用于治疗或预防冠状病毒感染的蛋白酶活性的肽制造技术

本发明专利技术提供具有蛋白酶活性的多肽，其用于治疗或预防哺乳动物的冠状病毒感染。具体来说，本发明专利技术涉及使用胰蛋白酶治疗或预防人的冠状病毒感染。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗或预防冠状病毒感染的蛋白酶活性的肽
本专利技术涉及具有蛋白酶活性的多肽用于治疗和预防受试者的冠状病毒感染的用途。具体来说，本专利技术涉及使用胰蛋白酶(如海洋来源的胰蛋白酶，例如来自大西洋鳕鱼)治疗或预防哺乳动物的冠状病毒感染。
技术介绍
大西洋鳕鱼(大西洋鳕(Gadusmorhua))胰蛋白酶已示出在体外降低如人鼻病毒、呼吸道合胞病毒和流感病毒的病毒感染力(Fornbacke和Clarsund2013，Gudmundsdottir，Hilmarsson等人2013)。认为这部分是由于其与类似酶相比具有较高的催化效率(Asgeirsson，Fox等人1989，Asgeirsson和Cekan2006，Stefansson，Helgadottir等人2010)。胰蛋白酶基于推导的氨基酸序列一致性可分为三个大组：I、II和III(Spilliaert和Gudmundsdottir1999)。最近鉴定的鳕鱼胰蛋白酶ZT(参见WO2017/017012和提交公开的手稿中未公开的数据：SandholtGB，StefanssonB，Gudmundsdottir)为第III组胰蛋白酶的成员，而鳕鱼胰蛋白酶I和X属于第I组，像许多其它胰蛋白酶(Asgeirsson，Fox等人1989，Gudmundsdottir，Gudmundsdottir等人1993，Stefansson，Helgadottir等人2010，Stefansson，Sandholt等人2017)。冠状病毒属于冠状病毒科(Coronaviridae)中的冠状病毒亚科(Coronavirinae)，按套病毒的次序。冠状病毒为具有正义单链RNA基因组并且具有螺旋对称的核衣壳的包膜病毒。冠状病毒的基因组大小在大约26到32千个碱基范围内，为RNA病毒最大的。“冠状病毒”的名称源自拉丁语冠状，意指冠状或光环状，并且是指在电子显微镜(E.M.)下病毒粒子的特征性外观具有大的球状表面突起的边缘，产生的图像让人联想到皇冠或日冕。这种形态由病毒刺突(S)膜粒产生，所述膜粒为居住于病毒表面并且决定宿主嗜性的蛋白。促成所有冠状病毒整体结构的蛋白为刺突(S)、包膜(E)、膜(M)和核衣壳(N)蛋白。在SARS冠状病毒的特殊情况下(见下文)，在S上定义的受体结合结构域介导病毒与其细胞受体血管紧张素转化酶2(ACE2)的附着。一些冠状病毒(特别是β冠状病毒亚组A的成员)也具有被称作血凝素酯酶(HE)的较短的刺突状蛋白。冠状病毒主要感染哺乳动物和鸟类的呼吸道和胃肠道。已知它们连同鼻病毒、流感和呼吸道合胞病毒为普通感冒的传染因子中的一个(Heikkinen和Jarvinen2003，Hull，Rennie等人2007)。估计大约10％-15％的普通感冒病例由冠状病毒引起(Hull，Rennie等人2007，Jonsdottir和Dijkman2016)。六种已知的冠状病毒中有四种依次在健康个体中引起一般的上呼吸道疾病和感冒(即，229E、OC43、NL63和HKU1)(Bradburne，Bynoe等人1967，Kraaijeveld，Reed等人1980)。其它两种冠状病毒为严重急性呼吸综合症(SARS)冠状病毒和中东呼吸综合症(MERS)冠状病毒，它们可引起严重的肺炎(Park，Li等人2016)。冠状病毒感染始于刺突蛋白与其同源细胞受体的附着(Jonsdottir和Dijkman2016，Lim，Ng等人2016)。众所周知，SARS-CoV和MERS-CoV通过使用其刺突蛋白进入细胞来感染上皮细胞(Park，Li等人2016)。冠状病毒的细胞嗜性和宿主范围部分取决于冠状病毒刺突(S)蛋白，所述蛋白结合细胞受体并且介导膜融合(Graham和Baric2010)。由于极有可能引起重大流行病，因此MERS和SARS在WHO需要紧急研究的疾病重点清单中名列前茅(WHO)。CoV家族的流行病潜力突出了对疫苗和抗病毒剂的需求。如今，不存在治疗人类冠状病毒引起的疾病的一般疗法，也没有商业疫苗可用(Jonsdottir和Dijkman2016)。因此，重要的是找到能够使冠状病毒失活的新疗法。因此，本专利技术试图解决对用于治疗和预防冠状病毒感染的新疗法的需求。
技术实现思路
本专利技术的第一方面提供具有蛋白酶活性的多肽，其用于治疗或预防如哺乳动物或鸟类的受试者的冠状病毒感染。通过“具有蛋白酶活性的多肽”，我们包括能够在哺乳动物(例如人)体内催化蛋白水解的任何多肽(天然存在的和非天然存在的)。因此，在本专利技术中可利用任何类型的蛋白酶，包括但不限于丝氨酸蛋白酶(如胰蛋白酶/胰凝乳蛋白酶)、苏氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、谷氨酸蛋白酶和金属蛋白酶。通过“冠状病毒感染”我们意指是指由冠状病毒科(冠状病毒亚科)的受试者的冠状病毒的生长引起或以其它方式与其相关的感染。通过“治疗”，我们包括部分或全部缓解冠状病毒感染的症状(例如与普通感冒相关的喉咙痛、鼻塞和/或流鼻涕、咳嗽和/或体温升高)。这类治疗可包括根除与炎症相关的微生物剂或减缓其种群增长。通过“预防”，我们包括降低患者冠状病毒感染的风险。然而，应了解，这类预防可能不是绝对的，即，它可能不能预防所有这样的患者发展冠状病毒感染，或可能仅部分预防单个个体的感染。如此，术语“预防”和“防治”可互换使用。在一个实施例中，冠状病毒感染为上呼吸道和/或下呼吸道的感染。替代地或另外，冠状病毒感染可在胃肠道中。某些冠状病毒(如MERS)也可感染肾上皮细胞。通过“上呼吸道”，我们包括口腔、鼻子、鼻窦、中耳、喉咙、喉和气管。通过“下呼吸道”，我们包括支气管(bronchialtubes/bronchi)和肺(支气管、细支气管和肺泡)，以及肺的间质组织。“胃肠道”我们意指从口腔到肛门的通道，包括口腔、食道、胃和肠。在替代的实施例中，冠状病毒感染为肾感染。在一个实施例中，冠状病毒感染选自由以下组成的组：普通感冒、肺炎、局部肺炎、支气管炎、严重急性呼吸综合症(SARS)、中东呼吸综合症(MERS)、鼻窦炎、耳炎或咽炎。与冠状病毒感染相关的其它适应症在Gralinski和Baric，2015，《病理学杂志(J.Pathol.)》235：185-195和Cavanagh，2005，“冠状病毒科：冠状病毒和环状病毒的综述(Coronaviridae：areviewofcoronavirusesandtoroviruses)”，冠状病毒，特别强调SARS-1的初步认识(CoronaviruseswithSpecialEmphasisonFirstInsightsConcerningSARSI)，由A.Schmidt，M.H.Wolff和O.Weber编，瑞士巴塞尔博克豪斯出版社(VerlagBasel，Switzerland)中描述(其公开内容以引用的方式并入本文中)。因此，在一个优选的实施例中，冠状病毒感染为普通感冒。冠状病毒可选自以下：(a)α冠状病毒(如人冠状本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有蛋白酶活性的多肽，其用于治疗或预防受试者的冠状病毒感染。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180108 GB 1800274.11.一种具有蛋白酶活性的多肽，其用于治疗或预防受试者的冠状病毒感染。


2.根据权利要求1所述使用的多肽，其中所述冠状病毒感染为呼吸道和/或胃肠道感染。


3.根据权利要求1或2所述使用的多肽，其中所述冠状病毒感染选自由以下组成的组：普通感冒、肺炎、局部肺炎、支气管炎、严重急性呼吸综合症(SARS)、中东呼吸综合症(MERS)、鼻窦炎、耳炎或咽炎。


4.根据权利要求3所述使用的多肽，其中所述冠状病毒感染为所述普通感冒。


5.根据前述权利要求中任一项所述使用的多肽，其中所述冠状病毒选自由以下组成的组：
(a)α冠状病毒；
(b)β冠状病毒；
(c)γ冠状病毒；和
(d)δ冠状病毒。


6.根据前述权利要求中任一项所述使用的多肽，其中所述冠状病毒为人冠状病毒。


7.根据权利要求6所述使用的多肽，其中所述人冠状病毒选自由以下组成的组：
(a)人冠状病毒229E；
(b)人冠状病毒OC43；
(c)严重急性呼吸综合症冠状病毒(SARS-CoV)
(d)人冠状病毒NL63(HCoV-NL63，纽黑文冠状病毒)；
(e)人冠状病毒HKU1；和
(f)中东呼吸综合症冠状病毒(MERS-CoV)。


8.根据前述权利要求中任一项所述使用的多肽，其中所述受试者为哺乳动物，例如人。


9.根据前述权利要求中任一项所述使用的多肽，其中具有蛋白酶活性的所述多肽选自由以下组成的组：丝氨酸蛋白酶、苏氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、谷氨酸蛋白酶和金属蛋白酶。


10.根据权利要求9所述使用的多肽，其中所述蛋白酶为丝氨酸蛋白酶。


11.根据权利要求10所述使用的多肽，其中所述蛋白酶为胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶，或其混合物的组分。


12.根据前述权利要求中任一项所述使用的多肽，其中具有蛋白酶活性的所述多肽为冷适应的。


13.根据前述权利要求中任一项所述使用的多肽，其中所述多肽为天然存在的。


14.根据权利要求13所述使用的多肽，其中所述多肽为海洋丝氨酸蛋白酶。


15.根据权利要求14所述使用的多肽，其中所述海洋丝氨酸蛋白酶获自或可获自鳕鱼、狭鳕、鲑鱼或磷虾。


16.根据权利要求15所述使用的多肽，其中所述海洋丝氨酸蛋白酶获自或可获自大西洋鳕鱼。


17.根据权利要求14到16中任一项所述使用的多肽，其中所述海洋丝氨酸蛋白酶为胰蛋白酶，例如胰蛋白酶I。


18.根据前述权利要求中任一项所述使用的多肽，其中所述多肽为来自大西洋鳕鱼的胰蛋白酶I、胰蛋白酶X或胰蛋白酶ZT。


19.根据前述权利要求中任一项所述使用的多肽，其中所述胰蛋白酶的活性在1U/mg到1U/g的所述多肽的范围内，例如在50U/mg和500U/mg的所述多肽之间。


20.根据权利要求1到12中任一项所述使用的多肽，其中所述多肽为非天然存在的。


21.根据前述权利要求中任一项所述使用的多肽，其中所述多肽包含以下或由以下组成：SEQIDNO：1到12中的任一个的氨基酸序列、或其保留所述氨基酸序列的所述蛋白酶活性的片段、变体、衍生物或融合物(或所述片段、变体或衍生物的融合物)。


22.根据权利要求21所述使用的多肽，其中所述多肽包含以下或由以下组成：选自SEQIDNO：1到12中的任一个的氨基酸序列。


23.根据权利要求1到21中任一项所述使用的多肽，其中所述多肽包含以下或由以下组成：根据SEQIDNO：1到12的所述氨基酸序列的片段。


24.根据权利要求23所述使用的多肽，其中所述片段包含以下或由以下组成：SEQIDNO：1到12中的任一个的至少15个连续氨基酸，例如SEQIDNO：1到12中的任一个的至少16、17、18、19、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230或240个连续氨基酸。


25.根据权利要求1到21中任一项所述使用...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿古斯塔·格维兹门斯多蒂尔，比亚基·斯特凡松，冈纳·比吉尔·桑德霍尔特，
申请(专利权)人：酶公司，
类型：发明
国别省市：瑞典;SE