一种发根农杆菌介导的转基因杨树的构建方法和其应用技术

本发明专利技术公开了一种发根农杆菌介导的转基因杨树的构建方法和其应用，涉及转基因技术领域。具体而言，该构建方法将外植体接种于固态且预培养有发状根农杆菌菌落的基础培养基上，共培养后筛选培养至外植体内浸染有发状根农杆菌，该构建方法耗时短，无需进行摇液，也无需控制菌液OD值，在浸染过程中，平均每株植物的操作时间不超过5min，显著降低了实验时间和操作难度，且转化效率高，为转基因植物的培育提供了一种新的方法。

【技术实现步骤摘要】
一种发根农杆菌介导的转基因杨树的构建方法和其应用
本专利技术涉及转基因
，具体而言，涉及一种发根农杆菌介导的转基因杨树的构建方法和其应用。
技术介绍
根癌农杆菌介导的杨树转基因技术，虽然一定程度上促进了杨树遗传转化和基因功能研究的发展，然而现有的根癌农杆菌介导的杨树转基因方法仍存在实验周期长，操作繁琐，效率不高，转基因植物多为嵌合体等缺陷。鉴于根癌农杆菌(A.tumefaciens)在杨树遗传转化中的这些不足，同样具有将外源基因引入杨树基因组能力的发根农杆菌(Agrobacteriumrhizogenes)逐渐进入了人们的视野。目前发根农杆菌介导的杨树转基因基本采用与根癌农杆菌相似的转化方法，包括使用叶片或者茎段作为外植体，与一定OD值的菌液共培养以获得转基因根。按照农杆菌侵染操作的不同，现有的农杆菌介导的杨树转基因方法可简单分为两组：菌液侵染法和注射器针头刺入法。菌液侵染法需要特定OD值的菌液，需要对转化的外植体(叶子或茎段)进行预处理(划痕与切块)，实验时间长；再有，在筛选的过程中，残留在外植体伤口的农杆菌因无法接触到培养基中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种发根农杆菌介导的转基因杨树的构建方法，其特征在于，其包括以下步骤：将外植体接种于固态且预培养有发状根农杆菌菌落的基础培养基上，共培养后筛选培养至外植体内浸染有发状根农杆菌。/n

【技术特征摘要】
1.一种发根农杆菌介导的转基因杨树的构建方法，其特征在于，其包括以下步骤：将外植体接种于固态且预培养有发状根农杆菌菌落的基础培养基上，共培养后筛选培养至外植体内浸染有发状根农杆菌。


2.根据权利要求1所述的发根农杆菌介导的转基因杨树的构建方法，其特征在于，所述预培养的培养时间为1～3天；
优选地，基础培养基的组分包括：MS粉末0.59～4.74g/L、蔗糖25g/L和琼脂6～8g/L，pH为5.6～6.0。


3.根据权利要求1所述的发根农杆菌介导的转基因杨树的构建方法，其特征在于，所述共培养的培养条件为：23～25℃，时间为1～3天；
优选地，外植体接种的区域为生长有菌落的区域。


4.根据权利要求1所述的发根农杆菌介导的转基因杨树的构建方法，其特征在于，所述发状根农杆菌为携带有目的基因的发根农杆菌；
优选地，所述发状根农杆菌的类型选自：发根农杆菌K599、Ar.Qual、A4和C5851中的至少一种。


5.根据权利要求1所述的发根农杆菌介导的转基因杨树的构建方法，其特征在于，所述构建方法还包括将共培养后的外植体转移至筛选培养基中培养，然后筛选能够生长毛状根的外植体。


6.根据权利要求5所述的发根...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩梅，孙署悦，王明耀，苏涛，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32