【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫学相关。更具体地说，本专利技术涉及结合mmp3蛋白的双特异性抗体及其用途。
技术介绍
1、基质金属蛋白酶3(matrix metallopeptidase 3，mmp3)又称基质溶解素1，是基质金属蛋白酶家族的主要成员之一。mmp3作为基质金属蛋白酶中的一员，能降解细胞外基质和基底膜中的许多组成部分，从而参与肿瘤的发生发展。mmp在肿瘤的侵袭和转移过程中起着极为重要的作用。mmp在正常稳定状态组织中表达量极少，其释放、激活与抑制受到严格的控制，但在肿瘤组织中稳态被打破，表现为肿瘤细胞的浸润和转移。在肿瘤浸润过程中，肿瘤细胞首先与基底膜表面受体如纤维黏连蛋白，然后分泌mmp等降解酶降解基底膜和基质，最终肿瘤细胞沿着基底膜缺损和基质空隙生长。
2、类风湿关节炎(ra)是一种常见的以关节滑膜慢性炎症为主要表现的自身免疫性疾病。ra患者发病2年内会出现关节软骨不可逆的破坏，而mmp3被认为是导致软骨降解的最重要的蛋白酶，在ra早期，ra患者血清中mmp3浓度显著高于正常人，可作为ra早期诊断的重要指标。同时，血清中mmp3的浓度与软骨损伤以及骨侵蚀密切相关，掌握mmp3的浓度动态变化可判断ra的病情进展。
3、双特异性抗体(bispecific antibodies，bsab)是单分子抗体，其兼备两个抗体的抗原结合位点，可以结合两个不同的抗原决定簇，其可以在一个抗原上，也可以在不同的抗原上，而天然抗体只能识别一个抗原表位。双特异性抗体广泛用于临床诊断、影像、疾病预防和肿瘤免疫治疗。目前，双特异性
4、mmp3临床上常用的检测方法有：酶联免疫法(elisa)、胶乳颗粒增强免疫比浊(petia)和胶乳凝集法(ltia)等。elisa检测法，需要消耗大量人力成本，操作过程时间较长，无法开展高通量样本检测。使用petia或ltia，虽然克服了高通量样本检测的问题，但是目前市面现有的胶乳比浊检测试剂，对于低值范围区灵敏度不高，进而影响结果判断。
技术实现思路
1、本专利技术的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。
2、本专利技术还有一个目的是提供一种mmp3双特异性抗体及其用途。
3、为此，本专利技术提供的技术方案为：
4、第一方面，结合mmp3蛋白的双特异性抗体或其功能性片段，包括：
5、特异性识别和结合基质金属蛋白酶3mmp3蛋白的第一功能域，所述第一功能域包括抗mmp3特异性抗体的fv区；以及
6、特异性识别和结合mmp3蛋白的第二功能域，所述第二功能域包括抗mmp3特异性抗体的scfv区。
7、优选的是，所述的结合mmp3蛋白的双特异性抗体或其功能性片段中，所述第一功能域fv的重链可变区vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分别如seq id no:1、2和3所示，所述第一功能域fv的轻链可变区vl cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分别如seq id no:4、5和6所示，
8、所述第二功能域scfv的重链可变区vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分别如seqid no:7、8和9所示，所述第二功能域scfv的轻链可变区vl cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分别如seq id no:10、11和12所示。
9、优选的是，所述的结合mmp3蛋白的双特异性抗体或其功能性片段中，所述第一功能域fv的重链可变区vh的氨基酸序列如seq id no:13所示，所述第一功能域fv的轻链可变区vl的氨基酸序列如seq id no:14所示；
10、所述第二功能域scfv的重链可变区vh的氨基酸序列如seq id no:15所示，所述第二功能域scfv的轻链可变区vl的氨基酸序列如seq id no:16所示。
11、优选的是，所述的结合mmp3蛋白的双特异性抗体或其功能性片段中，所述第二功能域scfv的氨基酸序列如seq id no:17所示，
12、所述第一功能域和所述所述第二功能域的重链可变区和轻链可变区中间的linker为(g4s)n。
13、优选的是，所述的结合mmp3蛋白的双特异性抗体或其功能性片段中，n为3。
14、第二方面，编码任一项所述的mmp3蛋白的双特异性抗体或其功能性片段的基因。
15、第三方面，包括所述基因的重组载体。
16、第四方面，用于快速诊断类风湿关节炎的组合物，其包含任一项所述的mmp3蛋白的双特异性抗体或其功能性片段。
17、第五方面，试剂盒，所述试剂盒包括任一项所述的mmp3蛋白的双特异性抗体或其功能性片段，所述试剂盒是胶乳增强免疫法或化学发光免疫法体外快速检测mmp3试剂盒。
18、第六方面，任一项所述的mmp3蛋白的双特异性抗体于制备类风湿关节炎的早期筛查、治疗疗效监测及预后与复发风险评估药物或试剂盒中的用途。
19、本专利技术至少包括以下有益效果：
20、本专利技术首先筛选出针对mmp3蛋白具有高亲和力的两个单克隆抗体，再通过基因工程手段得到mmp3双特异性抗体，本专利技术的基因重组的mmp3双特异性抗体，及包含mmp3双特异性抗体的试剂盒与两个mmp3单抗联用试剂盒相比，灵敏度更高，检测范围更广，其可用于不同的临床诊断需求。
21、本专利技术的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本专利技术的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
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1.结合MMP3蛋白的双特异性抗体或其功能性片段，其特征在于，包括：
2.如权利要求1所述的结合MMP3蛋白的双特异性抗体或其功能性片段，其特征在于，所述第一功能域Fv的重链可变区VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、2和3所示，所述第一功能域Fv的轻链可变区VL CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ IDNO:4、5和6所示，
3.如权利要求1所述的结合MMP3蛋白的双特异性抗体或其功能性片段，其特征在于，所述第一功能域Fv的重链可变区VH的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示，所述第一功能域Fv的轻链可变区VL的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示；
4.如权利要求1所述的结合MMP3蛋白的双特异性抗体或其功能性片段，其特征在于，所述第二功能域scFv的氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示，
5.如权利要求3所述的结合MMP3蛋白的双特异性抗体或其功能性片段，其特征在于，n为3。
6.编码如权利要求1至5任一项所述的MMP3蛋白的双特异性抗体或其功能性
7.包括权利要求6所述基因的重组载体。
8.用于快速诊断类风湿关节炎的组合物，其包含权利要求1至5任一项所述的MMP3蛋白的双特异性抗体或其功能性片段。
9.试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1至5任一项所述的MMP3蛋白的双特异性抗体或其功能性片段，所述试剂盒是胶乳增强免疫法或化学发光免疫法体外快速检测MMP3试剂盒。
10.如权利要求1至5任一项所述的MMP3蛋白的双特异性抗体于制备类风湿关节炎的早期筛查、治疗疗效监测及预后与复发风险评估药物或试剂盒中的用途。
...【技术特征摘要】
1.结合mmp3蛋白的双特异性抗体或其功能性片段，其特征在于，包括：
2.如权利要求1所述的结合mmp3蛋白的双特异性抗体或其功能性片段，其特征在于，所述第一功能域fv的重链可变区vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分别如seq id no:1、2和3所示，所述第一功能域fv的轻链可变区vl cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分别如seq idno:4、5和6所示，
3.如权利要求1所述的结合mmp3蛋白的双特异性抗体或其功能性片段，其特征在于，所述第一功能域fv的重链可变区vh的氨基酸序列如seq id no:13所示，所述第一功能域fv的轻链可变区vl的氨基酸序列如seq id no:14所示；
4.如权利要求1所述的结合mmp3蛋白的双特异性抗体或其功能性片段，其特征在于，所述第二功能域scfv的氨...
【专利技术属性】
技术研发人员：肖秀孝，许可，刘鹏飞，郑长龙，赵占勇，
申请(专利权)人：北京达成生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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