【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞生物制品及其治疗用途相关申请本申请要求2017年12月7日提交的美国序列号62/595,841的优先权，其以其整体通过引用并入本文。专利技术背景去核细胞保留许多生物学特性，但失去其分裂能力。专利技术概述在一些方面，本公开提供了细胞生物制品，例如去核细胞或具有失活核的细胞。细胞生物制品可以用于例如将细胞生物制品的腔或脂质双层中的货物递送至靶细胞。货物包括例如治疗性蛋白质、核酸和小分子。在一些方面，本公开提供了纯化的细胞生物制品组合物，其包含来自源细胞，例如哺乳动物源细胞，例如人源细胞的细胞生物制品，其中细胞生物制品具有部分或完全的核失活(例如核去除)，并且其中以下的一个或多个：i)细胞生物制品包含外源剂，例如治疗剂，例如以至少1,000个拷贝的拷贝数，例如，如通过实施例31的测定法所测量的；ii)细胞生物制品包含脂质，其中CL、Cer、DAG、HexCer、LPA、LPC、LPE、LPG、LPI、LPS、PA、PC、PE、PG、PI、PS、CE、SM和TAG的一种或多种在源细胞...
【技术保护点】
1.纯化的细胞生物制品组合物，其包含来自源细胞，例如哺乳动物源细胞，例如人源细胞的细胞生物制品，其中所述细胞生物制品具有部分或完全的核失活(例如核去除)，其中所述细胞生物制品不是来自红系细胞或血小板，并且/n其中以下的一个或多个：/ni)所述细胞生物制品包含外源剂或治疗剂(例如外源治疗剂)，例如为至少1,000个拷贝的拷贝数，例如，如通过实施例31的测定法所测量的；/nii)所述细胞生物制品包含脂质，其中CL、Cer、DAG、HexCer、LPA、LPC、LPE、LPG、LPI、LPS、PA、PC、PE、PG、PI、PS、CE、SM和TAG的一种或多种在所述源细胞中相应脂质...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171207 US 62/595,8411.纯化的细胞生物制品组合物，其包含来自源细胞，例如哺乳动物源细胞，例如人源细胞的细胞生物制品，其中所述细胞生物制品具有部分或完全的核失活(例如核去除)，其中所述细胞生物制品不是来自红系细胞或血小板，并且
其中以下的一个或多个：
i)所述细胞生物制品包含外源剂或治疗剂(例如外源治疗剂)，例如为至少1,000个拷贝的拷贝数，例如，如通过实施例31的测定法所测量的；
ii)所述细胞生物制品包含脂质，其中CL、Cer、DAG、HexCer、LPA、LPC、LPE、LPG、LPI、LPS、PA、PC、PE、PG、PI、PS、CE、SM和TAG的一种或多种在所述源细胞中相应脂质水平的75％以内；
iii)所述细胞生物制品包含与所述源细胞的蛋白质组学组成相似的蛋白质组学组成，例如使用实施例30的测定法测定；
iv)所述细胞生物制品能够进行信号转导，例如传输细胞外信号，例如响应于胰岛素的AKT磷酸化，或响应于胰岛素的葡萄糖(例如标记的葡萄糖，例如2-NBDG)摄取，例如比阴性对照，例如在不存在胰岛素的情况下在其他方面相似的细胞生物制品多至少10％，例如使用实施例48的测定法测定；
v)当施用于受试者例如小鼠时，所述细胞生物制品靶向组织，例如肝、肺、心脏、脾、胰腺、胃肠道、肾、睾丸、卵巢、脑、生殖器官、中枢神经系统、外周神经系统、骨骼肌、内皮、内耳或眼，例如其中24小时后所施用的细胞生物制品的群体中至少0.1％或10％的所述细胞生物制品存在于所述靶组织中，例如通过实施例71的测定法测定；或
vi)所述源细胞选自嗜中性粒细胞、粒细胞、间充质干细胞、骨髓干细胞、诱导性多能干细胞、胚胎干细胞、原粒细胞、成肌细胞、肝细胞或神经元，例如视网膜神经元细胞。
2.纯化的细胞生物制品组合物，其包含细胞生物制品和外源剂，例如治疗剂，其中：
i)所述细胞生物制品来自源细胞，例如哺乳动物源细胞，
ii)所述细胞生物制品是去核细胞或具有部分或完全核失活(例如核去除)的细胞，并且
iii)所述细胞生物制品不是来自红系细胞或血小板。
3.纯化的细胞生物制品组合物，例如冷冻的细胞生物制品组合物，其包含细胞生物制品，其中：
i)所述细胞生物制品来自源细胞，例如哺乳动物源细胞，
ii)所述细胞生物制品是去核细胞或具有部分或完全核失活(例如核去除)的细胞，并且
iii)所述细胞生物制品不是来自红系细胞或血小板，
其处于小于4、0、-4、-10、-12、-16、-20、-80或-160C的温度。
4.前述权利要求中任一项的细胞生物制品组合物，其中以下的一个或多个：
i)所述细胞生物制品包含以下脂质与蛋白质的比率，其在所述源细胞中相应比率的10％、20％、30％、40％或50％内，例如，如使用实施例37的测定法所测量的；
ii)所述细胞生物制品包含以下蛋白质与核酸(例如DNA)的比率，其在所述源细胞中相应比率的10％、20％、30％、40％或50％内，例如，如使用实施例38的测定法所测量的；
iii)所述细胞生物制品包含以下脂质与核酸(例如DNA)的比率，其在所述源细胞中相应比率的10％、20％、30％、40％或50％内，例如，如使用实施例39的测定法所测量的；
iv)所述细胞生物制品在受试者中例如小鼠中具有以下半衰期，其在参考细胞例如所述源细胞的半衰期的90％内，例如通过实施例60的测定法测定；
v)所述细胞生物制品将葡萄糖(例如标记的葡萄糖，例如2-NBDG)跨膜运输，例如比阴性对照，例如在不存在葡萄糖的情况下在其他方面相似的细胞生物制品多至少10％，例如，如使用实施例49的测定法所测量的；
vi)所述细胞生物制品在腔中包含以下酯酶活性，其在参考细胞，例如所述源细胞或小鼠胚胎成纤维细胞中的酯酶活性的90％内，例如使用实施例51的测定法测定；
vii)所述细胞生物制品包含以下代谢活性水平，其在参考细胞例如所述源细胞中的代谢活性(例如柠檬酸合酶活性)的90％内，例如，如实施例53中所述；
viii)所述细胞生物制品包含以下呼吸水平(例如耗氧率)，其在参考细胞例如所述源细胞中的呼吸水平的90％内，例如，如实施例54中所述；
ix)所述细胞生物制品包含至多18,000、17,000、16,000、15,000、14,000、13,000、12,000、11,000或10,000MFI的膜联蛋白-V染色水平，例如使用实施例55的测定法测定，或者其中所述细胞生物制品包含以下膜联蛋白-V染色水平，其比在实施例55的测定法中用甲萘醌处理的在其他方面相似的细胞生物制品的膜联蛋白-V染色水平低至少5％、10％、20％、30％、40％或50％，或者其中所述细胞生物制品包含以下膜联蛋白-V染色水平，其比在实施例55的测定法中用甲萘醌处理的巨噬细胞的膜联蛋白-V染色水平低至少5％、10％、20％、30％、40％或50％；
x)所述细胞生物制品具有比所述源细胞的miRNA含量水平至少1％的miRNA含量水平，例如通过实施例27的测定法测定；
xi)所述细胞生物制品具有在所述源细胞的可溶性蛋白质:非可溶性蛋白质比率的90％内的可溶性蛋白质:非可溶性蛋白质比率，例如通过实施例35的测定法测定；
xii)所述细胞生物制品具有小于所述细胞生物制品的脂质含量的5％的LPS水平，例如，如通过实施例36的测定法所测量的；
xiii)所述细胞生物制品具有比由参考细胞，例如所述源细胞或骨髓基质细胞(BMSC)诱导的近分泌信号传导的水平高至少5％的近分泌信号传导水平，例如通过实施例56的测定法测定；
xiv)所述细胞生物制品具有比由参考细胞，例如所述源细胞或巨噬细胞诱导的旁分泌信号传导的水平高至少5％的旁分泌信号传导水平，例如通过实施例57的测定法测定；
xv)所述细胞生物制品以与参考细胞例如所述源细胞或C2C12细胞中聚合的肌动蛋白的水平相比在5％内的水平的聚合肌动蛋白，例如通过实施例58的测定法测定；
xvi)所述细胞生物制品具有参考细胞例如所述源细胞或C2C12细胞的膜电位的约5％内的膜电位，例如通过实施例59的测定法测定，或者其中所述细胞生物制品具有约-20至-150mV、-20至-50mV、-50至-100mV或-100至-150mV的膜电位；
xvii)所述细胞生物制品能够从血管中外渗，例如以与所述源细胞相同类型的细胞的外渗速率的至少1％、2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％的速率外渗，例如使用实施例42的测定法测定，例如其中所述源细胞是嗜中性粒细胞、淋巴细胞、B细胞、巨噬细胞或NK细胞；
xviii)所述细胞生物制品能够穿过细胞膜，例如内皮细胞膜或血脑屏障，例如以与所述源细胞相同类型的细胞的速率的至少1％、2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％的速率穿过细胞膜；
xix)所述细胞生物制品能够分泌蛋白质，例如以比参考细胞例如小鼠胚胎成纤维细胞高至少5％的速率分泌，例如，使用实施例47的测定法测定；
xx)所述细胞生物制品符合药物或良好生产规范(GMP)标准；
xxi)所述细胞生物制品根据良好生产规范(GMP)制备；
xxii)所述细胞生物制品具有低于预定参考值的病原体水平，例如，基本上不含病原体；
xxiii)所述细胞生物制品具有低于预定参考值的污染物水平，例如，基本上不含污染物；
xxiv)所述细胞生物制品具有低免疫原性，例如，如本文所述；
xxv)所述源细胞是除293细胞、HEK细胞、人内皮细胞或人上皮细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突细胞或干细胞外；
xxvi)所述细胞生物制品、组合物或制剂具有除在1.08g/ml和1.12g/ml之间外的密度；
xxvii)所述细胞生物制品、组合物或制剂具有1.25g/ml+/-0.05的密度，例如，如通过实施例21的测定法所测量的；
xxviii)所述细胞生物制品不被循环中的清除系统或肝窦中的库普弗细胞捕获；或
xxix)所述细胞生物制品具有大于5um、6um、7um、8um、10um、20um、50um、100um、150um或200um的直径。
5.前述权利要求中任一项的细胞生物制品组合物，其包含货物，例如治疗剂，例如内源治疗剂或外源治疗剂。
6.权利要求5的细胞生物制品组合物，其中所述治疗剂选自以下的一种或多种：蛋白质，例如酶、跨膜蛋白质、受体、抗体；核酸，例如DNA、染色体(例如人类人工染色体)、RNA、mRNA、siRNA、miRNA或小分子。
7.权利要求5的细胞生物制品组合物，其中所述治疗剂是细胞器，例如选自以下的细胞器：线粒体、高尔基体、溶酶体、内质网、液泡、内体、顶体、自噬体、中心粒、糖酵解酶体、乙醛酸循环体、氢化酶体、黑色素体、纺锤剩体、刺丝囊、过氧化物酶体、蛋白酶体、囊泡和应激颗粒。
8.前述权利要求中任一项的细胞生物制品组合物，其具有<1、1-1.1、1.05-1.15、1.1-1.2、1.15-1.25、1.2-1.3、1.25-1.35或>1.35g/ml的密度，例如通过实施例21的测定法测定。
9.前述权利要求中任一项的细胞生物制品组合物，其是去核细胞。
10.前述权利要求中任一项的细胞生物制品组合物，其包含选自以下的一种或多种的外源治疗剂：蛋白质，例如酶、跨膜蛋白、受体、抗体；核酸，例如DNA、染色体(例如人类人工染色体)、RNA、mRNA、siRNA、miRNA或小分子。
11.前述权利要求中任一项的细胞生物制品组合物，其包含按蛋白质质量计小于0.01％、0.05％、0.1％、0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、4％、5％或10％源细胞或少于0.01％、0.05％、0.1％、0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、4％、5％或10％的细胞具有功能性核。
12.权利要求3的细胞生物制品组合物，其已经于所述温度维持了至少1、2、3、6或12小时；1、2、3、4、5或6天；1、2、3或4周；1、2、3或6个月；或1、2、3、4或5年。
13.权利要求3的细胞生物制品组合物，其具有于所述温度维持之前的群体活性的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％的活性，例如使用本文所述的测定法测定。
14.权利要求3的细胞生物制品组合物，其于小于4C的温度持续至少1、2、3、6或12小时；1、2、3、4、5或6天；1、2、3或4周；1、2、3或6个月；或1、2、3、4或5年是稳定的。
15.权利要求3的细胞生物制品组合物，其于小于-20C的温度持续至少1、2、3、6或12小时；1、2、3、4、5或6天；1、2、3或4周；1、2、3或6个月；或1、2、3、4或5年是稳定的。
16.权利要求3的细胞生物制品组合物，其于小于-80C的温度持续至少1、2、3、6或12小时；1、2、3、4、5或6天；1、2、3或4周；1、2、3或6个月；或1、2、3、4或5年是稳定的。
17.前述权利要求中任一项的细胞生物制品组合物，其中以下的一个或多个：
i)所述源细胞是除293细胞外；
ii)所述源细胞不是转化或永生化的；
iii)使用除腺病毒介导的永生化以外的方法对所述源细胞进行转化或永生化，例如通过自发突变或端粒酶表达来永生化；
iv)所述治疗剂是除Cre或EGFP外；
v)所述治疗剂是核酸(例如RNA，例如mRNA、miRNA或siRNA)或外源蛋白质(例如抗体，例如抗体)，例如在腔中；或
vi)所述细胞生物制品不包含线粒体。
18.前述权利要求中任一项的细胞生物制品组合物，其中以下的一个或多个：
i)所述源细胞是除293细胞或HEK细胞外；
ii)所述源细胞不是转化或永生化的；
iii)使用除腺病毒介导的永生化以外的方法对所述源细胞进行转化或永生化，例如通过自发突变或端粒酶表达来永生化；或
iv)所述细胞生物制品具有除在40和150nm之间外的大小，例如大于150nm、200nm、300n、400nm或500nm。
19.前述权利要求中任一项的细胞生物制品组合物，其中以下的一个或多个：
i)所述治疗剂是由所述源细胞表达的可溶性蛋白质；
ii)所述细胞生物制品在其腔中包含选自以下的多肽：酶、抗体或抗病毒多肽；
iii)所述细胞生物制品不包含外源治疗性跨膜蛋白；或
iv)所述细胞生物制品不包含CD63或GLUT4。
20.前述权利要求中任一项的细胞生物制品组合物，其中所述细胞生物制品：
i)不包含病毒，不是传染性的或不在宿主细胞中繁殖；
ii)不是VLP(病毒样颗粒)；
iii)不包含病毒结构蛋白，例如病毒壳体蛋白，例如病毒核壳蛋白，或其中病毒壳体蛋白的量小于总蛋白的10％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.2％或0.1％，例如通过实施例41的测定法测定；
iv)不包含病毒基质蛋白；
v)不包含病毒非结构蛋白；
vi)包含少于10、50、100、500、1,000、2,000、5,000、10,000、20,000、50,000、100,000、200,000、500,000、1,000,000、5,000,000、10,000,000、50,000,000、100,000,000、500,000,000、1,000,000,000个拷贝的病毒结构蛋白；或
vii)不是病毒体。
21.前述权利要求中任一项的细胞生物制品组合物，其中以下之一或两者：
i)所述细胞生物制品上所述外源剂的拷贝数与病毒结构蛋白的拷贝数的比率为至少1000000:1、100000:1、10000:1、1000:1、100:1和50:1、50:1和20:1、20:1和10:1、10:1和5:1、或1:1；
ii)所述细胞生物制品上所述外源剂的拷贝数与病毒基质蛋白的拷贝数的比率为至少1000000:1、100000:1、10000:1、1000:1、100:1和50:1、50:1和20:1、20:1和10:1、10:1和5:1、或1:1。
22.前述权利要求中任一项的细胞生物制品组合物，其为单层或多层的。
23.前述权利要求中任一项的细胞生物制品组合物，其中：
i)所述细胞生物制品不包含与水不混溶的液滴；
ii)所述细胞生物制品包含水性腔和亲水性外部；或
iii)所述细胞器选自线粒体、高尔基体、溶酶体、内质网、液泡、内体、顶体、自噬体、中心粒、糖酵解酶体、乙醛酸循环体、氢化酶体、黑色素体、纺锤剩体、刺丝囊、过氧化物酶体、蛋白酶体、囊泡和应激颗粒。
24.前述权利要求中任一项的细胞生物制品组合物，其中：
i)所述细胞生物制品不是通过用治疗或诊断物质加载所述细胞生物制品而制备的；
ii)所述源细胞未加载治疗或诊断物质；
iii)所述细胞生物制品不包含多柔比星、地塞米松、环糊精；聚乙二醇、microRNA，例如miR125、VEGF受体、ICAM-1、E-选择蛋白，氧化铁、荧光蛋白，例如GFP或RFP、纳米颗粒或RNA酶，或不包含任何前述物质的外源形式；或
iv)所述细胞生物制品进一步包含具有一种或多种翻译后修饰，例如糖基化的外源治疗剂。
25.前述权利要求中任一项的细胞生物制品组合物，其中所述细胞生物制品具有所述源细胞的大小的约0.01％-0.05％、0.05％-0.1％、0.1％-0.5％、0.5％-1％、1％-2％、2％-3％、3％-4％、4％-5％、5％-10％、10％-20％、20％-30％、30％-40％、40％-50％、50％-60％、60％-70％、70％-80％或80％-90％的大小，例如，如通过实施例18的测定法所测量的。
26.前述权利要求中任一项的细胞生物制品组合物，其中所述细胞生物制品具有至少约10nm、20nm、30nm、40nm、50nm、60nm、70nm、80nm、90nm、100nm、150nm或200nm的直径，例如，如通过实施例20的测定法所测量的。
27.前述权利要求中任一项的细胞生物制品组合物，其中：
i)所述细胞生物制品不是外来体；
ii)所述细胞生物制品是微囊泡；
iii)所述细胞生物制品具有至少80nm、100nm、200nm、500nm、1000nm、1200nm、1400nm或1500nm的大小，或者细胞生物制品的群体具有至少80nm、100nm、200nm、500nm、1000nm、1200nm、1400nm或1500nm的平均大小；
iv)所述细胞生物制品包含一个或多个细胞器，例如线粒体、高尔基体、溶酶体、内质网、液泡、内体、顶体、自噬体、中心粒、糖酵解酶体、乙醛酸循环体、氢化酶体、黑色素体、纺锤剩体、刺丝囊、过氧化物酶体、蛋白酶体、囊泡和应激颗粒；
v)所述细胞生物制品包含细胞骨架或其组分，例如肌动蛋白、Arp2/3、形成蛋白、冠蛋白、抗肌萎缩蛋白、角蛋白、肌球蛋白或微管蛋白；
vi)所述细胞生物制品、组合物或制剂不具有1.08–1.22g/ml的浮选密度，或具有至少1.18–1.25g/ml或1.05–1.12g/ml的密度，例如在蔗糖梯度离心测定法中，例如，如Théry等人,“Isolationandcharacterizationofexosomesfromcellculturesupernatantsandbiologicalfluids.”CurrProtocCellBiol.2006年4月；第3章:第3.22节中所述；
vii)所述细胞生物制品包含与所述源细胞相比富含神经酰胺或鞘磷脂或其组合的脂质双层，或者所述脂质双层与所述源细胞相比未富含(例如耗竭)糖脂、游离脂肪酸或磷脂酰丝氨酸或其组合；
viii)所述细胞生物制品包含磷脂酰丝氨酸(PS)或CD40配体或PS和CD40配体两者，例如当在实施例40的测定法中测量时；
ix)所述细胞生物制品与所述源细胞相比富含PS，例如在细胞生物制品的群体中至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％对PS呈阳性；
x)所述细胞生物制品基本上不含乙酰胆碱酯酶(AChE)，或含有小于0.001、0.002、0.005、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1、2、5、10、20、50、100、200、500或1000个AChE活性单位/ug的蛋白质，例如通过实施例52的测定法测定；
xi)所述细胞生物制品基本上不含四次穿膜蛋白家族蛋白质(例如CD63、CD9或CD81)、ESCRT相关蛋白(例如TSG101、CHMP4A-B或VPS4B)、Alix、TSG101、MHCI、MHCII、GP96、辅肌动蛋白4、mitofilin、syntenin-1、TSG101、ADAM10、EHD4、syntenin-1、TSG101、EHD1、flotilin-1、热激70-kDa蛋白(HSC70/HSP73、HSP70/HSP72)或其任何组合，或者含有少于0.05％、0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、5％或10％的任何单个外来体标志物蛋白和/或少于0.05％、0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％或25％的任何所述蛋白质的总外来体标志物蛋白，或者与所述源细胞相比脱富集这些蛋白质的任何一种或多种，或未富含这些蛋白质的任何一种或多种，例如通过实施例32的测定法测定；
xii)所述细胞生物制品包含低于500、250、100、50、20、10、5或1ngGAPDH/ug总蛋白质或低于所述源细胞中GAPDH的水平，例如小于1％、2.5％、5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％，小于所述源细胞中以ng/ug计每总蛋白质的GAPDH的水平的甘油醛3-磷酸脱氢酶(GAPDH)的水平，例如，使用实施例33的测定法测定；
xiii)所述细胞生物制品富含一种或多种内质网蛋白(例如钙联接蛋白)，一种或多种蛋白酶体蛋白，或一种或多种线粒体蛋白，或其任何组合，例如，其中钙联接蛋白的量大于500、250、100、50、20、10、5或1ng钙联接蛋白/ug总蛋白质，或者其中所述细胞生物制品包含与所述源细胞相比多1％、2.5％、5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％的以ng/ug计的每总蛋白质的钙联接蛋白，例如使用实施例34的测定法测定；
xiv)所述细胞生物制品包含外源剂(例如，外源蛋白质、mRNA或siRNA)，例如，如使用实施例27或28的测定法所测量；或
xv)所述细胞生物制品能够通过原子力显微术在云母表面上固定化至少30分钟。
28.前述权利要求中任一项的细胞生物制品组合物，其中：
i)所述细胞生物制品是外来体；
ii)所述细胞生物制品不是微囊泡；
iii)所述细胞生物制品具有小于80nm、100nm、200nm、500nm、1000nm、1200nm、1400nm或1500nm的大小，或者细胞生物制品的群体具有至少80nm、100nm、200nm、500nm、1000nm、1200nm、1400nm或1500nm的平均大小；
iv)所述细胞生物制品不包含细胞器；
v)所述细胞生物制品不包含细胞骨架或其组分，例如肌动蛋白、Arp2/3、形成蛋白、冠蛋白、抗肌萎缩蛋白、角蛋白、肌球蛋白或微管蛋白；
vi)所述细胞生物制品、组合物或制剂具有1.08–1.22g/ml的浮选密度，例如在蔗糖梯度离心测定法中；
vii)所述细胞生物制品包含与所述源细胞相比未富含(例如耗竭)神经酰胺或鞘磷脂或其组合的脂质双层，或者所述脂质双层与所述源细胞相比富含糖脂、游离脂肪酸或磷脂酰丝氨酸或其组合；
viii)所述细胞生物制品相对于所述源细胞不包含或耗竭磷脂酰丝氨酸(PS)或CD40配体或PS和CD40配体两者，例如当在实施例40的测定法中测量时；
ix)所述细胞生物制品与所述源细胞相比未富含(例如耗竭)PS，例如在细胞生物制品的群体中小于20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％对PS呈阳性；
x)所述细胞生物制品包含乙酰胆碱酯酶(AChE)，例如至少0.001、0.002、0.005、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1、2、5、10、20、50、100、200、500或1000个AChE活性单位/ug的蛋白质，例如通过实施例52的测定法测定；
xi)所述细胞生物制品包含四次穿膜蛋白家族蛋白质(例如CD63、CD9或CD81)、ESCRT相关蛋白(例如TSG101、CHMP4A-B或VPS4B)、Alix、TSG101、MHCI、MHCII、GP96、辅肌动蛋白4、mitofilin、syntenin-1、TSG101、ADAM10、EHD4、syntenin-1、TSG101、EHD1、flotilin-1、热激70-kDa蛋白(HSC70/HSP73、HSP70/HSP72)或其任何组合，例如，含有多于0.05％、0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、5％或10％的任何单个外来体标志物蛋白和/或少于0.05％、0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％或25％的任何所述蛋白质的总外来体标志物蛋白，或者与所述源细胞相比富含这些蛋白质的任何一种或多种，通过实施例32的测定法测定；
xii)所述细胞生物制品包含高于500、250、100、50、20、10、5或1ngGAPDH/ug总蛋白质或低于所述源细胞中GAPDH的水平，例如至少1％、2.5％、5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％，大于所述源细胞中以ng/ug计的每总蛋白质的GAPDH水平的甘油醛3-磷酸脱氢酶(GAPDH)的水平，例如，使用实施例33的测定法测定；
xiii)所述细胞生物制品未富含(例如耗竭)一种或多种内质网蛋白(例如钙联接蛋白)，一种或多种蛋白酶体蛋白，或一种或多种线粒体蛋白，或其任何组合，例如，其中钙联接蛋白的量小于500、250、100、50、20、10、5或1ng钙联接蛋白/ug总蛋白质，或者其中所述细胞生物制品包含与所述源细胞相比少1％、2.5％、5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％以ng/ug计的每总蛋白质的钙联接蛋白，例如使用实施例34的测定法测定；
xiv)所述细胞生物制品不能通过原子力显微术在云母表面上固定化至少30分钟。
29.前述权利要求中任一项的细胞生物制品组合物，其中：
i)所述细胞生物制品不包含VLP；
ii)所述细胞生物制品不包含病毒；
iii)所述细胞生物制品不包含具有复制能力的病毒；
iv)所述细胞生物制品不包含病毒蛋白质，例如病毒结构蛋白，例如壳体蛋白或病毒基质蛋白；
v)所述细胞生物制品不包含来自包膜病毒的壳体蛋白；
vi)所述细胞生物制品不包含核壳蛋白；或
vii)所述细胞生物制品不包含病毒融合剂。
30.前述权利要求中任一项的细胞生物制品，其中所述细胞生物制品包含胞质溶胶。
31.前述权利要求中任一项的细胞生物制品，其中：
i)所述细胞生物制品在植入受试者中时不形成畸胎瘤，例如通过实施例74的测定法测定；
ii)所述细胞生物制品能够趋化，例如与参考细胞例如巨噬细胞相比，以至少1％、2％、3％、4％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％的速度，例如使用实施例43的测定法测定；
iii)所述细胞生物制品能够归巢，例如在损伤部位处，其中所述细胞生物制品来自人细胞，例如，使用实施例44的测定法测定，例如其中所述源细胞是嗜中性粒细胞；或
iv)所述细胞生物制品能够吞噬，例如其中在使用实施例45的测定法中在0.5、1、2、3、4、5或6小时内可检测到所述细胞生物制品的吞噬，例如其中所述源细胞是巨噬细胞。
32.前述权利要求中任一项的细胞生物制品组合物，其在施用于受试者例如人类受试者后将任何特征的一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个保留5天或更短，例如4天或更短、3天或更短、2天或更短、1天或更短，例如约12-72小时。
33.前述权利要求中任一项的细胞生物制品组合物，其中所述细胞生物制品具有以下特征的一个或多个：
a)包含来自源细胞的一种或多种内源蛋白，例如膜蛋白或胞质蛋白；
b)包含至少10、20、50、100、200、500、1000、2000或5000种不同的蛋白质；
c)包含至少1、2、5、10、20、50或100种不同的糖蛋白；
d)以所述细胞生物制品中的所述蛋白质的质量计，至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％是天然存在的蛋白质；
e)包含至少10、20、50、100、200、500、1000、2000或5000种不同的RNA；或
f)包含至少2、3、4、5、10或20种不同的脂质，例如选自CL、Cer、DAG、HexCer、LPA、LPC、LPE、LPG、LPI、LPS、PA、PC、PE、PG、PI、PS、CE、SM和TAG。
34.前述权利要求中任一项的细胞生物制品组合物，其中所述细胞生物制品已经经操作以具有一个、两个、三个、四个、五个或更多以下特性，或者其中所述细胞生物制品不是...
【专利技术属性】
技术研发人员：GA冯马尔特赞，JM米尔维德，JR鲁宾斯，MT米，NW斯特宾斯，MK吉布森，NF戈登，B张，KM特鲁多，BJ哈特利，TR普提里，K马达维亚尼，JV沙，M康纳，PA琼斯，
申请(专利权)人：旗舰先锋创新V股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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