稳定且副作用少的基因组编辑用复合物和编码该复合物的核酸制造技术

本发明专利技术提供一种复合物，其为核酸序列识别模块与蛋白降解标签结合而得的复合物，所述核酸序列识别模块与双链DNA中的靶核苷酸序列特异性地结合，所述蛋白降解标签由(i)在C末端包含疏水性氨基酸的3个残基的肽或(ii)在C末端包含该氨基酸残基的至少一部分被丝氨酸取代的氨基酸的3个残基的肽构成。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】稳定且副作用少的基因组编辑用复合物和编码该复合物的核酸
本专利技术涉及稳定且副作用少的基因组编辑用复合物和编码该复合物的核酸、以及使用了该复合物的基因组编辑方法。
技术介绍
无需进行选择标记基因的整合、即可将对相同操纵子中的下游基因的表达的影响抑制在最小限度的这样的基因组编辑在原核生物中特别有利。源自噬菌体的RecET和λ-Red重组酶被用作重组技术，使依赖于供体DNA或寡核苷酸的同源性的整合/取代容易进行(例如非专利文献1)。通过与缺损了甲基定向性错配修复(MMR)的菌株组合，无需整合选择标记，即可实现高效率的重组(非专利文献2)，在几天内会产生多个靶基因座中的遗传多态性，因此在多重自动基因组工程学方法(MAGE)中应用。然而，上述重组技术依赖于MMR的缺损、或作为重组DNA修复系统的中心构成要素的RecA这样的宿主依赖性因子，会给作为用于克隆的宿主而使用的大部分大肠杆菌带来危害，因此无法容易地转用到背景不同的细菌种(非专利文献3)。已知成簇的规律间隔短回文重复序列(clusteredregularlyinterspaceds本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.复合物，其为核酸序列识别模块与蛋白降解标签结合而得的复合物，所述核酸序列识别模块与双链DNA中的靶核苷酸序列特异性地结合，所述蛋白降解标签由(i)在C末端包含疏水性氨基酸的3个残基的肽或(ii)在C末端包含该氨基酸残基的至少一部分被丝氨酸取代的氨基酸的3个残基的肽构成。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171122 JP 2017-2252211.复合物，其为核酸序列识别模块与蛋白降解标签结合而得的复合物，所述核酸序列识别模块与双链DNA中的靶核苷酸序列特异性地结合，所述蛋白降解标签由(i)在C末端包含疏水性氨基酸的3个残基的肽或(ii)在C末端包含该氨基酸残基的至少一部分被丝氨酸取代的氨基酸的3个残基的肽构成。


2.权利要求1所述的复合物，上述复合物为进一步结合有核酸修饰酶的复合物，其中，将靶向位点的1个以上的核苷酸转换成其他的1个以上的核苷酸或使其缺失、或者在该靶向位点插入1个以上的核苷酸。


3.权利要求1或2所述的复合物，其中，上述氨基酸的3个残基为亮氨酸-缬氨酸-丙氨酸、亮氨酸-丙氨酸-丙氨酸、丙氨酸-丙氨酸-缬氨酸或丙氨酸-丝氨酸-缬氨酸。


4.权利要求1～3中任一项所述的复合物，其中，上述核酸序列识别模块为Cas的2个DNA切割能力中的仅一方、或两方的DNA切割能力失活的CRISPR-Cas系统。


5.权利要求1～3中任一项所述的复合物，其中，上述复合物为CRISPR-Cas系统与蛋白降解标签结合而得的复合物。


6.权利要求2～4中任一项所述的复合物，其中，上述核酸修饰酶为核酸碱基转换酶或DNA糖基化酶。


7.权利要求6所述的复合物，其中，上述核酸碱基转换酶为脱氨酶。


8.权利要求6或7所述的复合物，该复合物进一步结合有碱基切除修复抑制剂。


9.核酸，该核酸编码权利要求1～8中任一项所述的复合物。


10.修饰细菌的双链DNA的靶向位点、或在该位点附近调控双链DNA所编码的基因的表达的方法，该方法包括以下步骤：使核酸序列识别模块与蛋白降解标签结合而得的复合物、与该双链DNA接触，所述核酸序列识别模块与所选择...

【专利技术属性】
技术研发人员：西田敬二，
申请(专利权)人：国立大学法人神户大学，
类型：发明
国别省市：日本;JP