一种禽流感疫苗佐剂及其应用制造技术

一种禽流感疫苗佐剂及其应用。本发明专利技术公开了一种贻贝多糖，其与禽流感疫苗配合使用，在效果上起协同作用，可增强禽流感疫苗的活性，获得理想的免疫效果。采用本发明专利技术佐剂的禽流感疫苗在整个免疫周期内，相比于没有添加佐剂的禽流感疫苗，其免疫表达的抗体滴度会显著提高。

【技术实现步骤摘要】
一种禽流感疫苗佐剂及其应用
本专利技术涉及一种禽流感疫苗佐剂及其应用。
技术介绍
呼吸道是流感病毒入侵的门户，在呼吸道黏膜建立特异性免疫保护能阻止病毒的侵入。减毒活疫苗是现在临床上唯一的经黏膜免疫的流感疫苗种类，该疫苗通过鼻腔免疫在病毒入侵部位诱导产生强烈的SIgA抗体应答，阻止流感病毒进入体内。但是，减毒活疫苗有其局限性，仅推荐5-49岁的人接种，只在少数几个国家批准使用。流感灭活疫苗包括全病毒灭活疫苗、裂解疫苗和亚单位疫苗，是在全球范围批准使用的疫苗类型，通过肌肉注射的方式接种，主要通过诱导系统性IgG抗体提供特异性保护，不能诱导产生SIgA。近年来，研究表明流感灭活疫苗经鼻免疫也是有效的，但需要黏膜佐剂来提升其免疫保护效果。流感病毒灭活疫苗的佐剂目前常用的有无机佐剂（如铝佐剂）、表面活性剂（如MF59）、细胞因子佐剂（如IFN-γ）及多糖类佐剂等。天然多糖广泛存在于自然界，具有多种生物活性，有些天然多糖能调节多种免疫细胞和免疫分子，增强机体的抵抗力，还具有抗肿瘤的作用，近年来作为佐剂研究对象受到了广泛关注。玉竹多糖（POP）具有佐剂效应成分，主要从百合科植物玉竹根茎中提取。张亚楠等将H7N9流感病毒裂解疫苗与不同剂量的POP作为佐剂滴鼻免疫BALB／c小鼠模型，结果表明，POP可增强免疫应答，具有黏膜佐剂效应，血清中特异性IgG抗体和HI抗体呈增加趋势。单俊杰等研究结果显示蓝根总多糖（IIP）有佐剂活性。H1N1流感病毒裂解液与多糖IIP-A-1联用，能显著提高IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgA的滴度水平，同时B细胞的增殖能力显著高于无佐剂组，IIP-A佐剂有促进Th1细胞分化的能力，脾淋巴细胞分泌IFNγ的能力也得到进一步增强。谢国秀等将低剂量灭活疫苗联合200μg剂量的茯苓多糖给药，表明能提高抗体水平，但无法抵抗致死量流感病毒的攻击；当茯苓多糖剂量升至1000μg时，低剂量疫苗组小鼠抗体水平显著增加，血清IgG滴度显著高于无佐剂组。综上所述，虽然目前已有文献报道了多种多糖用于流感病毒疫苗的佐剂，但是开发新的天然无毒的多糖佐剂仍然具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术第一方面：提供一种禽流感疫苗佐剂，其能够增强机体免疫功能。海洋贝类资源的高效利用和深度开发是我国经济贝类养殖业可持续发展的重要研究方向,其中贝类多糖因其独特的结构,在抗肿瘤、抗病毒、免疫调节和肝损伤保护等多个方面显示出广泛的生物活性,在功能性保健食品和创新药物的研究与开发方面具有良好的应用前景。本专利技术从现有技术中报道的贻贝多糖中，筛选出了一种可用于禽流感疫苗佐剂的多糖。为解决本专利技术的技术问题，本专利技术提供了一种禽流感疫苗佐剂，其包含贻贝多糖。优选地，所述贻贝多糖以（1→4)-α-D-Glc为主链，含有（1→2)-α-D-Glc分枝，构型为α-吡喃型葡聚糖，平均每12个葡萄糖主链中有1个（1→2)葡萄糖分枝，所述贻贝多糖的相对分子质量为800-8000KDa，其结构式为：。该贻贝多糖是从贻贝属动物中提取得到，例如厚壳贻贝、紫贻贝。提取方法参照文献CN107056962A中报道的方法进行。本专利技术的另一方面提供一种禽流感疫苗佐剂在制备禽流感疫苗制剂中的用途，所述禽流感疫苗佐剂包含贻贝多糖。将本专利技术所述贻贝多糖与禽流感疫苗联用，能够增强疫苗的免疫活性。优选地，所述禽流感疫苗为H9N2亚型禽流感疫苗。本专利技术的另一方面提供一种贻贝多糖，其能够增强禽流感疫苗的免疫应答，可作为禽流感疫苗佐剂。本专利技术的有益效果在于：本专利技术采用贻贝多糖与禽流感疫苗配合使用，在效果上起协同作用，可增强禽流感疫苗的活性，获得理想的免疫效果。具体来说，采用本专利技术佐剂的禽流感疫苗在整个免疫周期内，相比于没有添加免疫增强剂的禽流感疫苗，其免疫表达的抗体滴度会显著提高。具体实施方式下面通过实施例来具体说明本专利技术的内容。在本专利技术中，以下实施例是为了更好地阐述本专利技术，并不是用来限制本专利技术的范围。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1H9N2亚型禽流感疫苗免疫增强剂：步骤一：制备贝怡多糖水溶液：取15g贻贝多糖加入85ml水中，搅拌至溶解，即得贻贝多糖水溶液（即贻贝多糖含量为15%）。步骤二：配置油相：分别取56ml白油和4ml司本-80，将二者混合均匀。步骤三：配置水相：分别取35mlH9N2胚液灭活抗原(107EID50/0.1mL，肇庆大华农生物药品有限公司)、1.7ml吐温-80和3.3ml步骤一制备得到的贝怡多糖水溶液，混合均匀。步骤四：制备免疫增强剂：将油相和水相混合，配成制剂（200羽份）。实施例2H9N2亚型禽流感疫苗免疫增强剂：其大体同实施例1，其中步骤1中贻贝多糖含量为10wt％。实施例3H9N2亚型禽流感疫苗免疫增强剂：其大体同实施例1，其中步骤1中贻贝多糖含量为20wt％。对比例1H9N2亚型禽流感疫苗：其大体同实施例1，其中步骤1中不加入贻贝多糖。其中上述贻贝多糖，以（1→4)-α-D-Glc为主链，含有（1→2)-α-D-Glc分枝，构型为α-吡喃型葡聚糖，平均每12个葡萄糖主链中有1个（1→2)葡萄糖分枝，所述贻贝多糖的相对分子质量为800-8000KDa，其结构式为：。实施例4体外活性测试1、H9N2亚型禽流感疫苗免疫试验1.1动物实验分组将40只7日龄SPF鸡随机分为四组，每组10只：A：实施例1制得的H9N2亚型灭活禽流感疫苗，颈背部皮下注射，0.5ml/羽；B：实施例2制得的H9N2亚型灭活禽流感疫苗，颈背部皮下注射，0.5ml/羽；C：实施例3制得的H9N2亚型灭活禽流感疫苗，颈背部皮下注射，0.5ml/羽；实施例4制得的H9N2亚型灭活禽流感疫苗，颈背部皮下注射，0.5ml/羽。1.2样品采集免疫前和免疫后第1～9周，每周每只鸡翅下静脉采血1mL，3000rpm离心10min分离血清，-20℃冷冻保存。1.3结果抗体水平测定。特异性抗体水平通过红细胞凝集抑制试验(HI试验)进行检测，如表1所示（其中第一周是指注射疫苗后的第7天），免疫后3周，添加贻贝多糖的疫苗组的禽流感病毒(H9)抗体水平开始显著高于常规疫苗组(对比例1，不添加贻贝多糖)，且一直持续到试验结束。表1疫苗免疫实验的抗体水平表（HI平均值log2）第1周第2周第3周第4周第5周第6周第7周第8周第9周实施例15.56.27.08.38.07.97.47.06.4实施例25.8本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种禽流感疫苗佐剂，其包含贻贝多糖。/n

【技术特征摘要】
1.一种禽流感疫苗佐剂，其包含贻贝多糖。


2.根据权利要求1所述的禽流感疫苗佐剂，其特征在于：所述贻贝多糖，以（1→4)-α-D-Glc为主链，含有（1→2)-α-D-Glc分枝，构型为α-吡喃型葡聚糖，平均每12个葡萄糖主链中有1个（1→2)葡萄糖分枝，所述贻贝多糖的相对分子质量为800-8000KDa，其结构式为：

。


3.根据权利要求1所述的禽流感疫苗佐剂，其特征在于：所述禽流感疫苗为H9N2亚型禽流感疫苗。


4.一种禽流感疫苗佐剂在制备禽流感疫苗制剂中的用途，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：张文炎，刘锦容，詹烜子，高艳，刘之文，卢少华，黎啟林，
申请(专利权)人：肇庆大华农生物药品有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44