一种免疫层析试纸条及制备方法技术

本发明专利技术属于免疫检测技术领域，具体涉及一种免疫层析试纸条及制备方法。本发明专利技术通过制备DON单克隆抗体胶体金探针和FB

【技术实现步骤摘要】
一种免疫层析试纸条及制备方法
本专利技术属于免疫检测
，具体涉及一种免疫层析试纸条及制备方法。
技术介绍
脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）属于单端孢霉烯族化合物，是镰刀菌产生的有毒次级代谢产物。伏马菌素（FB1）一种霉菌毒素，是由串珠镰刀菌产生的水溶性代谢产物。DON及FB1真菌毒素广泛存在于谷物粮食中，具有致畸、致癌、免疫抑制毒性、神经毒性等作用，它们不仅造成农作物减产等巨大损失，而且对人和动物的健康构成极大的威胁。同时检测和测定这两种真菌毒素对食品安全和生命体的健康都具有重要的意义。目前检测真菌毒素常用的方法有仪器分析法和免疫分析法，如薄层色谱（TLC）、高效液相色谱-质谱（HPLC-MS）和酶联免疫吸附试验（ELISA）。与TLC和HPLC-MS相比，免疫分析法具有快速、低成本的特点，可实现对大量样品的高通量现场筛选。然而，ELISA有其自身的缺陷，如操作过程比较复杂，检测时间长，需配套酶标仪，无法实现现场检测。急需一种更为简单快捷的免疫检测方法。胶体金免疫层析试纸条检测是一种以胶体金作为示踪标记物应用于抗原抗体的一种新型免疫标记技术，具有简单、快速、准确等优点。但是目前商品化的胶体金免疫层析试纸条检测绝大多数是单一、定性检测。即使进行了定量分析，使用的也是商用仪器，不利于偏远地区的检测，而且对于同时检测DON和FB1的试纸条的报道也很有限。据报道来看，检测DON和FB1的试纸条灵敏度都很低。目前，利用胶体金免疫层析试纸条同时检测DON和FB1的方法及试纸条仍有待改进。专利技术内容本专利技术旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本专利技术提出了一种胶体金免疫层析试纸条以及制备试纸条的方法。利用本专利技术制备的试纸条可同时、准确、有效检测样品中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）和伏马菌素B1（FB1）的含量，实现DON和FB1的定性、定量检测，且检测快速、灵敏度高。为实现本专利技术的目的，本专利技术采用如下技术方案：根据本专利技术的某一具体实施方案，本专利技术提供了一种免疫层析试纸条，包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜（NC膜）、吸水垫和底板；所述结合垫装载有两种胶体金探针，所述胶体金探针分别为DON单克隆抗体胶体金探针和FB1单克隆抗体胶体金探针；所述硝酸纤维素膜上的设有检测线和质控线，所述检测线有两条，一条检测线包被有DON-BSA，另一条检测线包被有FB1-BSA。所述DON单克隆抗体胶体金探针中的抗体为DON-BSA，所述FB1单克隆抗体胶体金探针中的抗体为FB1-BSA。所述DON-BSA的浓度为0.1~0.2mg/mL，所述FB1-BSA的浓度为0.05~0.1mg/mL。所述质控线上包被有GAM-IgG；所述GAM-IgG的浓度为0.2mg/mL。根据本专利技术的某一具体实施方案，本专利技术提供了一种免疫层析试纸条的制备方法，包括以下步骤：（1）制备胶体金颗粒溶液：酸洗后的烧瓶中加入99mL超纯水和1mL1%氯金酸溶液，配制成100mL0.01%氯金酸水溶液，加热煮沸后在持续搅拌的情况下加入1mL柠檬酸三钠溶液，继续搅拌，当溶液完全变为紫红色时，继续反应5min后停止加热，补水至100mL，冷却至室温，2-8℃保存，得到胶体金颗粒溶液；（2）将DON单克隆抗体和FB1单克隆抗体标记在步骤（1）中的胶体金颗粒上，制备得到DON单克隆抗体胶体金探针和FB1单克隆抗体胶体金探针，分别将得到的探针喷涂在结合垫上；（3）在硝酸纤维素膜上设置两条检测线和一条质控线，其中一条检测线包被有DON-BSA，另一条检测线包被有FB1-BSA，所述质控线包被有GAM-IgG；（4）将步骤（3）中的硝酸纤维素膜粘贴在底板上，硝酸纤维膜的一端有结合垫、样品垫，硝酸纤维素膜的另一端粘贴有吸水垫；相邻垫之间部分重叠，组装得到所述免疫层析试纸条。所述步骤（1）中胶体金颗粒的直径为18~22nm；所述步骤（2）中所述单克隆抗体胶体金探针的喷涂量均为47~49μL/cm2。所述步骤（3）中检测线与质控线相互平行，相距5～8mm。所述步骤（3）中样品垫与结合垫重合1~3mm，吸水垫与硝酸纤维素膜上部重叠1~2mm。根据本专利技术的某一具体实施方案，本专利技术还提供了一种定性定量检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇与伏马菌素B1的方法，包括如下步骤：（1）定性检测：在权利要求1~5中任一项所述免疫层析试纸条的样品垫上加入检测样本，反应3-5min后观察显色情况；当质控线、DON检测线、FB1检测线均显红色时表示被测样品中含有DON及FB1；当质控线显红色，DON检测线或FB1检测线仅有一条显红色时，表示被测样品中对应含有DON或FB1中的一种；当仅有质控线显红色，DON检测线和FB1检测线均不显红色时表示被测样品中不含有待检物DON或FB1或者待检物含量较低，无法检出，视作不存在；当质控线不显颜色表示试纸条无效；（2）定量检测：十分钟内用手机在暗盒中拍下试纸条显色结果，并用Alphaview软件分析，根据标准曲线得到检测样本中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇和/或伏马菌素B1的含量。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术采用成本较低的胶体金作为抗体标记物，同时对脱氧雪腐镰刀菌烯醇和伏马菌素B1进行快速检测，硝酸纤维素膜同时包被两条检测线，通过肉眼比较显色的深浅，可同时对两种真菌毒素进行快速定性检测，同时，可用特定软件进行定量检测。所制备的层析试纸条具有良好的灵敏度和稳定性且操作简便、快速且灵敏度高，所制备的同时检测DON、FB1的试纸条通过定量检测得出的最低检测限分别为3.94ng/mL和2.65ng/mL。成本低，特别适用于现场的快速诊断。易于推广、拥有广阔的市场前景和较大的经济社会效益。附图说明图1是试纸条的结构示意图；图2是试纸条显示的显色结果图；图3是制备的胶体金免疫层析试纸条检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇的标准曲线图；图4是制备的胶体金免疫层析试纸条检测伏马菌素B1的标准曲线图；图5是所制备的胶体金试纸条稳定性的结果图。具体实施方式本专利技术公开了一种同时检测DON、FB1的免疫层析试纸条及其制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术所述同时检测DON、FB1的免疫层析试纸条已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述同时检测DON、FB1的免疫层析试纸条进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。以下就本专利技术所提供的一种同时检测DON和FB1的免疫层析试纸条做进一步说明。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。材料与试剂：牛血清白蛋白偶联呕吐毒素（DON-B本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免疫层析试纸条，包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和底板，其特征在于，所述结合垫装载有两种胶体金探针，所述胶体金探针分别为DON单克隆抗体胶体金探针、FB

【技术特征摘要】
1.一种免疫层析试纸条，包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和底板，其特征在于，所述结合垫装载有两种胶体金探针，所述胶体金探针分别为DON单克隆抗体胶体金探针、FB1单克隆抗体胶体金探针；所述硝酸纤维素膜上的设有检测线和质控线，所述检测线有两条，一条检测线包被有DON-BSA，另一条检测线包被有FB1-BSA。


2.根据权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述DON单克隆抗体胶体金探针中包被有胶体金标记的DON单克隆抗体，所述FB1单克隆抗体胶体金探针包被有胶体金标记的FB1单克隆抗体。


3.根据权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征在于，检测线中所述DON-BSA的浓度为0.1~0.2mg/mL，所述FB1-BSA的浓度为0.05~0.1mg/mL。


4.根据权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征在于，质控线上包被有GAM-IgG；所述GAM-IgG的浓度为0.2mg/mL。


5.一种免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
（1）制备胶体金颗粒溶液；
（2）分别将DON单克隆抗体和FB1单克隆抗体标记在步骤（1）中的胶体金颗粒上，制备得到DON单克隆抗体胶体金探针和FB1单克隆抗体胶体金探针，分别将得到的探针喷涂在结合垫上；
（3）在硝酸纤维素膜上喷涂两条检测线和一条质控线，其中一条检测线包被有DON-BSA，另一条检测线包被有FB1-BSA，所述质控线包被有GAM-IgG；
（4）将步骤（3）中的硝酸纤维素膜粘贴在底板上，硝酸纤维膜的一端有结合垫、样品垫，硝酸纤维素膜...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘振江，王欣蔚，冯建坤，郭艳国，杜道林，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32