用于生产冰核蛋白的重组大肠杆菌及其构建方法与应用技术

本发明专利技术提供一种用于生产冰核蛋白的重组大肠杆菌及其构建方法与应用。所述重组大肠杆菌是利用基因工程手段将冰核蛋白基因或冰核蛋白基因表达盒整合到大肠杆菌的染色体上构建得到的。本发明专利技术通过将冰核蛋白基因整合到大肠杆菌的染色体中，并除去抗性，得到可用于生产冰核蛋白，且不含任何已知抗生素抗性的重组大肠杆菌。该重组大肠杆菌表达的冰核蛋白可以在稀释为万分之一的水中显著提高冰点，在过冷至‑2℃左右即可结冰，该重组大肠杆菌具有很好的成冰核活性，应用前景广阔。

【技术实现步骤摘要】
用于生产冰核蛋白的重组大肠杆菌及其构建方法与应用
本专利技术属于基因工程领域，具体地说，涉及一种用于生产冰核蛋白的重组大肠杆菌及其构建方法与应用。
技术介绍
冰核蛋白最早发现于丁香假单胞菌(Psudomonassyringae)中，冰核蛋白的存在使得该菌能够在过冷水中诱导形成冰晶。随后，在欧文氏菌属(Erwinia)和黄单胞菌属(Xanthomonas)中的一些菌种也发现存在冰核蛋白。表达有冰核蛋白的细菌可以在较高的温度(-2～-5℃)下形成规则、细腻、微小异质冰晶的能力。因此，冰核蛋白可以用于人工造雪，食品冷冻浓缩和冻干等。丁香假单胞菌是一种植物病害菌，该菌引起的植物病害发生率位居十大细菌性植物病害之首。如果直接将该菌应用于人工造雪，可能会引起造雪地附近的植物病害。利用大肠杆菌重组表达冰核蛋白则可以很好地解决这个问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于生产冰核蛋白的重组大肠杆菌及其构建方法与应用。为了实现本专利技术目的，第一方面，本专利技术提供一种用于生产冰核蛋白的重组大肠杆菌，所述重组大肠杆菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于生产冰核蛋白的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌是利用基因工程手段将冰核蛋白基因或冰核蛋白基因表达盒整合到大肠杆菌的染色体上构建得到的；/n其中，所述冰核蛋白基因来自于丁香假单胞菌(Psudomonas syringae)，或者泛菌属(Pantoea sp.)、黄单胞菌属(Xanthanmonas sp.)中的菌种。/n

【技术特征摘要】
1.用于生产冰核蛋白的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌是利用基因工程手段将冰核蛋白基因或冰核蛋白基因表达盒整合到大肠杆菌的染色体上构建得到的；
其中，所述冰核蛋白基因来自于丁香假单胞菌(Psudomonassyringae)，或者泛菌属(Pantoeasp.)、黄单胞菌属(Xanthanmonassp.)中的菌种。


2.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌中不含有抗生素抗性基因。


3.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌的出发菌株为大肠杆菌B系菌株或K12系菌株。


4.根据权利要求3所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌的出发菌株为大肠杆菌BW25113。


5.根据权利要求3所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述冰核蛋白基因表达盒中，所述冰核蛋白基因由阿拉伯糖启动子驱动。


6.根据权利要求1-5任一项所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌是利用CRISPR/Cas9系统将所述冰核蛋白基因或冰核蛋白基因表达盒整合到大肠杆菌基因组中得到的；
其中，所述CRISPR/Cas9系统靶向大肠杆菌galR基因。


7.根据权利要求6所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述CRISPR/Cas9系统中sgRNA作用位点的核酸序列为5′-TTGCACTATGCACAGCCAGC-3′。


8.用于生产冰核蛋白的重组大肠杆菌的构建方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘桂明，张子娟，赖小勤，晏礼明，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11