诱导性多能干细胞衍生的γδT细胞及其产生方法技术

提供了一种γδT细胞，用于确保足以进行处理的细胞的纯度和数量。还提供了一种产生γδT细胞的方法。更具体地，提供了均质的γδT细胞，其优异之处在于γδT细胞不受细胞耗竭影响。上述方案是通过对诱导性多能干细胞(iPS细胞)进行分化诱导处理而获得的γδT细胞实现的。具体而言，上述方案是通过对具有重排γδTCR基因的iPS细胞(γδTCR

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】诱导性多能干细胞衍生的
γδ
T细胞及其产生方法


[0001]本专利技术涉及诱导性多能干细胞(iPS细胞)衍生的γδT细胞及其产生方法。具体地，本专利技术涉及iPS细胞衍生的γδT细胞，所述T细胞以不受MHC限制的方式作用，以及产生该T细胞的方法。本专利技术还涉及包括所产生的iPS细胞衍生的γδT细胞的细胞群。
[0002]本申请要求日本专利申请No.2021
‑
017831的优先权，该申请通过引用并入本文。

技术介绍

[0003]人类成熟T细胞大致分为两组：具有T细胞受体的αβT细胞，所述T细胞受体由α链和β链组成；以及具有T细胞受体的γδT细胞，所述T细胞受体由γ链和δ链组成的。众所周知，αβT细胞极其多样，由于MHC限制性，单一类型的αβT淋巴细胞可以攻击少数几种细胞，而在γδT细胞中，单一类型γδT细胞以不受MHC限制的方式攻击多种癌症细胞。γδT细胞通过识别并直接损伤具有单一类型T细胞受体(TCR)的多种癌症细胞。然而，γδT细胞通常仅以1％至5％的比例存在于外周血中。因此，存在一个问题，即不能通过收集少量血液以及使γδT细胞激活和/或生长来确保足以用来治疗的细胞纯度和数量。此外，为了确保足以用于治疗的细胞纯度和数量而增加从患者采集的血液量时，还存在给患者带来巨大负担的问题。从患者外周血中分离的γδT细胞体外扩增并将所得细胞输注到患者体内的治疗方法已经投入实践。然而，由于难以确保细胞数量以及由于细胞的耗竭，这种方法没有实现足够的扩增和活化。
[0004]产生具有重排的γδTCR基因的iPS细胞(γδTCR
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型iPS细胞)的方法(专利文献1和非专利文献1)已有公开。在专利文献1和非专利文献1中，还公开了γδTCR型iPS细胞被诱导分化为造血祖细胞。然而，没有造血祖细胞被进一步诱导分化为T细胞的公开。
[0005]T细胞衍生的iPS细胞分化为T细胞的诱导方法已有公开(专利文献2)。此外，据报道，当iPS细胞由含有癌症抗原特异性TCR基因重排的T细胞生成并诱导分化时，可以获得与原始细胞具有相同重排的T细胞。有报道称：诱导CD8
+
αβT细胞衍生的人iPS细胞分化，从而使人肿瘤抗原特异性αβT淋巴细胞再生(非专利文献2)；并且通过分化诱导获得的人肿瘤抗原特异性αβT细胞以抗原特异性的方式显示细胞毒性(非专利文献3以及专利文献3和4)。有报道称，当iPS细胞由携带肿瘤抗原特异性TCR基因重排的T细胞产生并被诱导分化时，获得了携带与原始细胞相同重排的T细胞。然而，每一份报告都与αβT细胞有关，没有γδT细胞的公开。上述αβT细胞均为具有特定αβTCR的细胞，因此，由于表达目标抗原的癌症种类较少，并且存在MHC限制性，因此可以用其治疗的患者受到限制。
[0006]有报道称，通过诱导ES细胞或iPS细胞等干细胞分化而获得的T细胞显示出γδT细胞样表型(非专利文献4和专利文献5)。然而，上述文献中描述的T细胞虽然被发现在基因表达模式等方面与γδT特征表型相似，但不能说是实际表达γδT细胞受体从而识别抗原并损伤靶细胞的T细胞，即γδT细胞。
[0007]需要一种有效制备T细胞的方法，所述T细胞能够以不受MHC限制的方式攻击多种癌症细胞。
[0008]引文列表
[0009]专利文献
[0010][专利文献1]WO 2018/143243A1(PCT/JP2018/003120)
[0011][专利文献2]WO 2011/096482 A1
[0012][专利文献3]WO 2016/01153 A1
[0013][专利文献4]WO 2016/01555 A1
[0014][专利文献5]WO 2014/165707 A2
[0015]非专利文献
[0016][非专利文献1]Stem cells translational medicine,7(1),34
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44(2018)
[0017][非专利文献2]Cell Stem Cell,12,31
‑
36(2013)
[0018][非专利文献3]Cancer Research,76(23),6839(2016)
[0019][非专利文献4]Nat Biotechnol,31,928
‑
3(2013)

技术实现思路

[0020]技术问题
[0021]γδT细胞通常仅以1％至5％的比例存在于外周血中，因此存在无法确保足以进行治疗的细胞纯度和数量的问题。此外，还存在一个问题，即当为了确保足以用于治疗的细胞纯度和数量而增加要采集的血液的量时，给采集血液的人带来了巨大的负担。由于难以确保细胞的数量以及由于细胞的耗竭，涉及对从外周血中分离的γδT细胞进行体外扩增的方法没能实现足够的扩增和活化。
[0022]本专利技术的目的是有效地产生和提供γδT细胞。更具体地，本专利技术的目的是提供均质的γδT细胞，其优异之处在于γδT细胞不受细胞耗竭的影响。
[0023]问题的解决方案
[0024]为了实现上述目的，本专利技术的专利技术人对分化诱导处理方法进行了广泛的研究，他们的注意力集中在iPS细胞上，结果，成功地产生了保留γδT细胞功能的优秀γδT细胞。因此，专利技术人完成了本专利技术。
[0025]也就是说，本专利技术包括以下内容。
[0026]1.一种诱导性多能干细胞(iPS细胞)衍生的γδT细胞，其是衍生自iPS细胞的T细胞，其中所述T细胞以不受MHC限制的方式具有抗原特异性细胞毒活性。
[0027]2.根据上述项目1的iPS细胞衍生的γδT细胞，其中所述iPS细胞是非αβT细胞来源的iPS。
[0028]3.根据上述项目1或2所述的iPS细胞衍生的γδT细胞，其中所述iPS细胞是具有重排γδTCR基因的iPS细胞。
[0029]4.一种iPS细胞衍生的γδT细胞，其通过对具有重排γδTCR基因的iPS细胞进行分化诱导处理而产生。
[0030]5.一种产生iPS细胞衍生的γδT细胞的方法，包括培养造血祖细胞的步骤，所述造血祖细胞通过使用通过向基础培养基补充选自FMS样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)干细胞因子(SCF)、IL
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2、IL
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7、血小板生成素(TPO)和L
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抗坏血酸的一种或多种而获得的培养基对具有重排γδTCR基因的iPS细胞进行分化诱导处理而获得。
[0031]6.根据上述项目5所述的产生iPS细胞衍生的γδT细胞的方法，还包括：在使用通过向基础培养基补充选自FLT3L、SCF、IL
‑
2、IL
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7、TPO和L
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抗坏血酸中的一种或多种而获得的培养基培养造血祖细胞的步骤之后，使用含有γδT细胞刺激物的培养基对所得到的细胞进行培养的步骤。
[0032]7.根据上述项目5或6所述的产生i本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种诱导性多能干细胞(iPS细胞)衍生的γδT细胞，其是衍生自iPS细胞的T细胞，其中所述T细胞以不受MHC限制的方式具有抗原特异性细胞毒活性。2.根据权利要求1所述的iPS细胞衍生的γδT细胞，其中所述iPS细胞是非αβT细胞衍生的iPS细胞。3.根据权利要求1或2所述的iPS细胞衍生的γδT细胞，其中所述iPS细胞是具有重排的γδTCR基因的iPS细胞。4.一种iPS细胞衍生的γδT细胞，其通过对具有重排γδTCR基因的iPS细胞进行分化诱导处理而产生。5.一种产生iPS细胞衍生的γδT细胞的方法，包括培养造血祖细胞的步骤，所述造血祖细胞通过使用通过向基础培养基补充选自FMS样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)、干细胞因子(SCF)、IL
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2、IL
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7、血小板生成素(TPO)和L
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抗坏血酸的一种或多种而获得的培养基对具有重排γδTCR基因的iPS细胞进行分化诱导处理而获得。6.根据权利要求5所述的产生iPS细胞衍生的γδT细胞的方法，所述方法还包括在使用通过向基础培养基补充选自FLT3L、SCF、IL
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2、IL
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7、TPO和L
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抗坏血酸的一种或多种获得的培养基培养造血祖细胞的步骤之后，使用含有γδT细胞刺激物的培养基培养所得到的细胞的步骤。7.根据权利要求5或6所述的产生iPS细胞衍生的γδT细胞的方法，其中使用通过向基础培养基补充选自FLT3L、SCF、IL
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2、IL
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7、TPO和L
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抗坏血酸中的一种或多种获得的培养基培养造血祖细胞的步骤是通过与饲养细胞共培养来培养造血祖细胞的步骤。8.根据权利要求5或6所述的产生iPS细胞衍生的γδT细胞的方法，其中使用通过向基础培养基补充选自FLT3L、SCF、IL
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2、IL
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7、TPOL
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和抗坏血酸中的一种或多种获得的培养基培养造血祖细胞的步骤是在不与饲养细胞共培养的情况下培养造血祖细胞的步骤。9.根据权利要求8所述的产生iPS细胞衍生的γδT细胞的方法，其中在不与饲养细胞共培养的情况下培养所述造血祖细胞的步骤包括用包被有血管细胞粘附分子
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1(VCAM1)；以及δ样蛋白4(DLL4)或δ样蛋白质1(DLL1)的培养基板培养所述血造血祖细胞。10.根据权利要求8或9所述的产生iPS细胞衍生的γδT细胞的方法，其中在不与饲养细胞共培养的情况下培养所述造血祖细胞的步骤还包括使用含有DKK1和/或壬二酸(AZA)的培养基培养所述造血祖细胞的步骤。11.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：青井贵之，村井信幸，
申请(专利权)人：国立大学法人神户大学，
类型：发明
国别省市：