本发明专利技术公开了一种非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒及其应用，所述非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒中包括经密码子优化的非洲猪瘟病毒重组p30蛋白。本发明专利技术中的试剂盒具有良好的特异性、敏感性和重复性，适用于非洲猪瘟病毒的检测和诊断，特别是非洲猪瘟病毒早期感染的检测和诊断。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫测定法，特别涉及一种非洲猪瘟病毒elisa抗体检测试剂盒及其应用。
技术介绍
1、非洲猪瘟(african swine fever，asf)是一种由非洲猪瘟病毒(african swinefever virus，asfv)引起的病毒性传染疾病，该病可导致家猪100％的死亡，给全球养猪业带来重大损失，世界动物卫生组织(woah)已将非洲猪瘟列为法定动物疫病，在中国也是一级动物传染病。非洲猪瘟具有复杂的流行病学特征。受感染的家猪、野猪、软蜱、受污染的饲料、水、精液、猪肉、人员、车辆和工具是asfv的主要传染源。传染源长期携带病毒，是非洲猪瘟防控的难点之一。另外，非洲猪瘟病毒分离株的毒力、感染途径和剂量以及宿主状态，感染asfv的猪只表现出不同临床症状和病理损害。asfv毒株通常分为高毒力、中等毒力和低毒力。高毒力的强毒株通常导致该病的最急性型(猪在感染后1-4天死亡)和急性型(猪在感染后3-8天死亡)，而中等毒力毒株与急性型(猪在感染后11-15天死亡)和亚急性型(猪在感染20天后死亡)感染有关，慢性型与低毒力分离株的感染有关。基于以上，快速、灵敏以及可现场部署的asfv检测对于疾病监测和控制非常重要。目前用于asf诊断方法主要2种，即分子生物学方法(pcr、荧光定量pcr、rpa等)和免疫学方法(elisa、免疫印迹、免疫荧光等)，分子生物学方法适用于asfv强、中等毒力毒株的早期感染诊断，免疫学方法适用于asfv低毒力毒株的检测与非洲猪瘟疫病筛查净化。
技术实现思路
<
p>1、本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的上述技术问题之一。为此，本专利技术的目的在于提供一种非洲猪瘟病毒elisa抗体检测试剂盒及其应用。本专利技术的非洲猪瘟病毒elisa抗体检测试剂盒具有良好的特异性、敏感性和重复性，适用于非洲猪瘟病毒的检测和诊断，特别是非洲猪瘟病毒早期感染的检测和诊断。2、本专利技术的第一个方面，提供一种非洲猪瘟病毒elisa抗体检测试剂盒，所述检测试剂盒中包括经密码子优化的非洲猪瘟病毒重组p30蛋白，所述经密码子优化的非洲猪瘟病毒重组p30蛋白的氨基酸序列如seq id no：4所示。
3、在本专利技术的一些实施方式中，所述非洲猪瘟病毒重组p30蛋白由seq id no：1所示的核苷酸序列编码。
4、在本专利技术的一些实施方式中，所述非洲猪瘟病毒elisa抗体检测试剂盒中，所述经密码子优化的非洲猪瘟病毒重组p30蛋白与包被液混合后预包被于检测容器上。
5、在本专利技术的一些实施方式中，所述非洲猪瘟病毒elisa抗体检测试剂盒还包括如下成分：封闭液、样品稀释液、洗涤液、酶标二抗、底物显色液、终止液、阳性对照品以及阴性对照品。
6、在本专利技术的一些实施方式中，所述阳性对照品为抗体阳性猪血清对照，所述阴性对照品为抗体阴性猪血清对照。
7、在本专利技术的一些实施方式中，所述包被液为ph为9.4～9.6的碳酸盐缓冲液。
8、在本专利技术的一些实施方式中，在本专利技术的一些实施方式中，所述包被液含有1.59gna2co3和2.93g nahco3，ph为9.4～9.6。
9、在本专利技术的一些实施方式中，所述封闭液为每1000ml pbs溶液中含有2～15g明胶的封闭液。
10、在本专利技术的一些实施方式中，所述封闭液为1000ml pbs溶液中含有10g明胶的1％明胶封闭液。
11、在本专利技术的一些实施方式中，所述样品稀释液为含有25～100ml马血清、2～20gbsa和3～15g咪唑的1000ml pbs溶液。
12、在本专利技术的一些实施方式中，所述样品稀释液为含有50ml马血清、5g bsa和5g咪唑的1000ml pbs溶液。
13、在本专利技术的一些实施方式中，所述洗涤液为含有8.5g nacl、0.25g nah2po4·2h2o、3.5gna2hpo4·12h2o和0.2～1.5ml吐温-20的1000ml溶液，ph为7.2～7.6。
14、在本专利技术的一些实施方式中，所述洗涤液为含有8.5g nacl、0.25g nah2po4·2h2o、3.5gna2hpo4·12h2o和1ml吐温-20的1000ml溶液，ph为7.2～7.6。
15、在本专利技术的一些实施方式中，所述酶标二抗为hrp标记的兔抗猪二抗。
16、在本专利技术的一些实施方式中，所述底物显色液为四甲基联苯二胺。
17、在本专利技术的一些实施方式中，所述终止液为0.25～0.75％氢氟酸溶液。
18、在本专利技术的一些实施方式中，所述终止液为0.25％氢氟酸溶液。
19、本专利技术的第二个方面，提供一种非洲猪瘟病毒elisa抗体检测试剂盒在制备诊断非洲猪瘟病毒早期感染的产品中的应用。
20、在本专利技术的一些实施方式中，在所述应用中诊断非洲猪瘟病毒早期感染的产品的使用方法为：取待测血清样品加入至用封闭液封闭后的预包被有非洲猪瘟病毒重组p30蛋白的酶标板中，加入酶标二抗，孵育，加入显色液显色，加入终止液，然后在630nm处测定吸光值，根据吸光值判断样品中是否存在非洲猪瘟病毒抗体。
21、在本专利技术的一些实施方式中，在上述应用中的判定标准为：
22、根据在630nm处测定的吸光值使用如下公式计算s/p值：
23、s/p＝(样品od630nm－阴性对照孔od630nm)/(阳性对照孔od630nm－阴性对照孔平均od630nm)
24、其中，当阳性对照孔od630nm值＞0.20且阴性对照孔od630nm值＜0.10时，认定判断结果有效；
25、若检测样品s/p值≥0.45时，判定待测样品中含有非洲猪瘟病毒抗体；若检测样品s/p值＜0.45时，待测样品中不含非洲猪瘟病毒抗体。
26、在本专利技术的一些实施方式中，所述非洲猪瘟病毒重组p30蛋白使用量为0.025μg～0.4μg。
27、在本专利技术的一些实施方式中，所述非洲猪瘟病毒重组p30蛋白使用量为0.1μg。
28、在本专利技术的一些实施方式中，所述血清样品稀释倍数为1:20～1:200。
29、在本专利技术的一些实施方式中，所述血清样品稀释倍数为1:100。
30、在本专利技术的一些实施方式中，所述酶标二抗使用浓度为0.05μg/ml～0.4μg/ml。
31、在本专利技术的一些实施方式中，所述酶标二抗使用浓度为0.1μg/ml。
32、在本专利技术的一些实施方式中，所述显色液显色的反应时间为10min～20min。
33、在本专利技术的一些实施方式中，所述显色液显色的反应时间为15min。
34、在本专利技术的一些实施方式中，所述非洲猪瘟病毒elisa抗体检测试剂盒的检测灵敏度为1:3200倍(v/v)血清稀释。
35、本专利技术的有益效果是：
36、1.本专利技术开发得到了一种非洲猪瘟病毒elisa本文档来自技高网
...
【技术保护点】
1.一种非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于：所述非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒中包括经密码子优化的非洲猪瘟病毒重组p30蛋白，所述经密码子优化的非洲猪瘟病毒重组p30蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。
2.根据权利要求1所述的非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，所述非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒中，所述经密码子优化的非洲猪瘟病毒重组p30蛋白与包被液混合后预包被于检测容器上。
3.根据权利要求2所述试剂盒，还包括如下成分：封闭液、样品稀释液、洗涤液、酶标二抗、底物显色液、终止液、阳性对照品以及阴性对照品。
4.根据权利要求3所述的非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，所述包被液为pH为9.4～9.6的碳酸盐缓冲液。
5.根据权利要求3所述的非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，所述封闭液为每1000mL PBS溶液中含有2～15g明胶的封闭液。
6.根据权利要求3所述的非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，所述样品稀释液为含有25～100mL马血清、2～20g BSA和3～15g咪唑的1000mL PBS溶液。
7.根据权利要求3所述的非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，所述终止液为0.25～0.75％氢氟酸溶液。
8.权利要求1-7任一项所述的非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒在制备诊断非洲猪瘟病毒早期感染的产品中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述诊断非洲猪瘟病毒早期感染的产品的使用方法为：
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，判定标准为：
...
【技术特征摘要】
1.一种非洲猪瘟病毒elisa抗体检测试剂盒，其特征在于：所述非洲猪瘟病毒elisa抗体检测试剂盒中包括经密码子优化的非洲猪瘟病毒重组p30蛋白，所述经密码子优化的非洲猪瘟病毒重组p30蛋白的氨基酸序列如seq id no：4所示。
2.根据权利要求1所述的非洲猪瘟病毒elisa抗体检测试剂盒，其特征在于，所述非洲猪瘟病毒elisa抗体检测试剂盒中，所述经密码子优化的非洲猪瘟病毒重组p30蛋白与包被液混合后预包被于检测容器上。
3.根据权利要求2所述试剂盒，还包括如下成分：封闭液、样品稀释液、洗涤液、酶标二抗、底物显色液、终止液、阳性对照品以及阴性对照品。
4.根据权利要求3所述的非洲猪瘟病毒elisa抗体检测试剂盒，其特征在于，所述包被液为ph为9.4～9.6的碳酸盐缓冲液。
5.根据权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：武省，马光明，张淑琼，钟伟锋，张文炎，欧阳征亮，
申请(专利权)人：肇庆大华农生物药品有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。