一种促进间充质干细胞分化为成软骨细胞的方法技术

一种促进间充质干细胞分化为成软骨细胞的方法，涉及干细胞领域，具体涉及一种间充质干细胞分化为成软骨细胞的方法。是要解决现有间充质干细胞分化成软骨细胞的方法软骨细胞数量少，繁殖能力低的问题。方法：一、复苏P8代脐带来源间充质干细胞，采用含维生素D、维生素A和EGF的完全培养基培养，消化，传代，获得P10代脐带间充质干细胞；二、取P10代脐带间充质干细胞，清洗，取样进行细胞计数，采用含维生素D、维生素A和EGF的完全培养基进行培养；次日更换培养基，进行分化培养；用含维生素D、维生素A和TGF‑β1的分化基础培养基；培养13‑15天，即完成。本发明专利技术应用于间充质干细胞分化成软骨细胞领域。

【技术实现步骤摘要】
一种促进间充质干细胞分化为成软骨细胞的方法
本专利技术涉及干细胞领域，具体涉及一种间充质干细胞分化为成软骨细胞的方法。
技术介绍
间充质干细胞是细胞生物学中干细胞家族中的重要组成成员，其来源于发育早期的胚胎的中胚层和外胚层，其最初在人群的骨髓中发现，主要临床特征为具有自我更新、多向分化、造血支持、免疫调控等特点，其临床使用越来越引起人群的重视。在体内或体外一定的诱导条件下可分化为脂肪、肌肉、心肌、肌腱、韧带、肝、骨、软骨、内皮等多种人体组织细胞，采用连续传代培养以及冷冻保存的方法可依然具有多向分化的潜能，临床常作为理想组织器官损伤修复，尤其是神经损伤，临床研究证实，采用间充质干细胞还可以治疗多种血液系统疾病、心血管疾病。软骨细胞在诱导过程分三个阶段：第一阶段MSCs形成高密度的细胞聚集体，停止增殖，分泌丰富的透明质酸和I型胶原，组织特异性的转录因子如Sox-9和结构蛋白开始积累；第二个阶段MSCs分化为软骨前体祖细胞，聚集的细胞重新增殖，产生初期胞外基质，开始软骨分化，此过程受到Sox-9、Sox-5、Sox-6、FGF、TGF-β1信本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种促进间充质干细胞分化为成软骨细胞的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：/n一、复苏P8代脐带来源间充质干细胞，采用无血清培养基进行培养，次日进行换液，换液所用培养基为含有终浓度0.8-1.5mol/L维生素D、1.5-2.5mol/L维生素A和90-110ng/mlEGF的完全培养基，消化，传代，最终获得P10代脐带间充质干细胞；/n二、取步骤一培养得到的P10代脐带间充质干细胞，清洗，取样进行细胞计数，调整细胞浓度至1×10

【技术特征摘要】
1.一种促进间充质干细胞分化为成软骨细胞的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
一、复苏P8代脐带来源间充质干细胞，采用无血清培养基进行培养，次日进行换液，换液所用培养基为含有终浓度0.8-1.5mol/L维生素D、1.5-2.5mol/L维生素A和90-110ng/mlEGF的完全培养基，消化，传代，最终获得P10代脐带间充质干细胞；
二、取步骤一培养得到的P10代脐带间充质干细胞，清洗，取样进行细胞计数，调整细胞浓度至1×104个/ml；
在24孔板中按照细胞浓度1×104个/孔接种P10代脐带间充质干细胞，采用含有终浓度0.8-1.5mol/L维生素D、1.5-2.5mol/L维生素A和90-110ng/mlEGF的完全培养基进行细胞培养；
次日更换培养基，即为第一次换液，进行分化培养；第一次换液所用培养基为含有终浓度1.8-2.2mol/L维生素D、3.5-4.5mol/L维生素A和190-210ng/mlTGF-β1的分化基础培养基；
之后每3天换一次液，第二次换液所用培养基为含有终浓度1.8-2.2mol/L维生素D、3.5-4.5mol/L维生素A和390-410ng/mlTGF-β1的分化基础培养基，之后换液所用培养基均与第二次换液所用培养基相同；
培养13-15天，即完成成软骨细胞的分化培养。


2.根据权利要求1所述的一种促进间充...

【专利技术属性】
技术研发人员：王灵娟，张怡，刘艳青，
申请(专利权)人：天晴干细胞股份有限公司，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23