一种用于表达施式假单胞杆菌肌酐酶的大肠杆菌工程菌制造技术

本发明专利技术涉及一种用于表达施式假单胞杆菌肌酐酶的大肠杆菌工程菌及其构建方法，利用本发明专利技术的大肠杆菌工程菌进行发酵而获得，所述大肠杆菌工程菌是通过将含有如下外源DNA的表达载体转化到大肠杆菌(Escherichiacoli)而获得，所述表达载体为将所述外源DNA克隆至大肠杆菌表达载体pET‑28a(+)，得到的表达载体pET28a‑CRN。本发明专利技术的的重组施式假单胞杆菌肌酐酶大肠杆菌工程菌培养快速简单，诱导条件容易控制，生产成本低，具有工业化生产的潜力。

【技术实现步骤摘要】
一种用于表达施式假单胞杆菌肌酐酶的大肠杆菌工程菌
本专利技术涉及生物工程
，具体是指一种用于表达施式假单胞杆菌肌酐酶的大肠杆菌工程菌。
技术介绍
肌酐酶(creatininase；EC3.5.2.10)是一种水解酶，属于脲酶相关的酰胺水解酶家族，分布于少数几种细菌中。肌酐酶的活性中心含有锌离子，肌酐酶的催化水解合成反应即催化环酰胺肌酐可逆的水解为肌酸。血清中和尿液中肌酐测定可为临床评价肾小球滤过功能提供客观指标，因而是临床上常做的生化检验项目，传统的肌酐测定化学法由于反应特异性差，容易受到样品中的非特异性物质的干扰，正在逐步被酶学方法所取代。肌酐酶作用的底物具有特异性，底物只能是肌酐或者是肌酸，酶法检测肌酐有着反应特异性强，操作简单的优点，而作为其中的一个关键酶，肌酐酶在医学检测上有重要的应用价值。在自然环境中，施式假单胞菌、脲节杆菌和烟草节杆菌等微生物的代谢物中都有发现肌酐酶。目前研究比较多的肌酐酶大多是野生菌中的肌酐酶，但野生菌培养困难，肌酐酶产量低，比酶活低，提纯存在困难。随着酶法检测肌酐试剂盒的开发，对于肌酐酶的需本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于表达施式假单胞杆菌肌酐酶的大肠杆菌工程菌，其特征在于，所述大肠杆菌工程菌是通过将含有如下外源DNA的表达载体转化到大肠杆菌而获得：/n所述外源DNA为施式假单胞杆菌假单胞杆菌肌酐酶的DNA编码序列，所述施式假单胞杆菌肌酐酶的氨基酸序列如Seq No.2所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于表达施式假单胞杆菌肌酐酶的大肠杆菌工程菌，其特征在于，所述大肠杆菌工程菌是通过将含有如下外源DNA的表达载体转化到大肠杆菌而获得：
所述外源DNA为施式假单胞杆菌假单胞杆菌肌酐酶的DNA编码序列，所述施式假单胞杆菌肌酐酶的氨基酸序列如SeqNo.2所示。


2.根据权利要求1所述的一种用于表达施式假单胞杆菌肌酐酶的大肠杆菌工程菌，其特征在于：所述外源DNA序列如SeqNo.1所示。


3.根据权利要求2所述的一种用于表达施式假单胞杆菌肌酐酶的大肠杆菌工程菌，其特征在于：所述表达载体为将所述外源DNA克隆至大肠杆菌表达载体pET-28a(+)，得到的表达载体pET28a(+)-CRN。


4.根据权利要求3所述的一种用于表达施式假单胞杆菌肌酐酶的大肠杆菌工程菌，其特征在于：所述大肠杆菌工程菌是所述表达载体pET28a-CRN后转化到大肠杆菌而得，所述DNA编码序列及其调节基因构成的表达盒整合到大肠杆菌的基因组中。


5.一种用于表达施式假单胞杆菌肌酐酶的大肠杆菌工程菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、编码基因的获取：以施式假单胞杆菌肌酐酶的氨基酸序列为基础，对序列按照大肠杆菌的密码子偏好性进行优化，得到密码子优化的对应编码序列；施式假单胞杆菌假单胞杆菌肌酐酶氨基酸序列如SEQIDNO.2所示，其编码序列如SEQIDNO.1所示；
步骤二、表达载体的构建：将步骤一获取的编码基因克隆至大肠杆菌表达载体pET-28a(+)，得到表达载体pET28a-CRN；
步骤三、表达载体转化及大肠杆菌工程菌获取：将表达载体pET28a-CRN将表达载体pET28a-cre转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，培...

【专利技术属性】
技术研发人员：艾林，贺子桐，郑长龙，
申请(专利权)人：北京达成生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11