一种重组FLOD蛋白的大肠杆菌表达方法技术

本发明专利技术属于生物技术和基因工程技术领域，具体方案是先利用大肠杆菌表达系统高效表达重组果糖赖氨酸氧化酶(FLOD)，然后纯化蛋白和酶活性的测定。本发明专利技术构建的FLOD表达体系，提供了原核生物表达稳定性好的重组果糖赖氨酸氧化酶FLOD表达载体的构建方法，并将表达载体导入至大肠杆菌表达宿主中，经诱导发酵表达、两步纯化及鉴定后获得高纯度可溶性的目标重组果糖赖氨酸氧化酶(FLOD)。本方法所采用的大肠杆菌表达系统，具有表达效率高、表达量大、成本低、易操作等特点，所表达的重组果糖赖氨酸氧化酶FLOD纯度高，温度和pH稳定性好等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种重组FLOD蛋白的大肠杆菌表达方法
本专利技术涉及基因工程
，具体是指一种重组FLOD蛋白的大肠杆菌表达方法。
技术介绍
一项我国全国性的调查研究结果：目前中国的糖尿病患者已达到了9200万。这一数字使中国超越印度成为全球糖尿病人数最多的国家。而且，我国还有1.48亿糖尿病患者。作为一种慢性、终身性的疾病，糖尿病不仅会给患者带来生理和心理的痛苦，还会给国家和个人带来巨大的经济负担。随着糖尿病患者人数的增加，血糖检测的试剂也随之增加，降低血糖检测成本可缓解国家和患者的经济负担。人体内葡萄糖与血清蛋白N-末端可发生非酶促糖基化反应，且90％糖基化反应发生在血清蛋白第189位赖氨酸，形成高分子酮胺结构，总称为糖化血清蛋白。90％以上糖化血清蛋白是糖化血清白蛋白(GlycatedAlbumin，GA)，因此糖化血清白蛋白可反映糖化血清蛋白总体水平。糖化白蛋白是反映过去2-3周平均血糖水平的一项指标，比血糖检测“金标准”糖化血红蛋白周期短。果糖赖氨酸氧化酶催化糖化氨基酸变成葡萄糖酮醛、氨基酸和双氧水。在此催化反应液中，加入对白蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组FLOD蛋白的大肠杆菌表达方法，其特征在于，所述表达方法包括重组表达载体构建、转化、目标蛋白诱导表达，步骤如下：/n(1)将FLOD基因插入到表达载体pET28a的多克隆位点，构建重组表达载体质粒pET28a-FLOD；/n(2)将(1)中构建的重组表达载体质粒转入宿主细胞E.coliBL21(DE3)，获得重组菌株；/n(3)对重组菌株进行诱导，表达FLOD蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.一种重组FLOD蛋白的大肠杆菌表达方法，其特征在于，所述表达方法包括重组表达载体构建、转化、目标蛋白诱导表达，步骤如下：
(1)将FLOD基因插入到表达载体pET28a的多克隆位点，构建重组表达载体质粒pET28a-FLOD；
(2)将(1)中构建的重组表达载体质粒转入宿主细胞E.coliBL21(DE3)，获得重组菌株；
(3)对重组菌株进行诱导，表达FLOD蛋白。


2.根据权利要求1所述的一种重组FLOD蛋白的大肠杆菌表达方法，其特征在于：所述FLOD蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。


3.根据权利要求1所述的一种重组FLOD蛋白的大肠杆菌表达方法，其特征在于：所述FLOD蛋白编码基因的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示。


4.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：尚金召，贺子桐，郑长龙，
申请(专利权)人：北京达成生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11