乙型肝炎病毒核心抗体IgM化学发光免疫分析测定试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种乙型肝炎病毒核心抗体ＩｇＭ化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法，属于免疫诊断技术领域。所述试剂盒主要由乙型肝炎病毒核心抗体ＩｇＭ阴阳性对照品，抗人ＩｇＭ（μ链）包被的载体，乙型肝炎病毒核心抗体酶标记物，中和抗原，化学发光底物及浓缩洗涤液组成。所述试剂盒的制备方法包括以下步骤：以乙型肝炎病毒核心抗体ＩｇＭ阴性、阳性人血清配制阴阳性对照品；以抗人ＩｇＭ（μ链）包被载体；用酶标记乙型肝炎病毒核心抗体；配制中和抗原；配制酶所作用的化学发光底物；配制浓缩洗涤液，然后分装上述阴阳性对照品、包被载体、酶标记物、中和抗原、化学发光底物和浓缩洗涤液半成品，最后组装为成品。经过实验室及临床研究，显示本发明专利技术试剂盒具有较高的特异性、敏感性和重复性，为临床诊断、各级血站、采浆站和科研工作提供了一种非常有价值的检测手段。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及免疫诊断
，具体地，本专利技术提供了一种乙型肝炎病毒核 心抗体IgM (抗HBc-IgM)化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法。
技术介绍
乙型肝炎是一种发病率较高，对人类有着巨大危害的传染性疾病。机体感染 乙型肝炎病毒(HBV)后，体液免疫反应首先产生以IgM为主的免疫球蛋白，随 后IgM抗体滴度下降，IgG效价迅速上升。因此，抗HBc-IgM的检测可作为HBV 感染早期诊断的指标，尤其是对乙肝表面抗原(HBsAg)阴性的急性肝炎病人有 鉴别诊断意义。同时抗HBc-IgM与HBV在体内活动性复制成正相关，抗HBc-IgM 阳性提示患者近期有乙型肝炎病毒感染或慢性乙型肝炎患者的乙型肝炎病毒有活 动性复制，患者血液有很强的传染性。有报道指出，在急性乙型肝炎病毒感染后 抗HBc-IgM可持续存在多年，在慢性乙型肝炎病程中，抗HBc-IgM的出现与病 情急性活动的高峰一致或者稍晚，并认为随着病情的控制而好转，部分患者的抗 HBc-IgM可能阴转，所以抗HBc-IgM阳性还要结合临床症状具体分析。随着医 学检验水平的提高，对乙肝患者进行抗HBc-IgM的检测对于乙肝的分型及治疗有 着重要的意义。目前用于^r测乙型肝炎病毒核心抗体IgM的免疫方法主要有酶免疫测定 (enzyme immunoassay, EIA )、放射免疫测定(radioimmunoassay, RIA )、免疫萸光 测定(enzyme-linked fluorescence assay, ELFA )、微粒子酶免发光分析(microparticle enzyme immunoassay, MEIA)以及直接标记化学发光免疫效']定(chemiluminescence immunoassay, CLIA)。这些超微量检测技术的基本理论大体相同，但是所用示踪剂 及所发出的信号各不相同。根据大量的试验结果及临床应用资料，从实用性、稳定性、准确性及发展前景来看，依次为化学发光免疫分析、荧光免疫分析、放 射免疫分析以及酶免疫分析。放射免疫分析技术因其使用放射性元素作为标记物，因此对环境有一定污染 性，并存在操作复杂，测定结果不稳定，试剂保存时间短等缺点。酶免疫分析法 灵敏度低，影响因素较多，易造成假阴性和假阳性。化学发光免疫分析法是一种 较先进而有效的方法，可使检测灵敏度达到10"s摩尔水平，而且检测范围可达6 个数量级，又因为酶标记物稳定，可长期使用，因而得到了越来越多的关注。用酶促化学发光免疫分析检测乙型肝炎病毒核心抗体IgM是先进而有效的方 法，有助于促进化学发光免疫分析技术在临床检验、检测中的应用与发展。
技术实现思路
本专利技术将化学发光技术与乙型肝炎病毒核心抗体IgM的免疫分析有效结合，通 过大量的实验冲企^r及临床研究表明本专利技术的试剂盒具有较高的特异性、敏感性和 重复性，为临床诊断、各级血站、采浆站和科研工作提供了一种非常有价值的检 测手段。本专利技术的目的是提供一种乙型肝炎病毒核心抗体IgM的化学发光免疫分析测 定试剂盒及其制备方法。根据本专利技术的试剂盒包括乙型肝炎病毒核心抗体IgM阴阳性对照品；抗人 IgM包被的载体；酶标记的乙型肝炎病毒核心抗体；中和抗原；上述酶所作用的 化学发光底物和浓缩洗涤液。才艮据本专利技术的试剂盒，其中，所述乙型肝炎病毒核心抗体IgM阳性对照品以 新生牛血清为基质；所迷抗人IgM包被的载体为微孔板或塑料管；所迷标记 乙型肝炎病毒核心抗体的酶为碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶；所述中和抗原为 乙肝病毒核心抗原；所述浓缩洗涤液为含吐温20的Tris-HCl緩冲液或含吐温 20的磷酸盐緩冲液(PBST)。根据本专利技术的试剂盒，所述碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶标记乙型肝炎 病毒核心抗体的工作浓度为1: 1000-5000，其中，碱性磷酸酶稀释液采用的是含 10%新生牛血清，0.1%生物防腐剂Proclin300 , 150mM NaCl的0.10M Tris-HCl 緩冲液(pH7.5);辣根过氧化物酶稀释液采用的是含20%新生牛血清，0.1%生物 防腐剂Proclin300的0.02M磷酸盐緩冲液(pH7.4 )。所述乙肝病毒核心抗原的工 作浓度为1: 4000-9000,其中所用稀释液同上所述。根据本专利技术的试剂盒，其中，所述化学发光底物为碱性磷酸酶作用的底物或 辣根过氧化物酶作用的底物，其中，碱性磷酸酶作用的底物可以为(金刚烷)-l,2-二 氧乙烷、3-(2'-螺旋金刚烷)-4-曱氧基-4-(3"-磷酰氧基)苯基-1, 2-二氧乙烷、CSPD 或CDP- Star;辣根过氧化物酶作用的底物包含A液和B液，其中，A液是0.2M pH8.7硼酸-硼砂緩冲液，包括10mM鲁米诺、0.3mM4-羟基联苯、0.05mM 4-碘苯 硼酸；B液是0.2MpH7.2磷酸盐緩冲液，包括3.5mM过氧化脲、0.1%Tween20。根据本专利技术制备上述试剂盒的方法包括以下步骤1)以乙型肝炎病毒核心抗 体IgM阴性、阳性人血清配制阴阳性对照品；2)以抗人IgM包被载体；3)用 酶标记乙型肝炎病毒核心抗体；4)配制中和抗原；5)配制酶所作用的化学发光 底物；6)配制浓缩洗涂液；7)分装上述阴阳性对照品、包被载体、酶标记物、 中和抗原、化学发光底物和浓缩洗涤液；8)组装为成品。根据本专利技术的方法，抗人IgM包被的栽体为微孔板或塑料管；根据本专利技术的方法，抗人IgM包被载体是通过直接物理吸附法将抗人IgM包 被在载体上；根据本专利技术的方法，酶标记乙型肝炎病毒核心抗体中的酶可以为碱性磷酸 酶或辣根过氧化物酶。如用碱性磷酸酶进行标记则采用的是戊二醛法；如用辣根 过氧化物酶进行标记则采用改良的过硤酸钠法。根据本专利技术的方法，所述化学发光底物可以为碱性磷酸酶作用的底物或辣根 过氧化物酶作用的底物，其中，碱性磷酸酶作用的底物可以为(金刚烷)-l,2-二氧乙 烷、3-(2'-螺旋金刚烷)-4-曱氧基-4-(3"-磷酰氧基)苯基-l, 2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star;辣根过氧化物酶作用的底物包含A液和B液，其中，A液是0.2M pH8.7硼 酸-硼砂缓冲液，包括10mM鲁米诺、0.3mM4-鞋基联苯、0.05mM 4-碘苯硼酸；B 液是0.2M pH7.2磷酸盐緩冲液，包括3.5mM过氧化脲、0.1% Tween20。具体的上述试剂盒可以包括抗HBc-IgM阴阳性对照品、抗人IgM包被板、酶 标记物、中和抗原、化学发光底物与浓缩洗涤液等。其中，所述抗HBc-IgM阳性 对照的原料为抗HBc-IgM阳性人血清；抗人IgM包被板为48或96孔的微孔板 条；标记抗HBc-IgM的酶为辣根过氧化物酶；中和抗原为乙肝核心抗原；化 学发光底物为鲁米诺体系；浓缩洗涤液为20倍PBST洗液。本专利技术"乙型肝炎病毒核心抗体IgM化学发光免疫分析测定试剂盒，，采用的 是捕获法反应模式，既有效地利用了化学发光技术原理、又确保了检测的灵敏性。 它具有特异性强，重复性好、稳定等优点，且各项指标均达到同类试剂盒的分析 水平，为临床提供了一种检测乙肝病毒核心抗体IgM的更准确、简便、快速的方 法，有较好的临床应用价值。具体实施例方式实施例1制备本专利技术的乙型肝炎病毒核心抗体IgM化学发本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种乙型肝炎病毒核心抗体ＩｇＭ化学发光测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒主要由乙型肝炎病毒核心抗体ＩｇＭ阴阳性对照品；抗人ＩｇＭ包被的载体；酶标记的乙型肝炎病毒核心抗体；中和抗原；上述酶所作用的化学发光底物；以及浓缩洗涤液组成。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张黎，应希堂，胡国茂，郑金来，唐宝军，张坤，
申请(专利权)人：北京科美东雅生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]