一种检测犬细小病毒的多重核酸组合物、试剂盒开发方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种检测犬细小病毒的多重核酸组合物，其包括用于检测犬细小病毒的多重核酸组合物，所述多重核酸组合物包括两对引物和两条探针，所述引物对1和2的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1

【技术实现步骤摘要】
一种检测犬细小病毒的多重核酸组合物、试剂盒开发方法及其应用


[0001]本专利技术涉及病原体检测
，具体而言，涉及一种检测犬细小病毒的多重核酸组合物、试剂盒开发方法及其应用。

技术介绍

[0002]犬细小病毒(Canine parvovirus，CPV)能引起犬的细小病毒病，属于急性传染病，常见临床表现为剧烈呕吐、出血性肠炎、心肌炎、白细胞骤减、出血型肠炎等特征。幼犬CPV发病率高、传染性强、致死率高，是影响养犬业最主要的烈性传染性疾病之一。快速、准确地鉴定引起犬消化道疾病的病原体种类，对于患犬的临床鉴别诊断及治疗有着重要的意义。
[0003]目前临床中最常用诊断方法为胶体金检测、琼脂糖凝胶电泳检测和各类实时荧光PCR检测。例如专利CN 111500793 A和CN 111471798 A提供了犬细小病毒的琼脂糖凝胶电泳检测方法，琼脂糖凝胶电泳法成本虽低，但存在气溶胶污染问题，对检测结果的准确性影响较高；胶体金法存在检测灵敏度低的问题。因此，利用实时荧光PCR技术开发出高效、准确的鉴定体系是犬细小病毒临床鉴别的重要途径。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种检测犬细小病毒的多重核酸组合物、试剂盒开发方法及其应用以解决上述技术问题。
[0005]本专利技术提供了一种检测犬细小病毒的多重核酸组合物，其包括用于检测犬细小病毒的多重核酸组合物，所述多重核酸组合物包括两对引物和两条探针，所述引物对1和2的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1
‑
2和SEQ ID NO.4
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5所示，所述探针1和2的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.6所示。
[0006]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述探针的5
’
端标记有荧光报告基团，3
’
端标记有荧光淬灭基团。上述荧光报告基团为HEX、FAM、TET、CF532、JOE、TAMRA、ROX、CY3、CY5、Texas Red、NED、Alexa Flour或VIC，淬灭基团为MGB、TAMRA、BHQ1、BHQ2、BHQ3或QSY。
[0007]本专利技术提供了一种检测试剂盒，其包括上述的多重核酸组合物。
[0008]本专利技术提供了一种上述多重核酸组合物在制备检测试剂盒中的应用。
[0009]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述试剂盒为冻干试剂或液体试剂。
[0010]上述多重核酸组合物或上述试剂在鉴定或辅助鉴定犬细小病毒中的应用；应用为非疾病诊断或治疗为目的的应用。
[0011]本专利技术具有以下有益效果：
[0012]本专利技术提供了一种可以高效准确检测犬细小病毒的多重核酸组合物，该多重组合物可以用于犬细小病毒实时荧光定量PCR的检测，经专利技术人验证该核酸组合物检测病原体的准确度显著高于市面上的单重引物核酸检测试剂盒，且灵敏度高，对于病原体的最低检测限均达到1
×
103copies/mL，有利于患犬的早期诊断或治疗。基于上述多重核酸组合物可
以制备相应的检测试剂盒以及检测试剂。
附图说明
[0013]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0014]图1是本专利技术试剂盒荧光PCR测试结果；
[0015]图2是本专利技术核酸组合物的克隆测序比对结果；
[0016]图3是本专利技术试剂盒特异性测试扩增图；a)为犬冠状病毒，b)为犬细小病毒，c)为犬瘟热病毒，d)为犬腺病毒2型；
[0017]图4是本专利技术试剂盒灵敏度测试扩增图；a)病原体浓度为1
×
105copies/mL，b)病原体浓度为1
×
104copies/mL，c)病原体浓度为1
×
103copies/mL，d)病原体浓度为1
×
102copies/mL；
[0018]图5是本专利技术试剂盒临床样本荧光PCR检测结果。
具体实施方式
[0019]需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将参考附图并结合实施例来详细说明本专利技术。
[0020]为了使本
的人员更好地理解本申请方案，下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本申请保护的范围。
[0021]现将详细地提供本专利技术实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本专利技术。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本专利技术进行多种修改和变化而不背离本专利技术的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。
[0022]本专利技术提供了一种检测犬细小病毒的多重核酸组合物，其包括用于检测犬细小病毒的多重核酸组合物，所述多重核酸组合物包括两对引物和两条探针，所述引物对1和2的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1
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2和SEQ ID NO.4
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5所示，所述探针1和2的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.6所示。
[0023]上述核酸组合物是基于犬细小病毒的全基因组序列设计的，犬细小病毒的全基因组序列参照NCBI序列号NC_001539.1。
[0024]在一种实施方式中，引物对的核苷酸序列具有与SEQ ID NO.1
‑
2所示的序列90％、95％、99％或100％的一致性；探针的核苷酸序列具有与SEQ ID NO.3所示的序列90％、95％、99％或100％的一致性。
[0025]在本专利技术应用较佳的实施方式中，
[0026]上述引物对1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，所述探针1的核苷
酸序列如SEQ ID NO.3所示。上述引物对2的核苷酸序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示，所述探针2的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
[0027]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述探针的5
’
端标记有荧光报告基团，3
’
端标记有荧光淬灭基团。所述荧光报告基团为HEX、FAM、TET、CF532、JOE、TAMRA、ROX、CY3、CY5、Texas Red、NED、Alexa Flour或VIC，所述淬灭基团为MGB、TAMRA、BHQ1、BHQ2、BHQ3或QSY。
[0028]此外，在其他实施方式中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测犬细小病毒的多重核酸组合物，其特征在于，其包括用于检测犬细小病毒的多重核酸组合物，所述多重核酸组合物包括两对引物和两条探针，所述引物对1和2的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1
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2和SEQ ID NO.4
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5所示，所述探针1和2的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.6所示。2.根据权利要求1所述的多重核酸组合物，其特征在于，所述探针的5
’
端标记有荧光报告基团，3
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端标记有荧光淬灭基团，所述荧光报告基团为HEX、FAM、TET、CF532、JOE、TAMRA、ROX、CY3、CY5、T...

【专利技术属性】
技术研发人员：×，
申请(专利权)人：北京优吉科技有限公司，
类型：发明
国别省市：