一种基因转录区多变区测序方法技术

本发明专利技术涉及生物医药技术领域，且公开了一种基因转录区多变区测序方法，包括以下步骤：步骤S1：样品检测；步骤S2：文库构建；步骤S3：mRNA的纯化；步骤S4：cDNA合成；步骤S5：末端修复和接头连接；步骤S6：目标转录本处理；步骤S7：配制反应体系；步骤S8：PCR反应及产物回收：配制PCR反应体系，并设置反应程序，对连接产物进行扩增；步骤S9：文库检测：使用检测文库的插入片段范围，同时对文库进行浓度的定量；步骤S10：精准测序。本发明专利技术设计的基因转录区多变区测序方法通过新一代高通量测序，大幅度缩减测序数据量，能够全面快速地获得某一物种特定组织或器官在特定状态下的目标转录本序列的频率信息，适用不同建库试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
一种基因转录区多变区测序方法
本专利技术涉及生物医药
，尤其涉及一种基因转录区多变区测序方法。
技术介绍
转录组测序的研究对象为特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有RNA的总和，主要包括mRNA和非编码RNA。转录组研究是基因功能及结构研究的基础和出发点，通过新一代高通量测序，能够全面快速地获得某一物种特定组织或器官在某一状态下的几乎所有转录本序列信息，已广泛应用于基础研究、临床诊断和药物研发等领域。转录组是特定组织或细胞在某一发育阶段或功能状态下转录出来的所有RNA的总和，主要包括mRNA和非编码RNA(non-codingRNA，ncRNA)。转录组研究能够从整体水平研究基因功能以及基因结构，揭示特定的生物学过程，已广应用于植物候选基因发掘、功能鉴定及遗传改良等领域。随着新一代测序平台的市场化，RNA测序(RNAsequenclng，RNA-Seq)技术已成为了转录组学研究的重要手段之一。该技术利用新一代高通量测序平台对基因组cDNA测序，通过统计相关Reads(用于测序的cDNA小片段)数计算出不同mRNA的表达量，分本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基因转录区多变区测序方法，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤S1：样品检测：检测total RNA的浓度、RIN值、28S/18S和片段大小；/n步骤S2：文库构建；/n步骤S3：mRNA的纯化：取一定量total RNA样品，适温变性打开total RNA的二级结构，并进行纯化，得到mRNA；/n步骤S4：cDNA合成：向步骤S3中所述的mRNA中加入提前配制的一链合成反应体系，在PCR仪上按相应程序合成一链cDNA，配制二链合成反应体系，适温反应一定时间，合成二链cDNA；/n步骤S5：末端修复和接头连接：配制反应体系，适温反应一定时间，修复双链cDNA末端，配制接头连接反应体系，...

【技术特征摘要】
1.一种基因转录区多变区测序方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤S1：样品检测：检测totalRNA的浓度、RIN值、28S/18S和片段大小；
步骤S2：文库构建；
步骤S3：mRNA的纯化：取一定量totalRNA样品，适温变性打开totalRNA的二级结构，并进行纯化，得到mRNA；
步骤S4：cDNA合成：向步骤S3中所述的mRNA中加入提前配制的一链合成反应体系，在PCR仪上按相应程序合成一链cDNA，配制二链合成反应体系，适温反应一定时间，合成二链cDNA；
步骤S5：末端修复和接头连接：配制反应体系，适温反应一定时间，修复双链cDNA末端，配制接头连接反应体系，适温反应一定时间，使接头与cDNA连接；
步骤S6：目标转录本处理：在步骤S5中所述得到的带有测序文库接头的序列进行扩增；扩增时使用设计的引物A和3’端测序文库接头进行。
步骤S7：配制反应体系，适温反应一定时间，配制接头连接反应体系，适温反应一定时间，使5’端测序文库接头与S7中的扩增产物链接；
步骤S8：PCR反应及产物回收：配制PCR反应体系，并设置反应程序，对连接产物进行扩增；
步骤S9：文库检测：使用检测文库的插入片段范围，同时对文库进行浓度的定量；
步骤S10：精准测序...

【专利技术属性】
技术研发人员：李佳，
申请(专利权)人：北京优吉科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11