【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及病毒检测领域，具体地，涉及一种用于检测非洲猪瘟病毒的重组抗原蛋白及其制备方法、elisa试剂盒和应用。
技术介绍
1、非洲猪瘟(african swine fever，asf)是由非洲猪瘟病毒(asf virus，asfv)感染家猪和欧洲野猪后引起的一种高度致死性、接触传染性疾病，其特征是高热、皮肤发绀以及淋巴结和内脏器官严重出血，最急性型和急性型感染死亡率可高达100％。asf最早报道于肯尼亚，此后主要在撒哈拉以南的非洲地区及欧洲的撒丁岛呈地方性流行。自2007年以来，asf在格鲁吉亚、亚美尼亚、阿塞拜疆和俄罗斯等高加索地区暴发，近年来在乌克兰、白俄罗斯、立陶宛、拉脱维亚和波兰也有发生。2018年8月3日，我国辽宁省沈阳市首次确认发生非洲猪瘟疫情，经基因型鉴定，我国流行的asfv分离株与格鲁吉亚毒株同源性最高，为基因ii型。迄今为止，我国已有31个省市报道非洲猪瘟疫情。由于没有安全、有效的商品化疫苗及治疗手段，asf已成为全球养猪业的重大威胁。
2、asfv是非洲猪瘟相关病毒科(asfarviridae)非洲猪瘟病毒属(asfivirus)的成员，也是迄今唯一由节肢动物钝缘蜱传播的dna病毒。其基因组为复杂的双股线状dna病毒。成熟的asfv病毒粒子直径约为175-215nm，具有二十面体立体对称结构，病毒粒子由内而外依次为含病毒的基因组、核芯壳层、含基质蛋白的内脂质层、蛋白衣壳以及外层囊膜构成。衣壳由1892-2172个壳粒组成，每个壳粒直径约13nm，形态类似中空的六棱柱。在中国，目前疫情呈现区域
技术实现思路
1、针对上述现有技术，本专利技术的目的在于针对现有技术中非洲猪瘟病毒的检测方法存在的弊端，从而提供一种以非洲猪瘟重组蛋白作为包被抗原，对asfv抗体的检测采用间接酶联免疫吸附试验(elisa)的血清学诊断方法，提高了检测的特异性和敏感性，为疫情监测提供了有效的检测手段的用于检测非洲猪瘟病毒的重组抗原蛋白及其制备方法、elisa试剂盒。
2、为了实现上述目的，本专利技术提供了一种用于检测非洲猪瘟病毒的重组抗原蛋白，所述重组抗原蛋白的如seq id no:1所示。
3、优选地，所述重组抗原蛋白的编码基因如seq id no:2所示。
4、本专利技术还提供了一种如上述所述的重组抗原蛋白的制备方法，所述制备方法包括：
5、s100、将如seq id no:2所示的编码基因克隆至载体上，构建形成重组表达质粒；
6、s200、将得到的重组表达质粒转化感受态细胞后，经培养纯化，得到重组抗原蛋白。
7、优选地，所述感受态细胞为大肠杆菌。
8、本专利技术还提供了一种用于检测非洲猪瘟病毒的elisa试剂盒，所述elisa试剂盒包括包被有如上述所述的重组抗原蛋白的检测板、酶标抗体和显色剂。
9、优选地，所述酶标抗体选自辣根过氧化物酶标记的羊抗猪igg。
10、优选地，所述显色剂至少包括第一显色液和第二显色液；其中，
11、所述第一显色液包括四甲基联苯胺和溶剂；
12、所述第二显色液包括柠檬酸、磷酸氢二钠、过氧化氢尿素和溶剂。
13、优选地，所述显色剂中所述第一显色液和所述第二显色液的用量的体积比为1:0.8-1.2。
14、本专利技术还提供了一种如上述所述的重组抗原蛋白在检测非洲猪瘟病毒中的应用。
15、优选地，待测血清的稀释度为1:150-300。
16、通过上述技术方案，本专利技术提供的重组抗原蛋白表达可溶，表达量高，在用于检测非洲猪瘟病毒中的特异性强、亲和力高，且与其它相近的猪病毒感染血清学无交叉反应，而其与非洲猪瘟病毒抗体具有极高亲和力使得其能快速且有效地检测出非洲猪瘟病毒，大大提高了检测精确度和检测效率。同时，基于本专利技术的重组抗原蛋白作为包被抗原建立的elisa方法，进一步优化了反应条件，通过elisa检测结果与阴性对照及阳性对照比较，以得到检测结论，该结论可以检测asfv隐性感染猪群，为asfv的临床诊断与预防控制提供参考依据；根据检测结果有选择性的对感染猪群进行扑杀，保护未感染猪群，能减少免疫的盲目性，有效的避免经济损失。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种用于检测非洲猪瘟病毒的重组抗原蛋白，其特征在于，所述重组抗原蛋白的如SEQ ID No:1所示。
2.根据权利要求1所述的重组抗原蛋白，其特征在于，所述重组抗原蛋白的编码基因如SEQ ID No:2所示。
3.一种如权利要求1或2所述的重组抗原蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述感受态细胞为大肠杆菌。
5.一种用于检测非洲猪瘟病毒的ELISA试剂盒，其特征在于，所述ELISA试剂盒包括包被有如权利要求1或2所述的重组抗原蛋白的检测板、酶标抗体和显色剂。
6.根据权利要求5所述的ELISA试剂盒，其特征在于，所述酶标抗体选自辣根过氧化物酶标记的羊抗猪IgG。
7.根据权利要求5或6所述的ELISA试剂盒，其特征在于，所述显色剂至少包括第一显色液和第二显色液；其中，
8.根据权利要求7所述的ELISA试剂盒，其特征在于，所述显色剂中所述第一显色液和所述第二显色液的用量的体积比为1:0.8-1.2。
9.一种如权利要求1或
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，待测血清的稀释度为1:150-300。
...【技术特征摘要】
1.一种用于检测非洲猪瘟病毒的重组抗原蛋白，其特征在于，所述重组抗原蛋白的如seq id no:1所示。
2.根据权利要求1所述的重组抗原蛋白，其特征在于，所述重组抗原蛋白的编码基因如seq id no:2所示。
3.一种如权利要求1或2所述的重组抗原蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述感受态细胞为大肠杆菌。
5.一种用于检测非洲猪瘟病毒的elisa试剂盒，其特征在于，所述elisa试剂盒包括包被有如权利要求1或2所述的重组抗原蛋白的检测板、酶标抗体和显色...
【专利技术属性】
技术研发人员：曹世诺，朱善元，周末，卢会鹏，陈长春，冯琪，
申请(专利权)人：江苏农牧科技职业学院，
类型：发明
国别省市：
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