一种转氨酶PHTA、制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种转氨酶PHTA，所述转氨酶PHTA的氨基酸序列为SEQ ID NO.1。本发明专利技术转氨酶PHTA的最适温度35℃，最适pH为8.0，在pH 6‑8范围内仍保持50％以上的活性。在最适温度和最适pH下，本发明专利技术的转氨酶PHTA对HFB1的降解率为100％；本发明专利技术转氨酶PHTA性质优良，该酶可以应用于农业、饲料和食品等工业，减少伏马毒素FB1对动物及人类健康的危害。

【技术实现步骤摘要】
一种转氨酶PHTA、制备方法和应用
本专利技术属于农业生物
，尤其是一种转氨酶PHTA、制备方法和应用。
技术介绍
伏马毒素是一类结构相关的代谢物，主要由镰刀菌和增殖镰刀菌产生。目前已鉴定出28种伏马毒素类似物，被分为A、B、C和P四个系列。其中伏马毒素B1(FB1)是最普遍、毒性最强的伏马毒素。它会引起马的白质脑软化和猪的肺水肿，也会影响家禽的肝脏和免疫系统。此外，FB1对大多数哺乳动物都有肝肾毒性。消除食品和饲料中伏马毒素污染的缓解策略分为物理、化学和生物原理。物理方法，包括干法和湿磨法，浸泡、加热以及吸附剂的使用。然而，这些策略或因为使用仪器昂贵，或因为造成饲料中某些营养成分的损失，因此存在局限性。氨化和碱化是最常见的化学脱毒方法，但由于其潜在的毒性和对原料的口感与营养品质存在负面影响，其应用也受到限制。生物脱毒技术可以在不影响食品和饲料质量的前提下降低霉菌毒素毒性，被认为是一种很有前途的脱毒策略。酶制剂在存贮方面相比于微生物制剂而言具有更高的稳定性，因此，研发降解真菌毒素的酶制剂，可以很好地遏制被污染的粮食作物中的毒素的产生，挽回经济损失。通过检索，尚未发现与本专利技术专利申请相关的专利公开文献。
技术实现思路
本专利技术目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种转氨酶PHTA、制备方法和应用，该转氨酶PHTA能够降解伏马毒素中的氨基以解除其毒性。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种转氨酶PHTA，所述转氨酶PHTA的氨基酸序列为SEQIDNO.1。如上所述的转氨酶PHTA的制备方法，步骤如下：⑴用包含编码所述转氨酶PHTA的基因的重组载体转化宿主细胞，得到重组菌株；⑵培养重组菌株，诱导转氨酶PHTA表达；⑶分离纯化获得的转氨酶PHTA。而且，所述步骤⑴中宿主细胞为大肠细胞、啤酒酵母细胞或多型逊酵母细胞。如上所述的转氨酶PHTA在降解伏马毒素方面中的应用。一种编码如上所述的转氨酶PHTA的转氨酶PHTA基因。而且，所述基因的核苷酸序列为SEQIDNO.2。包含如上所述的转氨酶PHTA基因的重组载体。包含如上所述的转氨酶PHTA基因的重组载体pET28a(+)-PHTA。包含如上所述的转氨酶PHTA基因的重组菌株。而且，所述重组菌株为大肠杆菌。本专利技术取得的优点和积极效果为：1、本专利技术转氨酶PHTA的最适温度35℃，最适pH为8.0，在pH6-8范围内仍保持50％以上的活性。在最适温度和最适pH下，本专利技术的转氨酶PHTA对HFB1的降解率为100％；本专利技术转氨酶PHTA性质优良，该酶可以应用于农业、饲料和食品等工业，减少伏马毒素FB1对动物及人类健康的危害。2、本专利技术转氨酶PHTA可以降解催化水解伏马毒素FB1(HFB1)的氨基，消除伏马毒素的活性。由于氨基是使得伏马毒素具有毒性作用的关键官能团之一，因此去除氨基是解除伏马毒素毒性的关键点。本专利技术的转氨酶PHTA具有降解水解伏马毒素HFB1的活性，可以应用于农业、饲料和食品等工业，减少伏马毒素对动物及人类健康的危害。附图说明图1为本专利技术中转氨酶PHTA的SDS-PAGE纯化图；其中，M：蛋白marker；1:转氨酶PHTA；图2为本专利技术中显示转氨酶PHTA的降解效果示意图；图3为本专利技术中显示转氨酶PHTA的最适温度图；图4为本专利技术中显示转氨酶PHTA的最适pH图。具体实施方式下面详细叙述本专利技术的实施例，需要说明的是，本实施例是叙述性的，不是限定性的，不能以此限定本专利技术的保护范围。本专利技术中所使用的原料，如无特殊说明，均为常规的市售产品；本专利技术中所使用的方法，如无特殊说明，均为本领域的常规方法。一种转氨酶PHTA，所述转氨酶PHTA的氨基酸序列为SEQIDNO.1。如上所述的转氨酶PHTA的制备方法，步骤如下：⑴用包含编码所述转氨酶PHTA的基因的重组载体转化宿主细胞，得到重组菌株；⑵培养重组菌株，诱导转氨酶PHTA表达；⑶分离纯化获得的转氨酶PHTA。较优地，所述步骤⑴中宿主细胞为大肠细胞、啤酒酵母细胞或多型逊酵母细胞，优选为大肠杆菌BL21(DE3)。如上所述的转氨酶PHTA在降解伏马毒素方面中的应用。一种编码如上所述的转氨酶PHTA的转氨酶PHTA基因。较优地，所述基因的核苷酸序列为SEQIDNO.2。包含如上所述的转氨酶PHTA基因的重组载体。包含如上所述的转氨酶PHTA基因的重组载体pET28a(+)-PHTA。包含如上所述的转氨酶PHTA基因的重组菌株。较优地，所述重组菌株为大肠杆菌。具体地，所述转氨酶PHTA，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示：SEQIDNO.1：MTRQRAKDAELRERAYRVVPGGVYGHLSTALLPSGYPQFFRRGKGAHLWDVDDNMYIDYLCAYGPNLFGYGFEPIERAAVRQQNLGDTLTGPTEALVELAEAFVGMVTHADWAMFCKNGTDANTIALMISRAHTGRATVLVAEGAYHGAAPWSTPRPAGVTAGDRANIVTYRYNDPESLAAAYRAHRHDLAAIFATPFRHEVFADQEDLNVTYARLARELCDQAGALLVVDDVRAGFRIARDCSWSPSGVQPDLSAWGKCFANGYPISAVLGSDKARKAAAEIFVTGSFWMSATPMAAAIEGLKQIRETDYLERLVESGLALRHGLQRQAAAHGFTLRQTGPAQMPQILFEEDPDFRVGYAWAEACVERGVYFSPYHNMFLSTAHTDGVIRRTLEVTDVAFETVKRQRGSLRTPAQLVPYAQEMAARLAT其中，该酶基因编码430个氨基酸，没有信号肽，因此，成熟的转氨酶PHTA的理论分子量为48.21kDa。本专利技术提供了编码上述转氨酶PHTA。该基因的基因组序列如SEQIDNO.2所示：SEQIDNO.2：ATGACTAGACAGAGAGCTAAGGACGCTGAGTTGAGAGAGAGAGCCTACAGAGTTGTTCCAGGTGGTGTTTACGGTCACTTGTCCACTGCTTTGTTGCCATCTGGTTACCCACAGTTCTTCAGACGTGGTAAGGGTGCTCATTTGTGGGATGTTGACGACAACATGTACATCGACTACTTGTGTGCCTACGGTCCAAACTTGTTCGGTTACGGTTTCGAGCCAATTGAGAGAGCTGCTGTCAGACAACAAAACTTGGGTGACACTTTGACTGGTCCAACCGAGGCTTTGGTTGAATTGGCTGAGGCTTTCGTTGGTATGGTTACTCATGCTGACT本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种转氨酶PHTA，其特征在于：所述转氨酶PHTA的氨基酸序列为SEQ ID NO.1。/n

【技术特征摘要】
1.一种转氨酶PHTA，其特征在于：所述转氨酶PHTA的氨基酸序列为SEQIDNO.1。


2.如权利要求1所述的转氨酶PHTA的制备方法，其特征在于：步骤如下：
⑴用包含编码所述转氨酶PHTA的基因的重组载体转化宿主细胞，得到重组菌株；
⑵培养重组菌株，诱导转氨酶PHTA表达；
⑶分离纯化获得的转氨酶PHTA。


3.根据权利要求2所述的转氨酶PHTA的制备方法，其特征在于：所述步骤⑴中宿主细胞为大肠细胞、啤酒酵母细胞或多型逊酵母细胞。


4.如权利要求1所述的转氨酶PHTA在降解伏马毒素方面中的应用。...

【专利技术属性】
技术研发人员：李中媛，张同存，刘天会，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：天津;12