免疫原性组合物制造技术

本发明专利技术提供一种包含自组装肽作为佐剂、且可增强多种抗原的免疫原性的免疫原性组合物。根据本发明专利技术，提供一种免疫原性组合物，包括：肽水凝胶，包含具有正电荷或负电荷的自组装肽与水性介质；以及抗原，所述自组装肽与所述抗原并不进行共价键结。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】免疫原性组合物
本专利技术涉及一种包含抗原以及肽水凝胶(peptidehydrogel)的免疫原性组合物及其制造方法。
技术介绍
自组装肽(self-assemblingpeptide)是可在水溶液中经由肽分子彼此的相互作用而自发地组装并形成纳米纤维(nanofiber)的肽。所述自组装肽的用途例如遍及细胞培养用基材、止血材料、骨填充材料、药物释放(drugdelivery)基材、人工玻璃体、眼科用手术辅助材料、化妆品、褥疮制剂等多方面(例如，专利文献1)。近年来，提出有RADARADARADARADA(序列编号：18)等自组装肽的作为佐剂(adjuvant)的利用(专利文献2、专利文献3、非专利文献1)。现有技术文献专利文献专利文献1：WO2010/103887专利文献2：US2012/0282292A1专利文献3：日本专利特表2014-512385号公报非专利文献非专利文献1：《疫苗(Vaccine.)》2016Nov4；34(46)：5479-5482
技术实现思路
专利技术所要解决的问题本专利技术的目的在于提供一种包含自组装肽作为佐剂、且可增强多种抗原的免疫原性的免疫原性组合物。解决问题的技术手段根据本专利技术的一个方面，提供一种免疫原性组合物，包括：肽水凝胶，包含具有正电荷或负电荷的自组装肽与水性介质；以及抗原，所述自组装肽与所述抗原并不进行共价键结。在一个实施方式中，所述自组装肽在生理性pH值下每个所述肽分子中具有+3、+2、-3或-2的电荷。在一个实施方式中，所述自组装肽在生理性pH值下每个所述肽分子中具有+3或+2的电荷。在一个实施方式中，构成所述自组装肽的氨基酸残基数为10～32。在一个实施方式中，所述免疫原性组合物以0.3w/v％～2.0w/v％的浓度包含所述自组装肽。在一个实施方式中，所述自组装肽为包含下述氨基酸序列(A)的肽。氨基酸序列(A)：a1b1c1b2a2b3db4a3b5c2b6a4(所述氨基酸序列中，a1～a4分别表示为碱性氨基酸残基；b1～b6分别表示为无电荷极性氨基酸残基和/或疏水性氨基酸残基，其中，b1～b6中的至少五个为疏水性氨基酸残基；c1及c2分别表示为酸性氨基酸残基；d表示为疏水性氨基酸残基或无电荷极性氨基酸残基)在一个实施方式中，所述自组装肽是选自序列编号1～序列编号16所表示的肽中。在一个实施方式中，所述自组装肽是选自序列编号1、序列编号15及序列编号16所表示的肽中。在一个实施方式中，所述抗原的分子量为6.0kDa～1.0×103kDa。在一个实施方式中，所述抗原包含在生理性pH值下具有正电荷的蛋白质。在一个实施方式中，所述抗原包含源自食品、螨虫、室内尘埃(housedust)、植物或动物的抗原。在一个实施方式中，所述抗原包含螨虫过敏的抗原、鸡蛋过敏的抗原或花粉。在一个实施方式中，所述抗原包含选自卵白蛋白、酪蛋白(casein)、溶菌酶(lysozyme)及木瓜蛋白酶(papain)所组成的组群中的至少一种。专利技术的效果根据本专利技术的免疫原性组合物，通过适当选择自组装肽，可增强多种抗原的免疫原性。附图说明图1是连续滴眼各被实验试样后的豚鼠(guineapig)的前眼部的照片。图2是第1次给药后所制作的背部的组织标本图像。图3是第2次给药后所制作的背部的组织标本图像。图4是表示给药各被实验试样后的小鼠(mouse)的血中免疫球蛋白G(immunoglobulinG，IgG)浓度的图表。图5A是表示给药各被实验试样后的小鼠的血中IgG浓度的图表。图5B是表示给药各被实验试样后的小鼠的血中IgG浓度的图表。图5C是表示给药各被实验试样后的小鼠的血中IgG浓度的图表。图5D是表示给药各被实验试样后的小鼠的血中IgG浓度的图表。图6A是给药各被实验试样后的小鼠背部的组织标本图像。图6B是给药各被实验试样后的小鼠背部的组织标本图像。图6C是给药各被实验试样后的小鼠背部的组织标本图像。具体实施方式以下，对本专利技术的优选的实施方式进行说明，但本专利技术并不限定于这些实施方式。[A.免疫原性组合物]本专利技术的免疫原性组合物包括：肽水凝胶，包含具有正电荷或负电荷的自组装肽与水性介质；以及抗原，所述自组装肽与所述抗原并不进行共价键结。再者，“自组装肽与抗原并不进行共价键结”的记载是指自组装肽与抗原并不有目的地进行共价键结，并且不排除根据pH值环境或保管环境等而会无目的地产生的微少的共价键的存在。再者，如根据说明书整体的记载而明确般，在本专利技术的免疫原性组合物中，肽水凝胶与抗原并非各自分开地存在，而是抗原以浑然一体化的状态存在于水凝胶中。因此，本专利技术的免疫原性组合物也可换种说法为“一种凝胶状免疫原性组合物，包含：具有正电荷或负电荷的自组装肽与水性介质以及抗原，所述自组装肽与所述抗原并不进行共价键结”。由于包含肽水凝胶，因此具代表性的是所述免疫原性组合物也为凝胶。其中，肽水凝胶是通过自组装肽的经由非共价键的自组装化而形成，且可通过搅拌、振动、剪切的赋予等物理性刺激，暂时取得溶胶的形态。因此，所述免疫原性组合物也可对应于物理性刺激而溶胶化，但其后可随时间经过而再次凝胶化。因此，本专利技术的免疫原性组合物只要具有凝胶化能力，则也可为具有流动性的状态。再者，在本说明书中，所谓凝胶是指固化为冻胶(jelly)状的胶体分散体系。在一个实施方式中，凝胶为失去流动性的溶胶，且可抵抗重力并维持其形状。免疫原性组合物的在37℃的温度条件下、且利用旋转式流变仪(rheometer)测定的存储弹性模量例如为10Pa以上，优选为50Pa以上，更优选为100Pa以上，进而优选为200Pa以上，另外，例如为2000Pa以下，优选为1500Pa以下，更优选为1000Pa以下。免疫原性组合物的pH值优选为设定为可维持自组装肽的生理性pH值(7.4)下的电荷的pH值(结果，为肽水凝胶带正电或带负电的pH值)。所述pH值例如可为5.0～9.0，优选为5.5～8.5。A-1.肽水凝胶肽水凝胶为包含具有正电荷或负电荷的自组装肽与水性介质、且通过自组装肽在水性介质中进行自组装化而形成的凝胶(自组装肽凝胶)。肽水凝胶由于包含具有正电荷或负电荷的自组装肽，因此就凝胶整体而言可带正电或带负电。在所述免疫原性组合物中，肽水凝胶作为增强对于抗原的免疫反应的佐剂发挥功能。发挥此种效果的理由并不确定，认为其原因在于：肽水凝胶可在给药部位中在内部和/或表面长期保持抗原。A-1-1.自组装肽在本说明书中，所谓自组装肽是指可在水溶液中经由肽分子彼此的相互作用而自发地组装并形成纳米纤维的肽。肽分子彼此的相互作用并无特别限定，例如包含氢键结、离子间相互作用、范德瓦耳斯力(v本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免疫原性组合物，包括：肽水凝胶，包含具有正电荷或负电荷的自组装肽与水性介质；以及抗原，所述自组装肽与所述抗原并不进行共价键结。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180119 JP 2018-0071521.一种免疫原性组合物，包括：肽水凝胶，包含具有正电荷或负电荷的自组装肽与水性介质；以及抗原，所述自组装肽与所述抗原并不进行共价键结。


2.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中所述自组装肽在生理性pH值下每个所述肽分子中具有+3、+2、-3或-2的电荷。


3.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中所述自组装肽在生理性pH值下每个所述肽分子中具有+3或+2的电荷。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的免疫原性组合物，其中构成所述自组装肽的氨基酸残基数为10～32。


5.根据权利要求1至4中任一项所述的免疫原性组合物，其中以0.3w/v％～2.0w/v％的浓度包含所述自组装肽。


6.根据权利要求1至5中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述自组装肽为包含下述氨基酸序列(A)的肽，
氨基酸序列(A)：a1b1c1b2a2b3db4a3b5c2b6a4
(所述氨基酸序列中，a1～a4分别表示为碱性氨基酸残基；b1～b6分别表示为无电荷极性氨基酸残基和/或疏水性氨基酸残基，其中，b1～b6中的至少五个为疏水性氨基酸残基；c1及c2分别表示为酸性氨基酸残基；d表示为疏水性氨基酸残基或无电荷极性氨基酸残基)。


7.根据权利要求1至5中任一项所述的免疫原性组合物，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：藤本美弥，
申请(专利权)人：株式会社目立康，
类型：发明
国别省市：日本;JP