可溶性转铁蛋白受体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种可溶性转铁蛋白受体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法，属于体外检测技术领域。该试剂盒包括：链霉亲和素磁颗粒；化学发光标记物标记的可溶性转铁蛋白受体单克隆抗体；偶联标记物标记的可溶性转铁蛋白受体单克隆抗体。本发明专利技术还提供一种可溶性转铁蛋白受体化学发光免疫检测试剂盒的制备方法。本发明专利技术的试剂盒检测时间短、灵敏度高、重复性好。

【技术实现步骤摘要】
可溶性转铁蛋白受体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
本专利技术属于体外检测
，涉及一种可溶性转铁蛋白受体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
转铁蛋白受体(TFR)介导含铁的铁蛋白从细胞外进入细胞内。TFR存在于许多细胞的表面，但是在血红蛋白合成过程中TFR大部分存在于活性细胞上。转铁蛋白受体是一种以非二硫键连接的跨膜蛋白，该蛋白由二个完全相同的肽链组成，每条肽链的分子量为95KD。可溶性转铁蛋白受体(sTFR)是通过细胞表面受体的蛋白水解作用衍生过来的。在血清中sTFR和不同的转铁蛋白以复合物的形式存在，血清中的sTFR大约80％来源于早期的红细胞，当红细胞生成活性增加特别是铁缺乏时会引起sTFR合成的增加，从而使血清中sTFR浓度的升高。有证据表明，感染或炎症性疾病不会引起血清中STFR浓度是任何显著性变化，因而sTFR测定的临床解释比铁蛋白测定更简便可靠。缺铁在儿童，青春期少女，育龄期妇女，老年人尤为常见，其危害性很大。在临床实践中，原有的检查方法原发性缺铁性贫血的诊断相对容易，但是对尚未发生贫血而体内铁已缺乏的亚临床状态的判断，以及对感染或者恶性肿瘤引起的贫血(慢性病贫血)是否伴有缺铁则要困难得多。而对于体内铁是否过剩的判断(铁摄入过多)就更无计可施了。血清转铁蛋白受体(sTFR)测定可以比较好的解决这个问题。缺铁时转铁蛋白受体升高，铁过剩时转铁蛋白受体降低。急性相反应(感染或炎症引起)时转铁蛋白受体没有改变，(血清铁、转铁蛋白、铁蛋白等此时都会受急性相反应的影响)。检测转铁蛋白受体还可以在促红细胞生成素(EPO)治疗时做疗效观察(红细胞增多时sTFR升高)，判定剂量是否合适。可溶性转铁蛋白受体的意义如下：(1)缺铁性贫血的诊断，缺铁性贫血和慢性疾病引起的贫血(ACD)的鉴别诊断。在铁缺乏早期可以观察到sTFR浓度的升高。sTFR是功能性铁状态的一项特异性检测指标，不受各种干扰因素的影响，例如急性或慢性炎症反应、怀孕等。在临床实践中，血清铁蛋白(Fer)、sTFR和血红蛋白联合检测可准确分析病人铁缺乏的状态，这些分析物表明铁缺乏的不同阶段。(2)可预测促红细胞生成素治疗效果。(3)在健康人群中，体内高的铁贮存预示非胰岛素依赖性糖尿病(NIDDM)。NIDDM是铁过多性疾病的一种普通的并发症；例如血色素沉着症。NIDDM的危险性和铁过多的量有关，高的铁贮存和低的铁贮存的人相比发生NIDDM的危险性增高2.38倍。化学发光免疫测定(CLIA)是继酶免技术、放免技术、荧光免疫技术和时间分辨荧光免疫技术之后发展的一项新兴免疫测定技术。由于它既具有免疫反应的高度特异性，又具有发光反应的高敏感性，近年来已被国内外临床实验室及科研单位广泛应用于各种激素、特种蛋白及药物的监测和分析。该方法具有灵敏度高、特异性强、线性范围宽、操作简便、试剂稳定性好、操作简便、容易实现自动化的优点，是理想的临床微量生化检验分析手段。目前我国获准上市的临床检测可溶性转铁蛋白受体(aTFR)试剂盒检测原理主要以酶联免疫法(ELISA)为主。传统的酶联免疫法不仅操作繁琐，自动化程度低，受人为因素影响大，不利于在基层医院推及，而且特异性及灵敏性都有待提高。目前CLIA发展迅速有取代ELISA而成为主流产品的趋势。但存在着国外的检测系统价格昂贵难以普及，国内的虽然价格便宜但具有线性范围窄，检测时间长等缺点，无法满足临床需求。基于以上情况，研制开发高特异性、高灵敏度的吖啶酯类可溶性转铁蛋白受体(aTFR)化学发光免疫分析试剂盒，定量检测血清或血浆中的促红细胞生成激素(aTFR)，用于贫血的辅助诊断及疗效监测等，从理论与实际意义上讲是切实可行，并有广泛市场前景。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有的检测可溶性转铁蛋白受体(aTFR)的方法检测时间长、灵敏度低、重复性差的问题，而提供一种可溶性转铁蛋白受体(aTFR)化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法。本专利技术首先提供一种可溶性转铁蛋白受体(aTFR)化学发光免疫检测试剂盒，该试剂盒包括：链霉亲和素磁颗粒；化学发光标记物标记的可溶性转铁蛋白受体(aTFR)单克隆抗体；偶联标记物标记的可溶性转铁蛋白受体(aTFR)单克隆抗体。优选的是，所述的试剂盒中，链霉亲和素磁颗粒质量百分比为0.01％-1％。优选的是，所述链霉亲和素磁颗粒的粒径是0.05-3μm。优选的是，所述化学发光标记物标记的可溶性转铁蛋白受体(aTFR)单克隆抗体中，可溶性转铁蛋白受体(aTFR)单克隆抗体与化学发光标记物摩尔比为1:1-1:20，化学发光标记物标记的可溶性转铁蛋白受体(aTFR)单克隆抗体的浓度为≥0.1μg/mL。优选的是，所述化学发光标记物为吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺和三联吡啶钌。优选的是，所述的吖啶酯结构如下：优选的是，所述偶联标记物标记的可溶性转铁蛋白受体(aTFR)单克隆抗体中，可溶性转铁蛋白受体(aTFR)单克隆抗体与偶联标记物的摩尔比为1:1-1:20，偶联标记物标记的可溶性转铁蛋白受体(aTFR)单克隆抗体的浓度为≥0.7μg/mL。优选的是，所述偶联标记物为生物素，生物素结构如下：优选的是，所述的试剂盒还包括可溶性转铁蛋白受体(aTFR)校准品，所述可溶性转铁蛋白受体(aTFR)校准品将aTFR纯品用标准品稀释液配制成浓度分别为0.00nmol/L、2nmol/L、10nmol/L、30nmol/L、75nmol/L、150nmol/L和300nmol/L的可溶性转铁蛋白受体(aTFR)标准溶液。本专利技术还提供上述的可溶性转铁蛋白受体(aTFR)的化学发光免疫检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：步骤一：链霉亲和素磁颗粒的制备将链霉亲和素磁颗粒溶液和TBST溶液混匀后，放置在磁分离器上，直至上清液无混浊，弃上清，留取磁颗粒，清洗后在缓冲液中配成固相试剂；步骤二：化学发光标记物标记的可溶性转铁蛋白受体(aTFR)单克隆抗体的制备将可溶性转铁蛋白受体(aTFR)单克隆抗体放入离心管中离心，然后加入碳酸缓冲液，混匀后加入化学发光标记物溶液离心，将离心管密封后放入避光暗盒中，然后将暗盒放入气浴恒温振荡器中混匀，加入封闭液，放入气浴恒温振荡器中混匀，将封闭好的抗体经过纯化、收集，然后放入缓冲液中稀释，保存；步骤三：偶联标记物标记的可溶性转铁蛋白受体(aTFR)单克隆抗体的制备将可溶性转铁蛋白受体(aTFR)单克隆抗体放入离心管中离心，然后加入TRIS缓冲液，混匀后加入偶联标记物溶液离心，反应后加入赖氨酸继续反应，最后将反应液用脱盐柱纯化、收集后放入缓冲液中稀释，保存。本专利技术的有益效果本专利技术首先提供一种可溶性转铁蛋白受体(aTFR)化学发光免疫检测试剂盒，该试剂盒以链霉亲和素磁颗粒作为固相载体，双抗体夹心原理进行检测，结合发光强度和灵敏度都较高的化学发光物质对a本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种可溶性转铁蛋白受体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：/n链霉亲和素磁颗粒；/n化学发光标记物标记的可溶性转铁蛋白受体单克隆抗体；/n偶联标记物标记的可溶性转铁蛋白受体单克隆抗体。/n

【技术特征摘要】
1.一种可溶性转铁蛋白受体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：
链霉亲和素磁颗粒；
化学发光标记物标记的可溶性转铁蛋白受体单克隆抗体；
偶联标记物标记的可溶性转铁蛋白受体单克隆抗体。


2.根据权利要求1所述的一种可溶性转铁蛋白受体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中，链霉亲和素磁颗粒质量百分比为0.01％-1％。


3.根据权利要求1所述的一种可溶性转铁蛋白受体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素磁颗粒的粒径是0.05-3μm。


4.根据权利要求1所述的一种可溶性转铁蛋白受体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物标记的可溶性转铁蛋白受体单克隆抗体中，可溶性转铁蛋白受体单克隆抗体与化学发光标记物摩尔比为1:1-1:20，化学发光标记物标记的可溶性转铁蛋白受体单克隆抗体的浓度为≥0.1μg/mL。


5.根据权利要求1所述的一种可溶性转铁蛋白受体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物为吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺和三联吡啶钌。


6.根据权利要求5所述的一种可溶性转铁蛋白受体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的吖啶酯结构如下：





7.根据权利要求1所述的一种可溶性转铁蛋白受体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述偶联标记物标记的可溶性转铁蛋白受体单克隆抗体中，可溶性转铁蛋白受体单克隆抗体与偶联标记物的摩尔比为1:1-1:20，偶联标记物标记的可溶性转铁蛋白受体单克隆抗体的浓度为≥0.7μg/mL。<...

【专利技术属性】
技术研发人员：李磊，李冬梅，孙成艳，高威，何浩会，
申请(专利权)人：迪瑞医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林;22