一种用于生产达芦那韦中间体的酮还原酶突变体制造技术

本发明专利技术实施例公开了一种用于生产达芦那韦中间体的酮还原酶突变体，属于生物催化方法及应用技术领域，具体涉及一种生产(2S,3S)‑1‑氯‑3‑叔‑丁氧羰基氨基‑4‑苯基‑2‑丁醇通过酮还原酶突变体，所述酮还原酶突变体源于Starmerella magnoliae的野生型酮还原酶，能将3S‑1‑氯‑3‑叔丁氧羰基氨基‑4‑苯基‑2‑丁醇转化生成(2S,3S)‑1‑氯‑3‑叔‑丁氧羰基氨基‑4‑苯基‑2‑丁醇，与野生型序列相比具有更高的醇脱氢酶活性，与SEQ ID NO.8具有90％以上相似性且具有以下特征中的一个或多个突变：I54E,S85A,K182V，该酮还原酶突变体的序列为SEQ ID NO.2。本发明专利技术使用醇类用于辅酶循环，底物浓度高达110g/L，底物用量/NADP用量高达1100:1，辅酶循环次数高，有效的扩大了下游应用范围。

【技术实现步骤摘要】
一种用于生产达芦那韦中间体的酮还原酶突变体
本专利技术属于生物催化方法及应用
，涉及一种用于生产达芦那韦中间体的酮还原酶突变体，尤其涉及一种用于生产(2S,3S)-1-氯-3-叔-丁氧羰基氨基-4-苯基-2-丁醇的方法。
技术介绍
酮还原酶是一种多用途催化剂，通过醛或酮的对映体选择性还原成对应醇。(R)特异性酮还原酶与(S)特异性酮还原酶具有不同特性，并且这些催化剂在光学活性醇的工业合成中被越来越频繁地用到。旋光性是许多医药和农药活性化合物选择性作用的必要条件，在一些情况下，一个对映体具有有益的药物活性，另一个对映体却具有基因毒性作用。因此，在药用和农药用活性化合物的合成中，需要使用具有所要求的立体特异性的催化剂合成光学活性醇。达芦那韦，又名地瑞那韦，以商品名Prezista出售，是强生公司的一种用于非肽类艾滋病毒蛋白酶抑制剂，美国食品药品管理局(FDA)在2006年批准其上市。2011年美国食品药品管理局(FDA)宣布批准Prezista(达如那韦)的口服混悬液制剂。是全球第二个上市的非肽类蛋白酶抑制剂，是目前世界上主要的抗艾滋本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于生产达芦那韦中间体的酮还原酶突变体，其特征在于，其源于Starmerellamagnoliae的野生型酮还原酶，能将3S-1-氯-3-叔丁氧羰基氨基-4-苯基-2-丁醇转化生成(2S,3S)-1-氯-3-叔-丁氧羰基氨基-4-苯基-2-丁醇，与野生型序列相比具有更高的醇脱氢酶活性，与SEQ ID NO.8具有90％以上相似性且具有以下特征中的一个或多个突变：I54E,S85A,K182V，该酮还原酶突变体的序列为SEQ ID NO.2。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于生产达芦那韦中间体的酮还原酶突变体，其特征在于，其源于Starmerellamagnoliae的野生型酮还原酶，能将3S-1-氯-3-叔丁氧羰基氨基-4-苯基-2-丁醇转化生成(2S,3S)-1-氯-3-叔-丁氧羰基氨基-4-苯基-2-丁醇，与野生型序列相比具有更高的醇脱氢酶活性，与SEQIDNO.8具有90％以上相似性且具有以下特征中的一个或多个突变：I54E,S85A,K182V，该酮还原酶突变体的序列为SEQIDNO.2。


2.根据权利要求1所述的用于生产达芦那韦中间体的酮还原酶突变体，其特征在于，所述酮还原酶突变体的酶活性比野生型酮还原酶的活性至少增强2-15倍。


3.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的编码序列为SEQIDNO.2的酮还原酶重组的多肽。


4.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁雪峰，王乾，李佳松，
申请(专利权)人：南京朗恩生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32