测试试剂盒和测定制造技术

本发明专利技术提供了可用于筛选测试样品中配体存在的体外测试试剂盒、测定和方法，所述配体的特征在于其在细胞中时与类固醇激素受体形成复合物并引起基因组应答的能力。有利地，形成本文所述的测试试剂盒和方法的基础的基于活性的测定特别适用于检测未知结构的配体的存在，例如，马、犬和人类运动员在运动兴奋剂使用中使用的设计药物。公开了不同的测定原型，其中例如通过报道子的激活，可以检测到通过配体结合相互作用引起的激素受体激活。在某些实例中，本发明专利技术提供了涉及适体:荧光团报告子构建体的测试试剂盒、测定和方法，用于检测来自(例如)赛道旁采集自运动员的样品中的配体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】测试试剂盒和测定
本专利技术总体上涉及用于检测测试样品中配体的测定、方法和测试试剂盒。特别地，本专利技术提供了筛选测试样品中配体存在的测定、方法和测试试剂盒，所述配体的特征在于在细胞中时与类固醇激素受体形成复合物并引发基因组应答的能力。专利技术背景结合类固醇激素受体蛋白的配体的检测在许多领域中都是重要的，包括，例如，针对可能影响人类健康的有机污染物的环境测试、针对人类疾病的诊断和预后测试，包括(例如)内分泌-和非内分泌-癌的检测和/或监测，以及药物测试，包括负责维持(例如)人类运动员和赛马行业的公平竞争的专业体育组织。检测结合类固醇激素受体蛋白的配体的存在的常用方式是直接测量样品中的配体。然而，样品常常是分子的复杂混合物并且通常需要复杂的准备过程用于分析。检测样品中配体的存在通常依赖于如液相或气相色谱这样的过程，以从复合混合物将分子物质分离成相对纯的组成部分，随后用结构灵敏性方法(如质谱)来分析每个部分。自动化纯化系统、气相或液相色谱和质谱是昂贵的并且是必需由受过培训的技术人员不断校准和操作的技术上复杂的实验室仪器，以产生可靠的结果本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于筛选测试样品中配体存在的测试试剂盒，所述配体在细胞中时能够与类固醇激素受体形成复合物并引发基因组应答，所述测试试剂盒包含：/n(i)与来自测试样品的配体形成受体-配体复合物的激素受体；和/n(ii)被受体-配体复合物结合的核酸应答元件；和/n(iii)用于检测受体-配体复合物与核酸应答元件之间的结合的检测工具；和任选/n其中，将样品与测试试剂盒结合并检测到受体-配体复合物与核酸应答元件之间的结合时，测定测试样品中配体的存在。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180827 NZ 745713;20171103 US 62/581,260;201801081.一种用于筛选测试样品中配体存在的测试试剂盒，所述配体在细胞中时能够与类固醇激素受体形成复合物并引发基因组应答，所述测试试剂盒包含：
(i)与来自测试样品的配体形成受体-配体复合物的激素受体；和
(ii)被受体-配体复合物结合的核酸应答元件；和
(iii)用于检测受体-配体复合物与核酸应答元件之间的结合的检测工具；和任选
其中，将样品与测试试剂盒结合并检测到受体-配体复合物与核酸应答元件之间的结合时，测定测试样品中配体的存在。


2.根据权利要求1的测试试剂盒，其中测试试剂盒中类固醇激素受体与核酸应答元件的相对含量为x:1，其中x是类固醇激素受体的含量并且定义为[0.2≤x≤20]。


3.根据权利要求1或权利要求2的测试试剂盒，其中测试试剂盒进一步包含类固醇激素受体辅因子，其防止类固醇激素受体结合核酸应答元件。


4.根据权利要求3的测试试剂盒，其中类固醇激素受体辅因子选自热休克蛋白70、热休克蛋白40、热休克蛋白90、p23、热休克蛋白组织蛋白(Hop)、48kDHip蛋白、p60和FKBP52。


5.根据权利要求1至4任一项的测试试剂盒，其中核酸应答元件可操作地连接报道子元件，并且通过研究报道子元件的转录或翻译来测定受体-配体复合物与核酸应答元件的结合。


6.一种用于筛选测试样品中配体存在的测试试剂盒，所述配体在细胞中时能够与类固醇激素受体形成复合物并引发基因组应答，所述测试试剂盒包含：
(i)与来自测试样品的配体形成受体-配体复合物的激素受体；和
(ii)被受体-配体复合物结合的核酸应答元件；和
(iii)可操作地连接核酸应答元件的报道子构建体；和任选
(iv)类固醇激素受体辅因子、转录机构、类固醇代谢机构和/或无细胞提取物
其中，当受体-配体复合物与核酸应答元件结合时激活报道子构建体，并且
其中，将样品与测试试剂盒结合并检测到报道子构建体的转录时，测定样品中配体的存在。


7.根据权利要求6的测试试剂盒，其中测试试剂盒中类固醇激素受体与核酸应答元件的相对含量为x:1，其中x是类固醇激素受体的含量并且定义为[0.2≤x≤20]。


8.根据权利要求6或权利要求7的测试试剂盒，其中类固醇激素受体辅因...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·K·希瑟，S·J·索尔比，
申请(专利权)人：奥塔哥创新有限公司，
类型：发明
国别省市：新西兰;NZ