System.ArgumentOutOfRangeException: 索引和长度必须引用该字符串内的位置。 参数名: length 在 System.String.Substring(Int32 startIndex, Int32 length) 在 zhuanliShow.Bind() 一种C型副鸡禽杆菌亚单位疫苗及其应用制造技术_技高网

一种C型副鸡禽杆菌亚单位疫苗及其应用制造技术

技术编号:40922211 阅读:3 留言:0更新日期:2024-04-18 14:46
本发明专利技术属于生物技术领域,公开了一种C型副鸡禽杆菌亚单位疫苗及其应用,具体公开了HMTp210基因在制备预防和/或由副鸡禽杆菌感染的相关疾病的产品中的应用。本发明专利技术首次发现血清C型副鸡禽杆菌在分子生物学层面主要分为2个群,其中,主要存在138bp HMTp210基因缺失。通过构建的缺失或不缺失138bp的HMTp210基因的重组工程菌,将其制备得到相应的亚单位疫苗并进行攻毒实验,结果显示,主要缺失138bp的HMTp210基因的工程菌制备得到低抗原含量和高抗原含量疫苗对血清C型内不同毒株交叉免疫具有良好的保护效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物,具体涉及一种c型副鸡禽杆菌亚单位疫苗及其应用。


技术介绍

1、鸡传染性鼻炎(infectious coryza,ic)是副鸡禽杆菌(avibacteriumparagallinarum,apg)感染后引起的一种禽呼吸道细菌性疾病,本病呈世界性流行,一年四季均可发病,尤其是春秋之际,其特征主要表现为面部肿胀、鼻腔炎症和呼吸不畅,并伴有产蛋下降等症状。1920年,beach首先报道该病,1932年de blieck首次分离到副鸡嗜血杆菌。page法和kume法是副鸡禽杆菌最为常用的血清分型方法,其中page法通过平板凝集实验将apg分为a、b和c三种血清型,其中kume法则是通过血凝抑制试验(hi)将副鸡禽杆菌分为血清a群、b群和c群,血清群a包括血清亚型a-1、a-2、a-3、a-4(对应page血清型a);血清群b包括血清亚型b-1(对应page血清型b);血清群c包括血清亚型c-1、c-2、c-3、c-4(对应page血清型c),研究表明三种血清型间不存在交叉保护能力,而不同血清型内的交叉保护能力也有所不同,在a血清型分离株之间有良好的交叉保护,在b血清型分离株之间存在部分交叉保护,在c血清型分离株之间的交叉保护较低。

2、红细胞凝集素(ha)是大多数病原微生物的毒力因子,能够与哺乳动物或禽类红细胞表面的受体发生特异性结合,帮助病原微生物黏附宿主细胞,并导致血凝的发生。有研究发现,副鸡禽杆菌的菌体表面有三种血凝素蛋白,但只有ha-l具有免疫原性,并表现出血清型特异性,是研发亚单位疫苗最合适抗原成分。noro(2008)研究了a型和c型副鸡禽杆菌的ha抗原表位,发现血清a型副鸡禽杆菌编码ha抗原决定簇的基因位于hpa5.1基因片段上,其表达的蛋白大小约为180ku;而血清c型编码ha抗原决定簇的基因主要位于hpc5.5基因片段上,其表达的蛋白大小约为196ku。将重组表达蛋白免疫鸡群后发现,该重组蛋白能够对同血清型的菌株产生较好的保护效果。

3、随着对副鸡禽杆菌红细胞凝集素蛋白研究的不断深入,血清a型和c型副鸡禽杆菌的红细胞凝集素蛋白hmtp210基因序列存在一个高可变区,表现为血清特异性,且该可变区表达蛋白的抗原性最好,用高变区的重组表达蛋白免疫鸡后可显著降低同血清型副鸡禽杆菌的感染能力,保护率高达83%~100%。研究表明构建的敲除hmtp基因的副鸡禽杆菌突变体,通过血凝与血凝抑制试验发现该突变体没有血凝活性,也无法诱导机体产生特异性的抗体,westernblot检测发现,其免疫原性优于血凝素蛋白的其他区域,且存在特异性血清型,通过比对同血清型的副鸡禽杆菌hmtp高可变区基因序列发现,其同源性高达99.8%。

4、近几年,蛋鸡、种鸡传染性鼻炎发生率明显增多,未免疫鸡群和免疫鸡群均有发生,主要与现阶段疫苗的血清亚型不对应有关,现亟需一种研制免疫保护谱广、安全性好的鸡传染性鼻炎疫苗。


技术实现思路

1、本专利技术第一方面的目的,在于提供hmtp210基因在制备预防和/或由副鸡禽杆菌感染的相关疾病的产品中的应用。

2、本专利技术第二方面的目的,在于提供一种hmtp210蛋白。

3、本专利技术第三方面的目的,在于提供编码本专利技术第二方面的hmtp210蛋白的核酸分子。

4、本专利技术第四方面的目的,在于提供与本专利技术第三方面的核酸分子的生物材料。

5、本专利技术第五方面的目的,在于提供本专利技术第二方面的hmtp210蛋白、本专利技术第三方面的核酸分子和/或本专利技术第四方面的生物材料在制备鸡传染性鼻炎疫苗中的应用。

6、本专利技术第六方面的目的,在于提供一种鸡传染性鼻炎疫苗。

7、本专利技术第七方面的目的,在于提供一种提高疫苗对c型副鸡禽杆菌交叉免疫反应的方法。

8、为了实现上述目的,本专利技术所采取的技术方案是:

9、本专利技术的第一个方面,提供hmtp210基因在制备预防和/或由副鸡禽杆菌感染的相关疾病的产品中的应用,所述hmtp210基因为缺失了部分基因片段的hmtp210基因,所述部分基因片段的核苷酸序列如seq id no:3所示。

10、在本专利技术一些实施方式中,所述hmtp210基因的核苷酸序列如seq id no:9所示,或与所述hmtp210基因具有95%以上同一性且具有相同或相似的生物学活性的序列。

11、在本专利技术一些实施方式中,所述产品包括疫苗和药物。

12、本专利技术的第二个方面,提供一种hmtp210蛋白,所述蛋白的氨基酸序列如seq idno:13所示。

13、本专利技术的第三个方面,提供编码本专利技术第二方面的hmtp210蛋白的核酸分子。

14、在本专利技术一些实施方式中,所述核酸分子的核苷酸序列如seq id no:9所示。

15、本专利技术的第四个方面,提供与本专利技术第三方面的核酸分子相关的生物材料,所述生物材料为(1)~(3)中任一种;

16、(1)表达盒,含有本专利技术第三方面的核酸分子;

17、(2)重组载体,含有本专利技术第三方面的核酸分子或(1)中表达盒;

18、(3)重组细胞,含有本专利技术第三方面的核酸分子、(1)中表达盒或(2)中重组载体。

19、在本专利技术一些实施方式中,所述细胞大肠杆菌。

20、在本专利技术一些实施方式中,所述重组载体为质粒载体、病毒载体或细胞载体。

21、在本专利技术一些实施方式中,所述质粒载体可以是任选的质粒,所述病毒载体可以任选的病毒,所述细胞载体不包括繁殖材料。

22、本专利技术的第五个方面,提供本专利技术第二方面的hmtp210蛋白、本专利技术第三方面的核酸分子和/或本专利技术第四方面的生物材料在制备鸡传染性鼻炎疫苗中的应用。

23、在本专利技术一些实施方式中,所述鸡传染性鼻炎疫苗为预防由c型副鸡禽杆菌引起的鸡传染性鼻炎。

24、在本专利技术一些实施方式中,所述鸡传染性鼻炎疫苗为亚单位疫苗或灭活疫苗。

25、本专利技术的第六个方面,提供一种鸡传染性鼻炎疫苗,包括本专利技术第二方面的hmtp210蛋白、本专利技术第三方面的核酸分子和/或本专利技术第四方面的生物材料。

26、在本专利技术一些实施方式中,所述鸡传染性鼻炎疫苗为亚单位疫苗或灭活疫苗。

27、在本专利技术一些实施方式中,所述鸡传染性鼻炎疫苗还包括佐剂。

28、在本专利技术一些实施方式中,当所述所述鸡传染性鼻炎疫苗为亚单位疫苗时,其疫苗由包括将本专利技术第一方面的hmtp210基因克隆入载体、转化宿主菌、发酵、诱导、纯化、乳化工艺等步骤制备得到。

29、在本专利技术一些实施方式中,所述载体为pet28b质粒。

30、在本专利技术一些实施方式中,所述宿主菌为大肠杆菌。

31、本专利技术的第七个方面,提供一种提高疫苗对c型副鸡禽杆菌交叉免疫反应的方法,包括以下步骤:敲除或沉默c型副鸡禽杆菌的hmtp210基因序列中部分基因片段,所述部分基本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.HMTp210基因在制备预防和/或由副鸡禽杆菌感染的相关疾病的产品中的应用,所述HMTp210基因为缺失了部分基因片段的HMTp210基因,所述部分基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述HMTp210基因的核苷酸序列如SEQ IDNO:9所示,或与所述HMTp210基因具有95%以上同一性且具有相同或相似的生物学活性的序列。

3.一种HMTp210蛋白,所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示。

4.编码权利要求3所述HMTp210蛋白的核酸分子,所述核酸分子的核苷酸序列优选如SEQ ID NO:9所示。

5.与权利要求4所述核酸分子相关的生物材料,所述生物材料为(1)~(3)中任一种;

6.权利要求3所述的HMTp210蛋白、权利要求4所述的核酸分子和/或权利要求5所述的生物材料在制备鸡传染性鼻炎疫苗中的应用。

7.一种鸡传染性鼻炎疫苗,包括权利要求3所述的HMTp210蛋白、权利要求4所述的核酸分子和/或权利要求5所述的生物材料。</p>

8.根据权利要求7所述的鸡传染性鼻炎疫苗,其特征在于,所述鸡传染性鼻炎疫苗还包括佐剂。

9.根据权利要求7所述的鸡传染性鼻炎疫苗,其特征在于,所述鸡传染性鼻炎疫苗为亚单位疫苗或灭活疫苗。

10.一种提高疫苗对C型副鸡禽杆菌交叉免疫反应的方法,包括以下步骤:敲除或沉默C型副鸡禽杆菌的Hmtp210基因序列中部分基因片段,所述部分基因片段的核苷酸序列如SEQID NO:3所示;或,

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【技术特征摘要】

1.hmtp210基因在制备预防和/或由副鸡禽杆菌感染的相关疾病的产品中的应用,所述hmtp210基因为缺失了部分基因片段的hmtp210基因,所述部分基因片段的核苷酸序列如seq id no:3所示。

2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述hmtp210基因的核苷酸序列如seq idno:9所示,或与所述hmtp210基因具有95%以上同一性且具有相同或相似的生物学活性的序列。

3.一种hmtp210蛋白,所述蛋白的氨基酸序列如seq id no:13所示。

4.编码权利要求3所述hmtp210蛋白的核酸分子,所述核酸分子的核苷酸序列优选如seq id no:9所示。

5.与权利要求4所述核酸分子相关的生物材料,所述生物材料为(1)~(3)...

【专利技术属性】
技术研发人员:欧阳征亮高任李飞跃黄文彬顾嘉运邓智昕陈瑞爱吴达兴何恒昌高翔孙银焕梁铭治
申请(专利权)人:肇庆大华农生物药品有限公司
类型:发明
国别省市:

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