靶基因改造用组合物制造技术

本发明专利技术提供用于递送能够实现细胞中的高基因改造效率的基因改造工具的递送方法。本发明专利技术的组合物为用于诱导细胞中的靶基因座上的基因改造的组合物，其包含：1)式(I)所表示的化合物或其盐、2)结构脂质、以及3)指导RNA或包含编码该指导RNA的序列的DNA、和/或RNA引导性核酸酶或包含编码该RNA引导性核酸酶的序列的核酸。式(I)中，n表示2～5的整数，R表示直链状C

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】靶基因改造用组合物
本专利技术涉及能够将作为活性成分的CRISPR系统中使用的物质导入到细胞内的组合物。此外，本专利技术还涉及使用这样的组合物来诱导细胞中的靶基因座上的基因改造的方法、例如通过对肌细胞的肌养蛋白基因进行改造而预防或治疗肌营养不良症的方法。
技术介绍
近年来，利用基因组编辑手段、例如CRISPR(Clusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeats，成簇的规律间隔的短回文重复序列)系统，进行了用于在各种细胞中进行基因改造的研究开发。但是，少有关于通过经注射等给药于生物体而将CRISPR系统中所需的gRNA(指导RNA)或编码RNA引导性核酸酶(Cas9等)的基因等的基因改造工具递送到目标细胞中来进行基因改造的报道，期望开发出用于递送例如能够实现肌细胞中的高基因改造效率的基因改造工具的递送方法。作为CRISPR系统，已知1类和2类，1类中已知I型、III型、IV型，2类中已知II型、V型和VI型。进行基因改造时，广泛使用与DNA结合并切断的2类II型的Cas9，但也使用同样地结合D本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于诱导细胞中的靶基因座上的基因改造的组合物，其包含：1)式(I)所表示的化合物或其盐、2)结构脂质、以及3)指导RNA或包含编码该指导RNA的序列的DNA、和/或RNA引导性核酸酶或包含编码该RNA引导性核酸酶的序列的核酸，/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171228 JP 2017-2547981.一种用于诱导细胞中的靶基因座上的基因改造的组合物，其包含：1)式(I)所表示的化合物或其盐、2)结构脂质、以及3)指导RNA或包含编码该指导RNA的序列的DNA、和/或RNA引导性核酸酶或包含编码该RNA引导性核酸酶的序列的核酸，



式(I)中，
n表示2～5的整数，
R表示直链状C1-5烷基、直链状C7-11烯基或直链状C11链二烯基，
波状线各自独立地表示顺式或反式的键。


2.如权利要求1所述的组合物，其中，
RNA引导性核酸酶为Cas9；
指导RNA为(a)嵌合RNA、或者(b)包含crRNA和tracrRNA的两种以上的RNA。


3.如权利要求2所述的组合物，其中，Cas9为来源于化脓性链球菌的Cas9。


4.如权利要求1所述的组合物，其中，所述指导RNA为两种以上的指导RNA。


5.如权利要求1所述的组合物，其中，细胞为肌细胞。


6.如权利要求5所述的组合物，其中，靶基因座包含肌养蛋白基因的核苷酸序列。


7.如权利要求5所述的组合物，其中，指导RNA为：
(1)包含序列号1或序列号2所示的核酸序列的嵌合RNA；或者
(2)(i)包含序列号3或序列号4所示的核酸序列的crRNA、和(ii)包含序列号7或序列号8所示的核酸序列的tracrRNA。


8.一种对细胞中的靶基因座进行改造的方法，其包括使权利要求1所述的组合物与细胞接触的步骤。


9.如权利要求8所述的方法，其中，
RNA引导性核酸酶为Cas9；
指导RNA为(a)嵌合RNA、或者(b)包含crRNA和tracrRNA的两种以上的RNA。


10.如权利要求9所述的方法，其中，Cas9为来源于化脓性链球菌的Cas9。


11.如权利要求8所述的方法，其中，细胞为肌细胞。


12.如权利要求11所述的方法，其中，靶基因座包含肌养蛋白基因的核苷酸序列。


13.如权利要求11所述的方法，其中，指导RNA为：
(1)包含序列号1或序列号2所示的核酸序列的嵌合RNA；或者
(2)(i)包含序列号3或序列号4所示的核酸序列的crRNA、和(ii)包含序列号7或序列号8所示的核酸序列的tracrRNA。


14.一种靶基因座被改造的细胞，其通过权利要求8所述的方法得到。


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【专利技术属性】
技术研发人员：堀田秋津，井福正隆，藤本直子，岩渕久美子，见城江利也，莳田幸正，落合留美子，
申请(专利权)人：国立大学法人京都大学，武田药品工业株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP