冷蒿萃取物其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及农业生物技术领域，具体涉及冷蒿萃取物及其制备方法和应用。本发明专利技术用超声提取法，以蒸馏水作为提取溶剂，获得具有很好的抗炎作用冷蒿水提物，用不同的极性溶剂萃取冷蒿水提物，确定了冷蒿的正己烷和乙酸乙酯萃取物降低炎症介质NO和炎症因子IL‑6、1L‑1β、TNF‑α的表达与释放，对炎症进行调控。

【技术实现步骤摘要】
冷蒿萃取物其制备方法和应用
本专利技术涉及农业生物
，具体涉及冷蒿萃取物及其制备方法和应用。
技术介绍
炎症，是机体对感染或组织损伤所产生的一种防御措施，可发生在人体的各种组织和器官中，例如常见的肝炎，胃炎，肺炎等。其中细菌的感染或病毒的感染、烧伤和割伤、强酸和强碱腐蚀以及人体的免疫系统失调，都可以引起机体的炎症，将这些因子称为炎症因子。冷蒿(ArtemisiafrigidaWilld)为菊科(Compositae)蒿属(Artemisia)的一种多年生草本植物。冷蒿的总黄酮提取物具有明显的抗炎效果。但冷蒿抗炎作用的有效活性成分及其作用机制尚不清楚。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供冷蒿萃取物。本专利技术的再一目的是提供冷蒿萃取物的制备方法。本专利技术的再一目的是提供上述冷蒿萃取物的应用。根据本专利技术的冷蒿乙酸乙酯萃取物中的抗炎馏分，通过以下步骤制备而得，(1)制备冷蒿水提物，将冷蒿粉碎，超声水提，超声条件：超声功率500W，温度50℃，时间30min，获得的水提物蒸发浓缩备用；(2)萃取，依次以正己烷，分别得到水相、正己烷萃取物，并收集正己烷萃取组分。根据本专利技术的冷蒿乙酸乙酯萃取物中的抗炎馏分，通过以下步骤制备而得，(1)制备冷蒿水提物，将冷蒿粉碎，超声水提，超声条件：超声功率500W，温度50℃，时间30min，获得的水提物蒸发浓缩备用；(2)萃取，依次以正己烷、氯仿、乙酸乙酯萃取冷蒿水提物，分别得到水相、正己烷萃取物、氯仿相萃取物、乙酸乙酯萃取物，并收集乙酸乙酯萃取组分。根据本专利技术的本专利技术的冷蒿乙酸乙酯萃取物中的抗炎馏分，其中，在步骤(1)中，水与冷嵩粉的比例为40:1mL/g。根据本专利技术的本专利技术的冷蒿萃取物中的抗炎馏分，其中，分别以正己烷、氯仿、乙酸乙酯萃取三次。根据本专利技术的本专利技术的冷蒿萃取物，其中，加入与待萃取的冷蒿水提物等体积的正己烷、氯仿、乙酸乙酯。根据本专利技术的冷蒿萃取物的制备方法包括以下步骤：(1)制备冷蒿水提物，将冷蒿粉碎，超声水提，超声条件：超声功率500W，温度50℃，时间30min，获得的水提物蒸发浓缩备用；(2)萃取，依次以正己烷萃取冷蒿水提物，分别得到水相、正己烷萃取物，并收集正己烷萃/乙酸乙酯萃取组分。根据本专利技术的冷蒿萃取物的制备方法，其中，步骤(2)中，依次以正己烷、氯仿、乙酸乙酯萃取冷蒿水提物，分别得到水相、正己烷萃取物、氯仿相萃取物、乙酸乙酯萃取物，并收集正己烷和乙酸乙酯萃取组分。本专利技术还提供了上述冷蒿萃取物用于制备抑制炎症药剂的应用。本专利技术用超声提取法，以蒸馏水作为提取溶剂，获得冷蒿水提物，确定了冷蒿水提取物具有很好的抗炎作用。本专利技术用不同的极性溶剂萃取冷蒿水提物，获得了相应的萃取物，通过检测各萃取物对细胞存活率和炎症介质NO、IL-6、1L-1β、TNF-α的影响，结果显示，正己烷和乙酸乙酯组分具有较好的抑制炎症因子的效果。附图说明图1显示中草药水提物对细胞存活率的影响；图2显示中草药水提物对细胞存活率的影响；图3显示中草药水提物对细胞存活率的影响；图4显示中草药水提物对细胞存活率的影响；图5显示ELISA试剂盒检测RAW264.7细胞上清中一氧化氮的含量；图6显示ELISA试剂盒检测RAW264.7细胞上清中白细胞介素-6的含量；图7显示ELISA试剂盒检测RAW264.7细胞上清中白细胞介素-1β的含量；图8显示ELISA试剂盒检测RAW264.7细胞上清中TNF-α的含量；图9显示各组分对细胞存活率的影响；图10显示各组分对细胞存活率的影响；图11显示不同极性萃取物对NO含量的影响；图12显示不同极性萃取物对IL-6含量的影响；图13显示不同极性萃取物对1L-1β含量的影响；图14显示不同极性萃取物对TNF-α含量的影响；图15显示乙酸乙酯组分液相成分分析结果。具体实施方式实施例1制备冷嵩水提物(1)使用微型植物粉碎机将冷蒿粉碎，过60目的分析筛，于密封袋中保存，备用。(2)在超声提取机中加入800mL蒸馏水，称取冷蒿20g放入超声提取机中搅拌均匀进行超声提取，超声条件：超声功率500W，温度50℃，时间30min。(3)超声提取后，取出溶液，将上层提取液倒入离心管中，5000rpm离心20min，将离心后的上清收集或转移至旋转蒸发瓶中，用旋转蒸发仪旋转浓缩至5mL左右，用移液枪将液体转移至合适的容器中，用保鲜膜包上，并在上端扎几个孔，放入-80℃冰箱，待冻成固体后，将其放入冻干机中，冻干成粉末，将保鲜膜取下来，盖上离心管的盖子，作为待测样品，做好标记，放入-80℃冰箱备用。以同样的方法制备黄花蒿粗粉、白头翁、龙蒿、白鲜果皮、多叶棘豆、广布野豌豆、防风、斜茎黄耆种皮、斜茎黄耆叶、灵芝菌棒、东北珍珠梅、苍术茎叶、苍术根须、苍耳、波叶大黄、山韭、茜草、地梢瓜瓜皮的水提取物。称取水提物10mg置于1.5mLEP管中，在无菌的环境中配置成浓度为10mg/mL的母液，用移液枪吹打混匀或者上下颠倒，使其溶解，用无菌的0.45μm滤膜过滤至新的无菌离心管中，放入﹣80℃冰箱，保存备用。实施例2水提物对细胞存活率的影响由图1～图4结果可知，不同中药水提物对细胞的损伤不同，中草药的水提物作用于RAW264.7细胞后，其中白头翁水提物、龙蒿水提物、白鲜果皮水提物、多叶棘豆水提物、防风水提物、斜茎黄耆种皮水提物、斜茎黄耆叶水提物、灵芝菌棒水提物、苍术茎叶水提物、苍术根须水提物、波叶大黄水提物、山韭水提物和地梢瓜瓜皮水提物对细胞会产生不同程度的损伤。黄花蒿水提物、冷蒿水提物、广布野豌豆水提物、东北珍珠梅水提物、苍耳水提物和茜草水提物对细胞无损伤。实施例3中草药提取物的抗炎作用选择无细胞毒性的中草药提取物研究其抗炎作用。以LPS诱导的RAW264.7细胞为模型，设置对照组、LPS组(LPS+培养基)、LPS+加药组。将各提取物以100μg/mL的浓度处理RAW264.7细胞，2小时后，除对照组外，均加入终浓度为1000μg/mL的LPS共培养24小时，收集细胞上清，检测抗炎因子的含量。利用ELISA试剂盒检测各水提物对细胞上清中NO、IL-6、IL-1β和TNF-α含量的影响。1、中草药水提物对NO含量的影响由图5所示，各中药水提物抑制NO的能力显著不同，各水提物作用于RAW264.7细胞后，广布野豌豆水提物处理组的NO的含量显著高于LPS模型组；黄花蒿水提物、冷蒿水提物、东北珍珠梅水提物和茜草水提物处理组的NO的含量显著低于LPS模型组，说明黄花蒿水提物、冷蒿水提物、东北珍珠梅水提物和茜草水提物均可以抑制细胞上清液中NO的释放与表达，尤其是冷蒿水提物抑制NO产生的效果更好。抑本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.冷蒿萃取物，其特征在于，所述馏分通过以下步骤制备而得，/n(1)制备冷蒿水提物，将冷蒿粉碎，超声水提，超声条件：超声功率500W，温度50℃，时间30min，获得的水提物蒸发浓缩备用；/n(2)萃取，以正己烷萃取冷蒿水提物，分别得到水相、正己烷萃取物。/n

【技术特征摘要】
20200507 CN 20201037484141.冷蒿萃取物，其特征在于，所述馏分通过以下步骤制备而得，
(1)制备冷蒿水提物，将冷蒿粉碎，超声水提，超声条件：超声功率500W，温度50℃，时间30min，获得的水提物蒸发浓缩备用；
(2)萃取，以正己烷萃取冷蒿水提物，分别得到水相、正己烷萃取物。


2.根据权利要求1所述的冷蒿萃取物，其特征在于，在步骤(2)中，依次以正己烷、氯仿、乙酸乙酯萃取冷蒿水提物，分别得到水相，收集正己烷萃取物和乙酸乙酯萃取物。


3.根据权利要求1所述的冷蒿萃取物，其特征在于，在步骤(1)中，水与冷嵩粉的比例为40:1mL/g。


4.根据权利要求2所述的冷蒿萃取物，其特征在于，分别以正己烷、氯仿、乙酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：李秀梅，杨培龙，石冬冬，闻治国，王亚冬，杨娟，
申请(专利权)人：中国农业科学院饲料研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11