鸭圆环病毒制造技术

本发明专利技术公开了一种鸭圆环病毒

【技术实现步骤摘要】
鸭圆环病毒I型病毒样颗粒及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及兽用生物
，具体地，涉及鸭圆环病毒
I
型病毒样颗粒及其制备方法和应用
。

技术介绍

[0002]我国是养鸭大国，鸭饲养量占世界的
70
％以上
。
流行病学调查结果显示，鸭圆环病毒
(Duck circovirus
，
DuCV)
感染在我国鸭群中普遍存在，樱桃谷鸭
、
麻鸭
、
番鸭
、
半番鸭等多个品种均易感
。DuCV
感染全年存在，其中冬春季节的感染率高于夏秋两季
。
近几年随着水禽疾病的不断复杂化和我国鸭养殖量的激增，
DuCV
发病率急剧升高并且伴有大量混合感染的现象，导致预防和控制的难度加大，造成了巨大的经济损失
。
[0003]我国于
2007
年由姜世金在对感染传染性浆膜炎病死的鸭进行
PCR
检测时，首次证明中国存在
DuCV
感染，并进行毒株的全基因组测序
。
综合我国
2016
年
‑
2022
年各地区的流行病学调查报告来看，我国
DuCV
的流行率在
2.38
％
‑
58.46
％之间
。
其中华东地区
DuCV
阳性率在r/>42.9
％
‑
58.46
％之间，中南地区
DuCV
阳性率在
2.38
‑
36
％之间，西南地区
DuCV
阳性率在
43.09
％左右，西北地区
DuCV
阳性率在
15.38
％
‑
38.46
％之间
。
由此可见，
DuCV
在中国呈广泛流行，除华北
、
东北地区目前尚未找寻到流行病学调查资料，其他地区均存在不同程度的
DuCV
流行，以华东地区最为严重，对
DuCV
的防控存在一定难度
。
[0004]病毒学方面，
DuCV
属于圆环病毒科圆环病毒属，病毒颗粒为圆形，外无囊膜，
20
面体对称，病毒粒子为直径约为
15nm
～
16nm
的单链
DNA
病毒，是已知的最小的动物病毒之一，可以通过水平和垂直方式传播
。DuCV
基因组长约为
2.0kb
，有两个开放的阅读框，编码复制蛋白和衣壳蛋白
。DuCV
可分为
DuCV
‑1和
DuCV
‑2两种不同的基因型
。
[0005]病理学方面，
DuCV
主要通过侵入宿主的免疫系统导致宿主机体免疫力低下引起免疫抑制，并出现细菌及病毒的多重继发性感染和混合感染
。
鸭群在临床上表现为羽毛杂乱，生长迟缓，发育不良，淋巴细胞减少
、
坏死和法氏囊组织细胞增生等
。
[0006]诊断方面，目前尚未发现可以体外培养鸭圆环的细胞系或培养方法，无法对鸭圆环病毒进行分离培养，导致对于其病原学特征的研究有一定的局限性
。
对于鸭圆环病毒感染的诊断主要通过实验室方法，常用方法包括荧光定量
PCR、LAMP(
环介导等温扩增法
)
及间接
ELISA(
酶联免疫吸附试验
)。
其中间接
ELISA
是利用鸭圆环病毒的
Cap
抗原与感染鸭血清中特异性抗体结合的特性，对抗原进行定量或定性检测的方法，适合大批量样品同时检测
。
[0007]预防及治疗方面，目前世界上尚无治疗鸭圆环病毒感染疾病的特效药物，故现在针对鸭圆环病毒还是以预防为主要手段
。
疫苗是预防鸭圆环病毒感染的关键策略，目前鸭圆环病毒的疫苗主要为编码鸭圆环病毒
Cap
基因的
DNA
疫苗；原核表达的
Cap
蛋白疫苗
。
然而，目前这些疫苗并不能提供完全的保护力，因此亟待开发具有安全
、
高效特点的新型疫苗
。
[0008]病毒样颗粒
(virus
‑
like particles
，
VLPs)
是由病毒的一个或多个结构蛋白
(
如核衣壳或囊膜蛋白
)
在细胞中或体外自动组装形成的类似野生病毒的颗粒，由于不含有病
毒的基因组，因此无法自主复制，
VLPs
疫苗在安全性方面有着极大优势
。
与亲本病毒一样，
VLPs
可以同时诱导细胞介导的免疫反应和体液免疫反应
。VLPs
较小的尺寸和高度有序的重复结构，使得它们可以自由进入和被动引流到淋巴结，并有利于抗原呈递细胞
(antigen
‑
presenting cells
，
APC)
的摄取，如
B
细胞
、
巨噬细胞和树突状细胞此外
。
目前已经有一些基于
VLPs
开发的商用疫苗成功上市，并且更多基于
VLPs
的候选疫苗正处于开发或临床验证阶段，如流感病毒，诺瓦克病毒，埃博拉病毒，马尔堡病毒，丙型肝炎病毒，人类免疫缺陷病毒
(human immunodeficiency virus
，
HIV)
和疟疾
。
[0009]综上，目前尚未有商品化的鸭圆环病毒疫苗，主要原因在于该病毒的体外大量培养存在技术瓶颈
。
而
VLPs
的制备不仅可以避免这一技术困难，还可以作为一种安全
、
高效的新型疫苗
。
因此，开发一种能够便捷和低成本地表达与纯化
DuCV Cap
蛋白，并在体外高效自组装成
VLPs
的方法是本专利技术亟需解决的问题
。

技术实现思路

[0010]针对上述现有技术，本专利技术的目的在于提供一种基于鸭圆环病毒
I
型的核衣壳蛋白的原核表达
、
纯化和体外自组装，以相对简单的步骤即可实现高效组装的鸭圆环病毒
I
型病毒样颗粒的方法，为新型鸭圆环病毒疫苗的开发提供前期技术基础
。
[0011]为了实现上述目的，本专利技术提供了一种鸭圆环病毒
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种鸭圆环病毒
I
型病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：将核衣壳蛋白的编码基因通过载体的构建
、
转化感受态细胞后诱导表达和离心纯化后，经过自组装得到鸭圆环病毒
I
型病毒样颗粒；其中，所述核衣壳蛋白的氨基酸序列如
SEQ ID No:1
所示；载体的构建中采用的载体为
pColdI
载体
。2.
根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述核衣壳蛋白的编码基因的核苷酸序列如
SEQ ID No:2
所示
。3.
根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述感受态细胞为
BL21
感受态细胞
。4.
根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述离心纯化过程具体包括：
S100、
向表达后的感受态细胞中加入裂解液进行裂解，超声破碎，得到破碎后的裂解菌液；
S200、
将破碎后的裂解菌液离心后，取沉淀；
S300、
将得到的沉淀采用重悬液溶解，得到含有核衣壳蛋白的重悬液；
S400、
将含有核衣壳蛋白的重悬液通过脱脲复性，得到纯化后的核衣壳蛋白
。5.
根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述裂解液至少包括
NaH2PO4、NaCl、1
‑
甲酰基咪唑
、
苯甲基磺酰氟
、
二硫苏糖醇和聚乙二醇辛基苯基醚；且，所述
NaH2PO4的含量为
40
‑
60mmol/L
，所述
NaCl
的含量为
280
‑<...

【专利技术属性】
技术研发人员：雷昕诺，吴双，朱善元，张力，朱睿，卢会鹏，刘雨琪，林梦舟，刘文泽，吴珊珊，
申请(专利权)人：江苏农牧科技职业学院，
类型：发明
国别省市：