一种蝴蝶兰软腐病抗性鉴定方法技术

本发明专利技术公开了提供一种蝴蝶兰软腐病抗性鉴定方法，剪取蝴蝶兰品种中下部叶片，用酒精将叶片及叶柄伤口擦拭一遍，自然晾干。将病原菌株接种于NA培养液，用无菌水配制成细菌悬浮液。用无菌大头针在叶片中央密集轻刺，在针刺处滴细菌悬浮液，放入磁盘中保湿密封，黑暗培养。当叶片出现水渍状病斑时，观察并记录叶片发病情况。以平均防效进行分级，评价品种的抗感特性。

【技术实现步骤摘要】
一种蝴蝶兰软腐病抗性鉴定方法
本专利技术涉及一种农作物病虫害抗性鉴定方法，具体的说就是一种蝴蝶兰软腐病抗性鉴定方法，属农业植保领域。
技术介绍
蝴蝶兰软腐病(phalaenopsissoftrotdisease)，由迪克氏细菌Dickeyadieffenbachiae引起，为蝴蝶兰的主要病害之一，分布广泛且全国各蝴蝶兰生产区均有发生。发病后，病原菌分泌果胶酶，溶解细胞壁中的果胶质，使组织软腐，且蔓延迅速，造成严重的经挤损失。抗病品种的选育是控制该病害的主要手段。但是目前国内外尚未有关于蝴蝶兰批准抗性鉴定的方法，因此，专利技术准确评价品种的抗性的方法显得尤其重要。
技术实现思路
鉴于现有技术的不足，本专利技术旨在于提供一种蝴蝶兰软腐病抗性鉴定方法。为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种蝴蝶兰软腐病抗性鉴定方法，所述方法包括以下步骤：S1病原菌分离和准备，获取蝴蝶兰软腐病样品，按常规消毒，再用无菌刀将病健交接处的组织切成薄片移到NA培养基上培养，经分离纯化，并经柯赫氏法则验证确定；于32℃下在NA平板上培养，获病原菌纯培养；将病原菌株接种于NA培养液，在32℃转速150r/min培养36h，用无菌水配制成106-107CFU/mL的细菌悬浮液；S2将灭菌后的滤纸置于培养皿中，喷无菌水至滤纸湿润后备用；S3品种准备，选28个蝴蝶兰品种，每品种准备5片叶子，大小直径为50mm-70mm，清洗晾干后用质量浓度75％的酒精消毒，用高感软腐病GD1做对照；将消毒后的蝴蝶兰叶片分别置于保湿好的消毒平板中；S4接种鉴定，用无菌大头针在叶片中央密集轻刺5下，在针刺处滴0.2mL步骤S1获得的细菌悬浮液，每个处理4次重复，每个重复5片叶；S5调查评价，放入磁盘中保湿密封，30℃黑暗培养。当叶片出现水渍状病斑时，每24h观察并记录叶片发病情况；S6按分级标准进行分级并计算病情指数，根据病情指数进行品种的抗感特性评价.优选的，蝴蝶兰品种软腐病病抗性水平按照以下标准进行确定：高抗：病情指数≤20；抗病：20＜病情指数≤40；中抗：40＜病情指数≤60；感病：60＜病情指数≤80；高感：80＜病情指数；优选的，分级标准是：0级，针刺处无水渍状病斑；1级，针刺处见水渍状病斑，病斑不扩散到针刺范围外0.2cm距离外；2级，病斑扩散到针刺范围外0.2cm距离外，同时病斑面积≤25％叶片面积；3级，25％叶片面积＜病斑面积≤50％叶片面积；4级，50％叶片面积＜病斑面积≤75％叶片面积；5级，75％叶片面积＜病斑面积。优选的，病情指数计算公式为：需要指出的是，本专利技术所使用的NA培养基配方为：牛肉浸膏0.3％，酵母浸膏0.1％，蛋白胨0.5％，葡萄糖1.0％，琼脂1.8％，水1000ml，pH6.8-7.0；本专利技术的有益效果在于，该鉴定方法科学，省时省力，过程简单易于操作，根据病斑分级并计算病情指数进行抗性评价最为有效。具体实施方式以下将结合实施例对本专利技术作进一步的描述，需要说明的是，本实施例以本技术方案为前提，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本专利技术的保护范围并不限于本实施例。本专利技术为一种蝴蝶兰软腐病抗性鉴定方法，所述方法包括以下步骤：S1病原菌分离和准备，获取蝴蝶兰软腐病样品，按常规消毒，再用无菌刀将病健交接处的组织切成薄片移到NA培养基上培养，经分离纯化，并经柯赫氏法则验证确定；于32℃下在NA平板上培养，获病原菌纯培养；将病原菌株接种于NA培养液，在32℃转速150r/min培养36h，用无菌水配制成106-107CFU/mL的细菌悬浮液；S2将灭菌后的滤纸置于培养皿中，喷无菌水至滤纸湿润后备用；S3品种准备，选28个蝴蝶兰品种，每品种准备5片叶子，大小直径为50mm-70mm，清洗晾干后用质量浓度75％的酒精消毒，用高感软腐病GD1做对照；将消毒后的蝴蝶兰叶片分别置于保湿好的消毒平板中；S4接种鉴定，用无菌大头针在叶片中央密集轻刺5下，在针刺处滴0.2mL步骤S1获得的细菌悬浮液，每个处理4次重复，每个重复5片叶；S5调查评价，放入磁盘中保湿密封，30℃黑暗培养。当叶片出现水渍状病斑时，每24h观察并记录叶片发病情况；S6按分级标准进行分级并计算病情指数，根据病情指数进行品种的抗感特性评价.优选的，蝴蝶兰品种软腐病病抗性水平按照以下标准进行确定：高抗：病情指数≤20；抗病：20＜病情指数≤40；中抗：40＜病情指数≤60；感病：60＜病情指数≤80；高感：80＜病情指数；优选的，分级标准是：0级，针刺处无水渍状病斑；1级，针刺处见水渍状病斑，病斑不扩散到针刺范围外0.2cm距离外；2级，病斑扩散到针刺范围外0.2cm距离外，同时病斑面积≤25％叶片面积；3级，25％叶片面积＜病斑面积≤50％叶片面积；4级，50％叶片面积＜病斑面积≤75％叶片面积；5级，75％叶片面积＜病斑面积。优选的，病情指数计算公式为：实施例1病原菌分离和准备：从广东省农业科学院兰花苗圃取蝴蝶兰软腐病样品，按常规消毒，再用无菌刀将病健交接处的组织切成薄片移到NA培养基上培养，经分离纯化，并经柯赫氏法则验证确定；于32℃下在NA平板上培养，获病原菌纯培养；将病原菌株接种于NA培养液，在32℃转速150r/min培养36h，用无菌水配制成106-107CFU/mL的细菌悬浮液。平板消毒保湿：将灭菌后的滤纸置于培养皿中，喷无菌水至滤纸湿润后备用；参试品种准备：选18个蝴蝶兰品种，每品种准备5片叶子，大小直径为50mm-70mm，清洗晾干后用质量浓度75％的酒精消毒，用高感软腐病GD1做对照；将消毒后的蝴蝶兰叶片分别置于保湿好的消毒平板中；接种鉴定：用无菌大头针在叶片中央密集轻刺5下，在针刺处滴0.2mL细菌悬浮液，每个处理4次重复，每个重复5片叶；调查评价：放入磁盘中保湿密封，30℃黑暗培养。当叶片出现水渍状病斑时，每24h观察并记录叶片发病情况，按分级标准进行分级并计算病情指数，根据病情指数进行品种的抗感特性评价，蝴蝶兰品种软腐病病抗性水平按照以下标准进行确定：高抗病情指数≤20；抗病20＜病情指数≤40；中抗40＜病情指数≤60；感病60＜病情指数≤80；高感80＜病情指数，所述的分级标准是：0级，针刺处无水渍状病斑；1级，针刺处见水渍状病斑，病斑不扩散到针刺范围外0.2cm距离外；2级，病斑扩散到针刺范围外0.2cm距离外，同时病斑面积≤25％叶片面积；3级，25％叶片面积＜病斑面积≤50％叶片面积；4级，50％叶片面积＜病斑面积≤75％叶片面积；5级，75％叶片面本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蝴蝶兰软腐病抗性鉴定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：/nS1病原菌分离和准备，获取蝴蝶兰软腐病样品，按常规消毒，再用无菌刀将病健交接处的组织切成薄片移到NA培养基上培养，经分离纯化，并经柯赫氏法则验证确定；于32℃下在NA平板上培养，获病原菌纯培养；将病原菌株接种于NA培养液，在32℃转速150r/min培养36h，用无菌水配制成10

【技术特征摘要】
1.一种蝴蝶兰软腐病抗性鉴定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
S1病原菌分离和准备，获取蝴蝶兰软腐病样品，按常规消毒，再用无菌刀将病健交接处的组织切成薄片移到NA培养基上培养，经分离纯化，并经柯赫氏法则验证确定；于32℃下在NA平板上培养，获病原菌纯培养；将病原菌株接种于NA培养液，在32℃转速150r/min培养36h，用无菌水配制成106-107CFU/mL的细菌悬浮液；
S2将灭菌后的滤纸置于培养皿中，喷无菌水至滤纸湿润后备用；
S3品种准备，选28个蝴蝶兰品种，每品种准备5片叶子，大小直径为50mm-70mm，清洗晾干后用质量浓度75％的酒精消毒，用高感软腐病GD1做对照；将消毒后的蝴蝶兰叶片分别置于保湿好的消毒平板中；
S4接种鉴定，用无菌大头针在叶片中央密集轻刺5下，在针刺处滴0.2mL步骤S1获得的细菌悬浮液，每个处理4次重复，每个重复5片叶；
S5调查评价，放入磁盘中保湿密封，30℃黑暗培养。当叶片出现水渍状病斑时，每24h观察并记录叶片发病情况；<...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨祁云，林壁润，沈会芳，张景欣，孙大元，蒲小明，
申请(专利权)人：广东省农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：广东;44