突变的和遗传修饰的芽孢杆菌属细胞及其用于增加蛋白质产生的方法技术

本公开总体上涉及能够产生增加量的工业相关目的蛋白的新颖的芽孢杆菌属物种突变体。本公开的某些实施例涉及经修饰的芽孢杆菌属物种细胞，所述经修饰的芽孢杆菌属物种细胞包含引入的编码变体GlcT蛋白质的多核苷酸。其他实施例涉及在经修饰的芽孢杆菌属物种(子代)细胞中产生内源和/或异源目的蛋白的方法和组合物，而某些其他实施例涉及编码本公开的变体GlcT蛋白质的核酸序列，特别是多核苷酸可读框(ORF)序列，其载体及其DNA表达构建体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】突变的和遗传修饰的芽孢杆菌属细胞及其用于增加蛋白质产生的方法相关申请的交叉引用本申请要求2018年1月03日提交的美国临时申请号62/613,339的权益，该临时申请通过引用以其全文特此并入。
本公开总体上涉及细菌学、微生物学、遗传学、分子生物学、酶学、工业蛋白质生产等领域。更特别地，本公开的某些实施例涉及能够产生增加量的工业相关目的蛋白的新颖芽孢杆菌属物种(Bacillussp.)突变体。本公开的其他实施例涉及经修饰的芽孢杆菌属物种细胞，所述经修饰的芽孢杆菌属物种细胞包含引入的编码变体GlcT蛋白质的多核苷酸。其他实施例涉及在经修饰的芽孢杆菌属物种(子代)细胞中产生内源和/或异源目的蛋白的方法和组合物，而某些其他实施例涉及编码本公开的变体GlcT蛋白质的核酸序列，特别是多核苷酸可读框(ORF)序列，其载体及其DNA表达构建体。序列表的引用命名为“NB41301_WO_PCT_SEQ.txt”的文本文件序列表的电子提交的内容创建于2018年12月11日，并且大小为137KB，将其通过引用以其全文特此并入。背景本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种亲本地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)细胞的突变体，所述突变体包含编码变体GlcT蛋白质的glcT基因，所述变体GlcT蛋白质在SEQ ID NO:55的氨基酸位置67处包含苯丙氨酸(F)(F67)。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180103 US 62/613,3391.一种亲本地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)细胞的突变体，所述突变体包含编码变体GlcT蛋白质的glcT基因，所述变体GlcT蛋白质在SEQIDNO:55的氨基酸位置67处包含苯丙氨酸(F)(F67)。


2.如权利要求1所述的突变体细胞，其中所述编码SEQIDNO:55的变体GlcT蛋白质的基因包含核酸序列，所述核酸序列包含与SEQIDNO22、SEQIDNO:81或SEQIDNO:56的至少90％序列同一性。


3.如权利要求1所述的突变体细胞，所述突变体细胞包含引入的编码目的蛋白(POI)的多核苷酸。


4.如权利要求3所述的突变体细胞，其中所述引入的编码所述POI的多核苷酸包含有效地连接的并且在编码所述POI的多核苷酸的上游(5′)的SEQIDNO:63的mod-5′-UTR序列。


5.一种遗传修饰的芽孢杆菌属细胞，所述遗传修饰的芽孢杆菌属细胞源自亲本芽孢杆菌属细胞，所述亲本芽孢杆菌属细胞包含编码SEQIDNO:82的野生型GlcT蛋白质的野生型glcT基因，其中所述经修饰的芽孢杆菌属细胞包含编码GlcT蛋白质的经修饰的glcT基因，所述GlcT蛋白质包含与SEQIDNO:55的至少90％序列同一性并且在SEQIDNO:55的位置67处包含苯丙氨酸(F)。


6.如权利要求5所述的经修饰的细胞，其中用glcT-Cas9靶向载体修饰亲本细胞中编码SEQIDNO:82的野生型GlcT蛋白质的野生型glcT基因，其中所述glcT-Cas9靶向载体修饰野生型glcT基因的密码子67，其中经修饰的glcT基因编码GlcT蛋白质，所述GlcT蛋白质包含与SEQIDNO:55的至少90％序列同一性并且在SEQIDNO:55的位置67处包含苯丙氨酸(F)。


7.一种遗传修饰的芽孢杆菌属细胞，所述遗传修饰的芽孢杆菌属细胞包含引入的编码变体GlcT蛋白质的多核苷酸，所述变体GlcT蛋白质包含与SEQIDNO:55的至少90％序列同一性并且在SEQIDNO:55的氨基酸位置67处包含苯丙氨酸(F)(F67)。


8.如权利要求7所述的经修饰的细胞，所述经修饰的细胞进一步包含灭活的编码GlcT蛋白质的内源染色体glcT基因，所述GlcT蛋白质包含与SEQIDNO:82的至少90％序列同一性并且在SEQIDNO:82的氨基酸位置67处包含亮氨酸(L)(L67)。


9.如权利要求7所述的经修饰的细胞，所述经修饰的细胞进一步包含编码SEQIDNO:84的RghR2蛋白质的恢复的rghR2基因(rghR2恢复的)。


10.如权利要求7所述的经修饰的细胞，所述经修饰的细胞包含引入的编码POI的多核苷酸。


11.如权利要求10所述的经修饰的细胞，其中引入的编码所述POI的多核苷酸包含有效地连接的并且在编码所述POI的多核苷酸的上游(5′)的SEQIDNO:63的mod-5′-UTR序列。


12.一种经修饰的芽孢杆菌属细胞，所述经修饰的芽孢杆菌属细胞源自亲本芽孢杆菌属细胞，所述亲本芽孢杆菌属细胞包含编码野生型GlcT蛋白质的glcT基因，所述野生型GlcT蛋白质在SEQIDNO:82的氨基酸位置67处包含亮氨酸(L)(L67)，其中所述经修饰的芽孢杆菌属细胞包含编码变体GlcT蛋白质的经修饰的glcT基因，所述变体GlcT蛋白质在SEQIDNO:55的氨基酸位置67(F67)处包含苯丙氨酸(F)，其中所述经修饰的芽孢杆菌属细胞相对于产生相同目的蛋白(POI)的亲本细胞产生增加量的POI。


13.如权利要求12所述的经修饰的细胞，所述经修饰的细胞包含引入的编码异源POI的DNA构建体，其中所述经修饰的芽孢杆菌属细胞相对于产生相同的异源POI的亲本细胞，产生增加量的所述异源POI。


14.如权利要求12所述的经修饰的细胞，所述经修饰的细胞进一步包含编码SEQIDNO:84的RghR2蛋白质的恢复的rghR2基因。


15.如权利要求13所述的经修饰的细胞，其中引入的编码所述POI的DNA构建体包含有效地连接在所述DNA构建体的上游(5′)的SEQIDNO:63的经修饰的5′-UTR序列。


16.一种分离的多核苷酸可读框(ORF)，所述分离的多核苷酸可读框(ORF)编码变体芽孢杆...

【专利技术属性】
技术研发人员：S·德尔蔡斯，C·M·菲奥雷西，R·L·弗里希，H·O·马森，A·范齐蒙耐德，
申请(专利权)人：丹尼斯科美国公司，
类型：发明
国别省市：美国;US