包含RNA治疗剂的外泌体制造技术

本发明专利技术涉及细胞外囊泡(EV)治疗剂，其中所述EV包含基于核酸(NA)的治疗剂，例如m RNA、环状RNA、mi RNA、sh RNA、环状RNA和/或DNA分子。使用本发明专利技术的工程化改造蛋白和NA工程策略将NA治疗剂加载到EV中，以增强到EV中的加载并促进NA货物分子在靶细胞内的释放。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含RNA治疗剂的外泌体
本专利技术涉及细胞外囊泡(EV)治疗剂，其中EV包含内源性加载的RNA治疗剂，例如mRNA、环状RNA、miRNA、shRNA和各种其它RNA治疗剂。
技术介绍
基于核酸的治疗剂正迅速进入临床应用。基因疗法、基于mRNA的疗法、基于短寡核苷酸和siRNA的疗法只是RNA疗法领域内众多模式中的一些实例。裸核酸(通常为RNA)由于清除速度快、具有核酸酶活性、缺乏器官特异性分布以及细胞摄取效率低而难以在体内递送，因此通常必须使用专门的递送载体作为实现生物活性递送的手段。对于非肝靶标和高分子量RNA治疗剂(例如mRNA和基因疗法)尤其如此。细胞外囊泡(例如外泌体)通常是由大多数细胞类型产生的纳米大小的囊泡，并充当人体用于细胞间蛋白质、核酸、肽、脂质和各种其它分子的天然转运系统。含RNA的EV具有多种潜在的治疗用途，并且已经被研究用作基因疗法、mRNA递送和各种环境中短核酸递送的递送载体。WO2010/119256代表使用外泌体的核酸递送领域中的基础专利技术，并且所述申请教导了外泌体用于递送几种类型的核酸货物的实用性。未本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种包含至少一个融合多肽的细胞外囊泡(EV)，所述至少一个融合多肽包含至少一个核酸(NA)结合结构域和至少一个外泌体多肽，其中所述至少一个NA结合结构域是PUF、Cas6、Cas13和/或NA适体结合结构域中的一个或多个。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171108 GB 1718471.41.一种包含至少一个融合多肽的细胞外囊泡(EV)，所述至少一个融合多肽包含至少一个核酸(NA)结合结构域和至少一个外泌体多肽，其中所述至少一个NA结合结构域是PUF、Cas6、Cas13和/或NA适体结合结构域中的一个或多个。


2.根据权利要求1所述的EV，进一步包含至少一个NA货物分子。


3.根据权利要求2所述的EV，其中所述至少一个NA货物分子借助于所述融合多肽运输到所述EV中。


4.根据权利要求2至3中任一项所述的EV，其中所述NA货物分子选自由shRNA、miRNA、mRNA、gRNA、pri-miRNA、pre-miRNA、环状RNA、piRNA、tRNA、rRNA、snRNA、lncRNA、核酶、微环DNA和/或质粒DNA组成的组。


5.根据权利要求2至4中任一项所述的EV，其中每个NA货物分子包含(i)所述NA结合结构域的至少一个结合位点和(ii)治疗性多核苷酸结构域。


6.根据权利要求5所述的EV，其中所述NA货物分子在所述至少一个结合位点与所述治疗性多核苷酸结构域之间包含切割位点。


7.根据权利要求2至6中任一项所述的EV，其中所述NA货物分子编码治疗性多肽。


8.根据权利要求7所述的EV，其中所述治疗性多肽选自由抗体、胞内抗体、单链可变片段、亲和体、酶、转运蛋白、肿瘤抑制因子、病毒或细菌抑制剂、细胞成分蛋白、DNA和/或RNA结合蛋白、DNA修复抑制剂、核酸酶、蛋白酶、整合酶、转录因子、生长因子、凋亡抑制剂和诱导剂、毒素、结构蛋白、神经营养因子、膜转运蛋白、核苷酸结合蛋白、热休克蛋白、CRISPR相关蛋白及其任何组合组成的组。


9.根据前述权利要求中任一项所述的EV，其中所述融合多肽包含至少一个外泌体多肽，所述至少一个外泌体多肽在N端和/或C端侧接NA结合结构域和/或其中所述至少一个NA结合结构域插入到所述外泌体多肽序列中。


10.根据前述权利要求中任一项所述的EV，其中所述外泌体多肽选自由CD9、CD53、CD63、CD81、CD54、CD50、FLOT1、FLOT2、CD49d、CD71、CD133、CD138、CD235a、ALIX、AARDC1、Syntenin-1、Syntenin-2、Lamp2b、TSPAN8、syndecan-1、syndecan-2、syndecan-3、syndecan-4、TSPAN14、CD37、CD82、CD151、CD231、CD102、NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3、NOTCH4、DLL1、DLL4、JAG1、JAG2、CD49d/ITGA4、ITGB5、ITGB6、ITGB7、CD11a、CD11b、CD11c、CD18/ITGB2、CD41、CD49b、CD49c、CD49e、CD51、CD61、CD104、Fc受体、白介素受体、免疫球蛋白、MHC-I或MHC-II成分、CD2、CD3ε、CD3ζ、CD13、CD18、CD19、CD30、CD34、CD36、CD40、CD40L、CD44、CD45、CD45RA、CD47、CD86、CD110、CD111、CD115、CD117、CD125、CD135、CD184、CD200、CD279、CD273、CD274、CD362、COL6A1、AGRN、EGFR、GAPDH、GLUR2、GLUR3、HLA-DM、HSPG2、L1CAM、LAMB1、LAMC1、LFA-1、LGALS3BP、Mac-1α、Mac-1β、MFGE8、SLIT2、STX3、TCRA、TCRB、TCRD、TCRG、VTI1A、VTI1B、其它外泌体多肽及其任何组合组成的组。


11.根据前述权利要求中任一项所述的EV，其中所述EV进一步包含至少一个靶向部分。


12.根据权利要求2至11中任一项所述的EV，其中所述NA货物分子是线性的、环化的和/或具有任何二级和/或三级和/或其它结构。


13.根据权利要求2至12中任一项所述的EV，其中所述NA货物分子包含以下的一个或多个：
(i)miRNA结合位点，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：L埃利切利，D古普塔，J黑安，J诺丁，
申请(专利权)人：医福斯治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB