分子标志物5-tRF-His、乳腺癌检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种分子标志物5‑tRF‑His、乳腺癌检测试剂盒及其应用。本发明专利技术的5‑tRF‑His可以作为检测乳腺癌的分子标志物，5‑tRF‑His与乳腺癌的增殖、凋亡密切相关，用于诊断乳腺癌和预后判断。

【技术实现步骤摘要】
分子标志物5-tRF-His、乳腺癌检测试剂盒及其应用
本专利技术属于生物
，特别涉及一种分子标志物5-tRF-His、乳腺癌检测试剂盒及其应用。
技术介绍
乳腺癌在女性恶性肿瘤中发病率位居第一位，死亡率位居第六位，严重危害人们的健康和生活。尽管在药物敏感性和外科技术上已有巨大的突破，但复发和转移的频繁发生，仍是晚期乳腺癌患者死亡的主要原因。目前临床诊断乳腺癌的方法主要依赖于体格检查和影像学检查，但这些方法对于早期乳腺癌的发现敏感性很低，常用来诊断乳腺癌的血清标志物对早期诊断的敏感性和特异性均不理想。因此，深入理解乳腺癌的发生和发展机制，积极筛选鉴定有效的诊断和预后标志物，对提高乳腺癌检出率和治愈率具有重要意义。转运RNA(tRNA)传统意义上作为转运核糖核酸至核糖体载体，是参与合成蛋白质的重要分子，其经典的三叶草结构已有深入研究。但是tRNA在基因调控方面的功能知之甚少。日前，以tRNA为前体，经酶剪切而成的tRF&tiRNA(tRNAfragments&tRNAhalves)引起广泛关注。查阅相关文献显示，相关tRF&tiRNA在肿瘤方面的研究刚刚起步，具有类似于miRNA的调控功能，并能参与调控基因转录和翻译，细胞增殖以及细胞应激反应。有研究提示tiRNAs在鼠血清中稳定性表达，具有转录前抑制功能，可能是一类新型信号分子。tRF是在物种间高度保守的单链小RNA分子，长度在15-34个核苷酸序列之间，不具有编码蛋白质的能力。根据在前体tRNA上不同的剪切位点，将切割产物分为以下几种：3’tRF、5’tRF、tiRNAs、tRNAhalves等。因与miRNAs长度类似，tRF已在多项研究中显示具有类似的调控靶基因mRNA的功能，可能对细胞起到关键的调节作用。因此，从tRF&tiRNA角度挖掘乳腺癌新型分子靶标并探讨分子机制十分必要。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术提供了一种用于乳腺癌的诊断或预后判断的分子标志物5-tRF-His。本专利技术还提供了该5-tRF-His在诊断乳腺癌或预后判断的试剂或试剂盒中的用途以及检测试剂或试剂盒。技术方案：本专利技术第一方面提供了用于乳腺癌的诊断或预后判断的分子标志物，所述分子标志物为5-tRF-His，所述5-tRF-His的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术第二方面提供了乳腺癌分子标志物用于制备诊断乳腺癌或预后判断试剂或试剂盒的用途，所述乳腺癌分子标志物为5-tRF-His，所述5-tRF-His核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术第三方面提供了一种用于诊断乳腺癌或预后判断的试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒用于检测血清中5-tRF-His表达水平。上述用于诊断乳腺癌的试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒包含如SEQIDNO.2所示的引物1以及如SEQIDNO.3所示的引物2。进一步地，检测5-tRF-His表达量的试剂盒(PCR试剂盒)。除了上述的引物探针，还包括PCR反应常用试剂，如Taq酶，逆转录酶，缓冲液，dNTPs，MgCl2和DEPC水等；还可以含有标准品和/或对照品。所述引物1为PCR正向引物：5’-CAGTCCGACGATCTGCCG-3'(SEQIDNO.2)；所述引物2为PCR反向引物：5’-GCTCTTCCGATCTCTAACCACTAT-3'(SEQIDNO.3)。本专利技术第四方面还提供了一种用于检测乳腺癌分子标志物的探针，所述探针包含如SEQIDNO.2所示的引物1以及如SEQIDNO.3所示的引物2，所述乳腺癌分子标志物为5-tRF-His。本专利技术第五方面提供了用于检测血清中5-tRF-His的引物在制备诊断乳腺癌或预后判断的试剂或试剂盒中的用途，所述引物包含如SEQIDNO.2所示的引物1以及如SEQIDNO.3所示的引物2。本专利技术第六方面提供了5-tRF-His在制备治疗乳腺癌药物的应用。本专利技术第七方面提供了5-tRF-His在制备阻碍乳腺癌细胞MDA-MB-231以及MCF7增殖药物的应用。本专利技术还提供了5-tRF-His在制备促进乳腺癌细胞MDA-MB-231以及MCF7凋亡药物中的应用。本专利技术第八方面提供了5-tRF-His的检测方法，该检测方法包含以下步骤：通过如SEQIDNO.2所示的引物1以及如SEQIDNO.3所示的引物2，检测血清中5-tRF-His。具体地，该方法首先对样本利用实施例1.2部分进行前处理，处理后的样本通过实施例1.3部分的方法检测5-tRF-His。本专利技术第九方面提供了一种用于乳腺癌的诊断的分子标志物作为筛选药物候选物或疫苗候选物的体外或离体用途，所述分子标志物为5-tRF-His，所述5-tRF-His的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；所述药物候选物或疫苗候选物为潜在的有效预防和/或治疗乳腺癌的化合物或生物制品。有益效果：(1)本专利技术证实了5-tRF-His可以作为乳腺癌诊断标志物，可通过检测血清中的5-tRF-His表达量来诊断和预示乳腺癌，取样方便、易于检测，且具有特异性和灵敏度高等优点；(2)本专利技术通过检测发现，5-tRF-His在乳腺癌组织中的表达明显低于癌旁组织，在乳腺癌患者血清中的表达明显低于健康个体，证明5-tRF-His可以作为乳腺癌的诊断标志物；(3)本专利技术检测发现5-tRF-His水平在乳腺癌细胞中低于其他细胞系，证明乳腺癌中5-tRF-His特异性低表达，诊断更加准确、快速；(4)本专利技术为乳腺癌的检测及治疗提供了新思路。附图说明图1为5-tRF-His在乳腺癌组织和细胞中低表达，其中，A为以0.5和2.0为界将乳腺癌组织及其相应癌旁组织5-tRF-His表达的比值(T/N)分为三组；B为23对乳腺癌组织被分为两组：其中20对T/N＜0.5，另外3对T/N在0.5-2.0之间；C为qPCR检测其中20对乳腺癌组织中5-tRF-His的相对表达量；D为30个正常健康对照血清和60个乳腺癌患者血清表达的散点图分析，乳腺癌组出现了显著下调，继续对60个乳腺癌患者血清进行分析发现，相较于StageⅠ-Ⅱ组，StageⅢ-Ⅳ组患者血清中5-tRF-His下调更明显，并且低表达5-tRF-His者淋巴结远端转移率高；E为Roc曲线分析5-tRF-His的血清学诊断效能，曲线下面积(AUC)为0.7167，具有统计学差异；F为qPCR检测5-tRF-His在乳腺、肝癌、结直肠癌细胞系中的表达；G为qPCR检测乳腺癌细胞中5-tRF-His表达的核/质比，U6、GAPDH分别作为核、质中RNA提取物的内参；H为FISH检测5-tRF-His在乳腺癌细胞中的表达和亚细胞定位，红色荧光为5-tRF-His荧光信号，蓝色荧光为DAPI荧光信号。图2为5-tRF-His的基本生物学特征分析结果证实5-tRF-His是tRNA来源的小分子，与pan-ago蛋白结合发挥作用，其中，A为MINTbase数据库中5-tRF-His的生物学信息本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于乳腺癌的诊断或预后判断的分子标志物，其特征在于，所述分子标志物为5-tRF-His，所述5-tRF-His的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.用于乳腺癌的诊断或预后判断的分子标志物，其特征在于，所述分子标志物为5-tRF-His，所述5-tRF-His的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.乳腺癌分子标志物用于制备诊断乳腺癌或预后判断的试剂或试剂盒的用途，其特征在于，所述乳腺癌分子标志物为5-tRF-His，所述5-tRF-His核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。


3.一种用于诊断乳腺癌或预后判断的试剂或试剂盒或用于检测分子标志物5-tRF-His的试剂或试剂盒，其特征在于，所述试剂或试剂盒用于检测血清中5-tRF-His表达水平。


4.如权利要求3所述的试剂或试剂盒，其特征在于，所述试剂或试剂盒包含如SEQIDNO.2所示的引物1以及如SEQIDNO.3所示的引物2。


5.一种用于检测乳腺癌分子标志物的探针，其特征在于，所述探针包含如SEQIDNO.2所示的引物1以及如SEQIDNO.3所示的引物2。


6....

【专利技术属性】
技术研发人员：汤珣，严枫，
申请(专利权)人：江苏省肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：江苏;32