV的用途制造技术

本发明专利技术公开了五味子乙素抗PRRSV的用途。五味子乙素能够显著抑制PRRSV的复制并直接灭活病毒，抑制PRRSV的吸附和释放，证明五味子乙素在体外具有抗PRRSV作用，有望成为新型的防治猪蓝耳病的药物，在猪蓝耳病的防治方面具有很好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
五味子乙素抗PRRSV的用途
本专利技术属于中药
，具体涉及五味子乙素在制备抗PRRSV的药物中的应用。
技术介绍
猪繁殖与呼吸综合征(PorcineReproductiveandRespiratorySyndrome，PRRSV)，俗称猪蓝耳，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种急性、接触性、高度传染性疾病。PRRSV主要的感染对象是妊娠母猪和仔猪，妊娠母猪表现为繁殖障碍，而仔猪及其各年龄猪除了严重的呼吸道症状和持续性的感染外，还能引起生长发育缓慢和神经症状。该病1987年在美国首次报道，之后在德国、荷兰、加拿大等国相继出现报道，随后迅速蔓延至亚洲及其它地区，给全球养猪业带来了巨大的损失。当前控制和预防该综合征的主要有效措施还是接种疫苗。目前市面上的PRRSV疫苗主要有灭活苗和弱毒苗，但是这两种疫苗均存在安全性低、效果差等问题。最先用于临床治疗PRRSV的疫苗是灭活苗，使用灭活疫苗后只能产生体液免疫，所以需要二次免疫才能起到一定的保护作用，灭活苗从免疫到产生免疫保护所需要的时间较长，在这期间中和抗体产生的量可能会很少，或者不产生中和抗体，从而发生无效免疫的情况，所以灭活疫苗并不能有效控制PRRSV的发病与传播。相对而言，弱毒苗可快速诱导产生中和抗体，具有免疫时间长、抵抗力强等优点。但是，弱毒苗存在散毒的危险，并且在免疫的过程中可能会出现毒力返强的状况。五味子[Schisandrachinensis(Yurcz.)Baill.]为木兰科五味子属和南五味子属植物的泛称。五味子中含有挥发油、有机酸、维生素、木脂素、三萜、倍半萜及多糖等多种化学成分。木脂素类化合物为五味子中最主要的药理活性成分，五味子属植物中分离鉴定的200个成分中有150个成分是木脂素。木脂素又分为：五味子素(Sehisandrin)、五味子甲素[去氧五味子素、五味子素A(deoxyschisandrin)]、五味子乙素[7-五味子素、五味子素B(SehisandrinB)]、五味子丙素(SehisandrinC)、五味子醇甲、五味子醇乙(schisandrolB)、五味子酯甲(Se-hisantherrinA)、五味子酯乙(SehisantherfinB)、戈米辛A(gomisinA)等。五味子味酸、甘，性温，有收敛固涩、益气生津、补肾宁心的功能，用于久嗽虚喘、梦遗滑精、遗尿尿频、久泻不止、自汗、盗汗、津伤口渴、短气脉虚、内热消渴、心悸失眠等症。五味子在中医临床中应用广泛，由五味子、灵芝、丹参等中药组成五灵丸，有补肝益脾、改善肝血循环、减轻肝纤维化与脂变、调节免疫功能的作用。主治急性病毒性肝炎、慢性迁延性肝炎及其他原因所致的转氨酶升高，总有效率为84.00％～97.90％，但五味子在抗PRRSV病方面尚未见有报道。
技术实现思路
针对上述不足之处，专利技术人经过多方筛查，研究发现，五味子中的五味子乙素对PRRSV有很好的抑制作用，在蓝耳病的防治方面有很好的应用前景。本专利技术的目的是提供五味子乙素在制备抗PRRSV的药物中的应用。本专利技术的另一目的是提供五味子乙素在制备防治猪蓝耳病药物中的应用。本专利技术通过五味子乙素对PRRSV的不同作用方式、不同作用时间分析了五味子乙素对PRRSV的抗病毒作用，并以利巴韦林作为阳性对照药物，利用qRT-PCR、免疫荧光等技术通过各个层面的实验证明了，五味子乙素能够显著抑制PRRSV的复制并直接灭活病毒，抑制PRRSV的吸附和释放，证明五味子乙素在体外具有抗PRRSV作用，有望成为新型的防治猪蓝耳病的药物，在猪蓝耳病的防治方面具有很好的应用前景。因此，本专利技术进行五味子乙素抗PRRSV的实验研究，对PRRSV临床用药上提供有价值的理论依据和参考。附图说明图1为细胞病变观察图。图2为五味子乙素抗PRRSV吸附细胞的作用图图3为五味子乙素抗PRRSV进入细胞的作用图图4为五味子乙素抗PRRSV释放的作用图具体实施方式以下通过具体实施例对本专利技术进行进一步解释说明试验例1一.实验材料(1)五味子乙素(Schisandrin)、利巴韦林(Ribavirin)购自于南通飞宇生物科技有限公司。(2)四甲基偶氮唑蓝(MTT)购自于北京索莱宝科技有限公司。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臜，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。二.五味子乙素和利巴韦林的细胞毒性用含10％FBS的DMEM将细胞瓶中长至单层的细胞消化后稀释至约2×105/mL，加入96孔板,每孔100μL细胞悬液。待细胞长至单层后，弃去旧培养液，第1～10列依次从高浓度至低浓度加入稀释的药液，每个浓度重复4孔，每孔100μL，11～12列加入细胞培养液作为细胞对照。培养72h后，弃去药液，加入MTT溶液，20μL/孔，继续培养4h后，弃去MTT溶液，加入DMSO完全溶解结晶，测OD490nm值。计算公式如下：生长抑制率(％)＝(细胞对照组OD490nm值-药物组OD490nm值)/细胞对照组OD490nm值×100％当抑制率为0时，则该浓度下药物对细胞没有毒性作用，从而确定药物的最大安全浓度，结果如表1所示。表1不同质量浓度药物对Marc-145细胞的抑制率/％注：Schisandrin起始质量浓度为50μg/mL，Ribavirin起始质量浓度为1mg/mL。由表1可知，当五味子乙素浓度为6.25μg/mL及以下时，利巴韦林浓度为15.63μg/mL及以下时，其对Marc-145细胞没有毒性。故后续试验所采用的五味子乙素的起始质量浓度为6.25μg/mL，利巴韦林的起始质量浓度为15.63μg/mL。三.五味子乙素抗PRRSV活性1.五味子乙素对PRRSV的阻断作用Marc-145细胞在96孔板中长至单层后，弃去旧培养液，加入以最大安全质量浓度为起始浓度的中药提取物溶液，每孔100μL，2倍比稀释4个浓度梯度，培养4h后，弃去药液，加入100TCID50PRRSV液，每孔100μL，培养2h后，弃去病毒液，加入含2％FBS的DMEM生长维持液。通过公式计算得到药物对病毒的抑制率。结果如表2所示，可以得到五味子乙素和利巴韦林在最大安全质量浓度时对PRRSV的最大抑制率分别为35.0％、63.3％，五味子乙素对PRRSV的抑制率显著低于利巴韦林(P<0.01)，说明五味子乙素对PRRSV的阻断作用较弱。表2阻断作用方式下五味子乙素对Marc-145细胞的保护率注：上述实验结果均经过三次独立实验，每次实验设立四个重复。C1、C2、C3、C4表示从药物的最大安全浓度开始的2倍倍比稀释的4个不同浓度，所有数据均用平均值±标准差(Mean±S本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.五味子乙素在制备抗PRRSV药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.五味子乙素在制备抗PRRSV药物中的应用。

【专利技术属性】
技术研发人员：朱善元，秦枫，吴植，刘云，谢军，董洪燕，王安平，王永娟，郭长明，吴双，封琦，洪伟鸣，徐海，
申请(专利权)人：江苏农牧科技职业学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32