【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于冷冻保存的组合物和其使用方法相关申请的交叉引用本申请要求2017年12月31日提交的美国临时专利申请62/612,552的优先权，所述申请以全文引用的方式并入本文中。
本文描述了用于冷冻保存哺乳动物细胞、组织和器官的组合物和其方法。
技术介绍
过量的细胞死亡是对从活体供体获得的细胞、组织和器官或在培养物中生长的细胞进行临床使用的主要障碍。当在获得细胞和使用它们之间存在拖延的时间段，要求在长时间存放期间稳定细胞时，此问题尤其严重。一般来说，分离供体细胞、组织或器官的过程本身损伤细胞，因为它涉及酶或机械移出、细胞外蛋白的酶消化、细胞在容器之间转移、离心、在溶液中再悬浮和过滤步骤。在接种到生长室期间细胞也可能经历明显损伤，这一过程称为磨碎。体外的常规细胞操作同样地是细胞损伤的主要来源。通常将培养物中的细胞与它们生长所在的基质分离，以允许进一步扩增细胞数量并后续生长，用于程序操作以引入实验处理(例如DNA引入)，和下游的常规测量，这需要首先将细胞从其环境移出。这些程序通常破坏许多细胞外膜的完整性，引起穿刺和破裂。...
【技术保护点】
1.一种组合物，其包含坏死性凋亡抑制剂化合物和Bax通道抑制剂化合物。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171231 US 62/612,5521.一种组合物，其包含坏死性凋亡抑制剂化合物和Bax通道抑制剂化合物。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述坏死性凋亡抑制剂化合物包含5-((7-氯-1H-吲哚-3-基)甲基)-3-甲基-2,4-咪唑烷二酮化合物或其类似物、衍生物、异构体或药学上可接受的盐，并且所述Bax通道抑制剂包含3,6-二溴-α-(1-哌嗪基甲基)-9H-咔唑-9-乙醇二盐酸盐化合物，或其类似物、衍生物、异构体或药学上可接受的盐。
3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述坏死性凋亡抑制剂化合物包含5-((7-氯-1H-吲哚-3-基)甲基)-3-甲基-2,4-咪唑烷二酮、3-对甲氧基苯基-5,6-四亚甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮-2-巯基丙腈化合物、(Z)-5-((3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)亚甲基)-2-亚氨基-3-(噻唑-2-基)噻唑烷-4-酮化合物、5-(吲哚-3-基甲基)-(2-硫代-3-甲基)乙内酰脲化合物、1-([3S,3aS]-3-[3-氟-4-[三氟甲氧基]苯基]-8-甲氧基-3,3a,4,5-四氢-2H-苯并[g]吲唑-2-基)-2-羟基乙酮化合物、(S)-N-(1-[2-氯-6-氟苯基]乙基)-5-氰基-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺化合物、甲基-硫代乙内酰脲-色氨酸化合物、(E)-N-(4-(N-(3-甲氧基吡嗪-2-基)氨磺酰基)苯基)-3-(5-硝基噻吩-2-基)丙烯酰胺化合物、1-(4-(4-氨基呋喃并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(2-氟-5-(三氟甲基)苯基)脲化合物或2,2-二甲基-1-(5(S)-苯基-4,5-二氢-吡唑-1-基)-丙-1-酮化合物，或所述坏死性凋亡抑制剂化合物的类似物、衍生物、异构体或药学上可接受的盐。
4.根据权利要求1到3中任一项所述的组合物，其中所述5-((7-氯-1H-吲哚-3-基)甲基)-3-甲基-2,4-咪唑烷二酮化合物或其所述类似物、衍生物、异构体或药学上可接受的盐的浓度为约0.2nM-2μM。
5.根据权利要求1到4中任一项所述的组合物，其中所述3,6-二溴-α-(1-哌嗪基甲基)-9H-咔唑-9-乙醇二盐酸盐化合物或其类似物、衍生物、异构体或药学上可接受的盐的浓度为约0.5nM-50μM。
6.根据权利要求1到5中任一项所述的组合物，其另外包含烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)、三磷酸腺苷(ATP)、环孢菌素A或超氧化物歧化酶，或其任何组合。
7.根据权利要求6所述的组合物，其中所述超氧化物歧化酶包含锰超氧化物歧化酶或锌超氧化物歧化酶。
8.根据权利要求6到7中任一项所述的组合物，其中所述NAD的浓度为约5nM-500μM。
9.根据权利要求6到8中任一项所述的组合物，其中所述ATP的浓度为约10nM-1mM。
10.根据权利要求6到9中任一项所述的组合物，其中所述环孢菌素A的浓度为约1nM-1mM。
11.根据权利要求6到10中任一项所述的组合物，其中所述超氧化物歧化酶的浓度为约0.001-100Kunitz单位(KU)。
12.根据权利要求6到11中任一项所述的组合物，其包含约20nM5-((7-氯-1H-吲哚-3-基)甲基)-3-甲基-2,4-咪唑烷二酮)、约5nM3,6-二溴-α-(1-哌嗪基甲基)-9H-咔唑-9-乙醇二盐酸盐、约0.05mM烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)、约0.01μM三磷酸腺苷(ATP)、约0.01μM环孢菌素A，和约0.1Kunitz单位锰超氧化物歧化酶或锌超氧化物歧化酶。
13.根据权利要求1到12中任一项所述的组合物，其另外包含冷冻保护剂。
14.根据权利要求13所述的组合物，其中所述冷冻保护剂包含DMSO或血清，或其任何组合。
15.根据权利要求1到14中任一项所述的组合物，其另外包含药学上可接受的赋形剂或载体。
16.一种冷冻保存的方法，所述方法包含以下步骤：
(a)使多种细胞与包含坏死性凋亡抑制剂化合物和Bax通道抑制剂化合物的组合物接触；和
(b)冷却包含步骤(a)的所述多种细胞的所述组合物，
其中所述坏死性凋亡抑制剂化合物包含5-((7-氯-1H-吲哚-3-基)甲基)-3-甲基-2,4-咪唑烷二酮化合物或其类似物、衍生物、异构体或药学上可接受的盐，并且其中所述Bax通道抑制剂包含3,6-二溴-α-(-1-哌嗪基甲基)-9H-咔唑-9-乙醇二盐酸盐或其类似物、衍生物、异构体或药学上可接受的盐。
17.一种处理、防止、抑制多种细胞的细胞可塑性或坏死性凋亡或坏死或降低其发生率的方法，所述方法包含以下步骤：使所述多种细胞与包含坏死性凋亡抑制剂化合物和Bax通道抑制剂化合物的组合物接触，其中所述坏死性凋亡抑制剂化合物包含5-((7-氯-1H-吲哚-3-基)甲基)-3-甲基-2,4-咪唑烷二酮化合物或其类似物、衍生物、异构体或药学上可接受的盐，并且其中所述Bax通道抑制剂包含3,6-二溴-α-(1-哌嗪基甲基)-9H-咔唑-9-乙醇二盐酸盐或其类似物、衍生物、异构体或药学上可接受的盐。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述坏死性凋亡或坏死与衰老或疾病相关联。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述疾病为心肌梗死、继发于β细胞坏死性凋亡的糖尿病、胆汁淤积性肝脏疾病、中风、器官缺血、缺血-再灌注损伤、肝脏疾病、癌症化疗或放疗引起的坏死、创伤性脑损伤、坏死性胰腺炎、病原体引起的坏死性凋亡、炎症或神经退行性疾病。
20.根据权利要求17到19中任一项所述的方法，其中所述处理、防止、抑制细胞可塑性或坏死性凋亡或坏死或降低其发生率包含体外或体内或离体处理、防止、抑制细胞可塑性、坏死性凋亡或坏死或降低其发生率。
21.根据权利要求16到20中任一项所述的方法，其中所述多种细胞包含组织培养细胞、原代细胞、卵细胞、组织、或器官或其部分，或其任何组合。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述组织培养细胞或原代细胞包含干细胞、成年细胞、转分化细胞、去分化细胞或分化细胞，或其任何组合。
23.根据权利要求16到22中任一项所述的方法，其中所述多种细胞包含人细胞或动物细胞。
24.根据权利要求16到23中任一项所述的方法，其中接触为体内、离体或体外的。
25.根据权利要求24所述的方法，其中体内或离体接触包含灌注动物或其部分、器官或其部分、或组织。
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述灌注为心脏灌注。
27.根据权利要求24所述的方法，其中体外接触包含将所述多种细胞浸入所述组合物中，用所述组合物补充所述多种细胞的生长培养基，经由非热可逆的电穿孔用所述组合物灌注所述多种细胞，或在生物反应器中用所述组合物灌注所述多种细胞。
28.根据权利要求16到27中任一项所述的方法，其另外包含所述多种细胞的物理...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·迪登贝格，P·伊塞罗维奇，
申请(专利权)人：常青树生物科学公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。