用于在疾病的预防和/或治疗中使用的疫苗制造技术

本发明专利技术涉及能够编码病毒样颗粒（VLP）的腺病毒载体，所述VLP展示无活性的免疫抑制结构域（ISD）。本发明专利技术的疫苗显示来自由CD4T细胞或CD8T细胞起始的两种应答途径中任一者的改善的免疫应答。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于在疾病的预防和/或治疗中使用的疫苗
本公开内容涉及用于在疾病的预防和/或治疗中使用的疫苗。值得注意的是，该疾病可以衍生自内源性逆转录病毒，即例如癌症。本专利技术的疫苗特别涉及能够在真核细胞中形成病毒样颗粒的病毒。在本专利技术的某些实施方案中，在患者的体内产生病毒编码的病毒样颗粒（VE-VLP），以便发展对内源性逆转录病毒的免疫原性应答。专利技术背景一个多世纪以前就已观察到，癌症的发展与免疫系统密切相关联，并且如今，充分确定的是免疫系统长期地保护免于新出现的癌症。另一方面，恶性细胞发展出逃避免疫监视并发挥其致命潜力的策略。尽管免疫细胞能够检测并杀死肿瘤细胞，但这种系统并非总是起作用，这从全世界每年由于癌症的近900万例死亡中是显而易见的。诱导针对肿瘤细胞的特异性免疫应答的疫苗接种方法在癌症免疫治疗中是相对较老的话题，但仍处于开发中，并且最近才开始得出相关结果。一种疫苗接种策略涉及用经常分泌粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）的减毒的肿瘤细胞，例如照射的自体肿瘤或同种异体肿瘤细胞系的疫苗接种。在这两种情况下，注射的材料涵盖可能存在于实际肿瘤中的癌症抗原。其它疫苗接种策略包括施用肽或蛋白质以诱导特异性免疫应答。这些抗原或与佐剂组合直接注射，或由DNA质粒或病毒载体编码。尽管免疫治疗方法不断地改善，但仍缺乏广泛起作用且高度有效的疫苗。关于这点的特殊原因是先前描述的通过肿瘤细胞的免疫抑制。内源性逆转录病毒（ERV）是在古代祖先中由逆转录病毒的远古感染的证据。感染后，病毒RNA被逆转录成前病毒DNA，其整合到宿主基因组内。最终，前病毒被整合到种系的细胞内并且变成可遗传的，产生了内源性逆转录病毒。经过数百万年，病毒DNA世代相传并且在人群中变得被固定。如今，每一个人基因组由约8%的内源性逆转录病毒DNA组成，但这些仅是以前逆转录病毒的遗留物。由于突变、缺失和插入，大多数逆转录病毒基因变得失活或从基因组中完全丧失。如今，人中不再存在有功能的全长内源性逆转录病毒。然而，ERV经历了复制过程，导致几个拷贝与独特功能蛋白整合到宿主基因组内。因此，在一些情况下，许多同源的ERV仍具有产生病毒颗粒的潜力。人ERVK型（HERV-K，HML2）是人基因组中最新获得的ERV之一，并且这个家族的成员保留关于几乎所有病毒蛋白的全长开放读码框。不同的研究已强调了ERV表达与癌症发展和进展之间的关联。人肿瘤中的ERV检测开辟了抗癌治疗中的新领域，具有新疫苗接种策略的希望。关于人ERV（HERV）的突出例子是与前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、淋巴瘤、黑素瘤、白血病和肉瘤相关的HERVK型（HERV-K）。进一步的例子是在结肠直肠癌中表达的HERV-H，以及在睾丸癌、卵巢癌、乳腺癌、淋巴瘤和白血病中的合胞素-1。确定ERV蛋白的表达是发展中的肿瘤的原因还是结果并非总是容易的。然而，已知癌细胞内的状况允许ERV的表达。肿瘤细胞中的低甲基化的一般状态促进ERV基因的激活，所述ERV基因通常在健康细胞中通过DNA甲基化沉默（Downey，R.F.等人，HumanendogenousretrovirusKandcancer：InnocentbystanderortumorigenicaccompliceIntJCancer，2015.137（6）：第1249-57页，以及Gimenez，J.等人，Customhumanendogenousretrovirusesdedicatedmicroarrayidentifiesself-inducedHERV-Wfamilyelementsreactivatedintesticularcanceruponmethylationcontrol.NucleicAcidsRes，2010.38（7）：第2229-46页。内源因子也可以促进ERV表达。例如，观察到由于病毒感染的人ERV的激活。在流感和单纯疱疹病毒感染后检测到HERV-W表达（Nellaker，C.等人，TransactivationofelementsinthehumanendogenousretrovirusWfamilybyviralinfection.Retrovirology，2006.3：第44页），而在EB病毒感染后存在HERV-K（Sutkowski，N.等人，Epstein-BarrvirustransactivatesthehumanendogenousretrovirusHERV-K18thatencodesasuperantigen.Immunity，2001.15（4）：第579-89页）。无论导致ERV表达的机制如何，癌细胞都通过选择压力维持这些蛋白质的激活，表明ERV在肿瘤中的有益效应（Leong，S.P.等人，Expressionandmodulationofaretrovirus-associatedantigenbymurinemelanomacells.CancerRes，1988.48（17）：第4954-8页。）。不仅人肿瘤与ERV蛋白有关，而且鼠癌细胞也表达ERV。这提供了研究ERV对肿瘤进展的作用，并且测试靶向ERV的治疗方法的完美模型生物。一种ERV模型是黑素瘤相关逆转录病毒（MelARV），其源于小鼠基因组中存在的鼠白血病病毒（MuLV）的前病毒。大多数近交小鼠品系含有一个或两个失活的MuLV拷贝（Li，M.等人，Sequenceandinsertionsitesofmurinemelanoma-associatedretrovirus.JVirol，1999.73（11）：第9178-86页。）。然而，AKR小鼠品系在基因组中具有三个插入片段，并且特征在于生命早期MuLV的大量产生，导致自发性淋巴瘤的频繁发生。其它小鼠品系，如C57BL/6，只在生命的晚期自发地产生MuLV颗粒。与人ERV相似，其它几种鼠癌症模型同样表达MuLV/MelARV。由于病毒宿主的免疫系统是抵抗感染的天然防御机制，因此许多病毒，且尤其是逆转录病毒已发展出逃避这种监视的策略。在不同病毒家族各处可以看到的一种机制[Duch等人，WO2013/050048]是在包膜蛋白（Env）中的免疫抑制结构域的发展，导致免疫系统在不同水平上的抑制。免疫细胞包括天然杀伤（NK）、CD8T或调节性T（Treg）细胞可以受到含有ISD的病毒的影响[Schlecht-Louf等人（2010）]。许多ERV含有具有免疫抑制结构域（ISD）的蛋白质，并且在MelARVEnv蛋白中也可以找到此类结构域（Schlecht-Louf，G.等人，Retroviralinfectioninvivorequiresanimmuneescapevirulencefactorencryptedintheenvelopeproteinofoncoretroviruses.ProcNatlAcadSciUSA，2010.107（8）：第3782-7页，以及Mangeney，M.和T.Heidmann，Tumorcellsexpressingaretrovi本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于在疾病的预防和/或治疗中使用的核酸分子，所述核酸分子编码内源性逆转录病毒（ERV）包膜蛋白或其免疫原性部分，其中所述蛋白质的ISD含有致使ISD失活的突变。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170901 DK PA2017706591.一种用于在疾病的预防和/或治疗中使用的核酸分子，所述核酸分子编码内源性逆转录病毒（ERV）包膜蛋白或其免疫原性部分，其中所述蛋白质的ISD含有致使ISD失活的突变。


2.一种用于根据权利要求1使用的载体，其包含根据权利要求1的核酸分子，所述载体优选为腺病毒载体，更优选为衍生自哺乳动物腺病毒类型、人腺病毒类型、黑猩猩腺病毒血清型或大猩猩腺病毒血清型的腺病毒载体，其中所述人腺病毒载体衍生自D组载体、人腺病毒血清型Ad5、人腺病毒血清型Ad19a、人腺病毒血清型Ad26或黑猩猩腺病毒血清型，并且其中所述腺病毒载体是腺病毒血清型5（Ad5）或腺病毒血清型19（Ad19）。


3.用于根据权利要求2使用的根据权利要求2的载体，其中所述载体编码病毒样颗粒（VLP），所述VLP展示内源性逆转录病毒（ERV）包膜蛋白或其免疫原性部分，具有无活性的免疫抑制结构域（ISD）。


4.一种用于在疾病的预防和/或治疗中使用的蛋白质，其包含权利要求3的载体的表达产物。


5.一种用于在疾病的预防和/或治疗中使用的疫苗，其包含根据前述权利要求中任一项的核酸分子或载体或者根据权利要求的蛋白质。


6.用于根据前述权利要求使用的根据前述权利要求中任一项的核酸分子、载体、蛋白质或疫苗，其中所述疾病是癌症，更优选表达ERV的癌症，再更优选选自前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、淋巴瘤、黑素瘤、白血病、肉瘤、结肠直肠癌、睾丸癌、肺癌和肝癌的癌症。


7.用于根据前述权利要求使用的根据前述权利要求中任一项的核酸分子、载体或疫苗，其中所述ISD具有肽序列LANQINDLRQTVIW（SEQIDNo.1）、LASQINDLRQTVIW（SEQIDNo.2）、LQNRRGLDLLTAEKGGL（SEQIDNo.3）、LQNRRALDLLTAERGGT（SEQIDNo.4）、LQNRRGLDMLTAAQGGI（SEQIDNo.5）、YQNRLALDYLLAAEGGV（SEQIDNo.6）或NSQSSIDQKLANQINDLRQT（SEQIDNo.49），其具有至少一个氨基酸与不同的氨基酸交换。


8.用于根据前述权利要求使用的根据前述权利要求中任一项的核酸分子、载体或疫苗，其中在所述ISD上游或下游的10个氨基酸的区域中的至少一个氨基酸与不同的氨基酸交换。


9.用于根据前述权利要求使用的根据前述权利要求中任一项的核酸分子、载体或疫苗，其中所述ERV蛋白是人内源性逆转录病毒（HERV）蛋白或...

【专利技术属性】
技术研发人员：P霍尔斯特，C蒂里翁，L诺伊基尔希，
申请(专利权)人：盈珀治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：丹麦;DK