本发明专利技术涉及疫苗领域，尤其涉及特异性针对SARS‑COV‑2病毒的DNA疫苗。本发明专利技术公开了一种融合蛋白，其包含SEQ ID NO:10中14‑1294位的氨基酸序列或SEQ ID NO:9编码的成熟多肽；一种融合蛋白，其包含SEQ ID NO:12中14‑1094位的氨基酸序列或SEQ ID NO:11编码的成熟多肽；以及编码所述融合蛋白的多核苷酸或包含所述多核苷酸序列的核酸分子。本发明专利技术还公开了相关的组合物、方法、用途和试剂盒。
【技术实现步骤摘要】
针对SARS-COV-2病毒的DNA疫苗及其用途
本专利技术涉及疫苗领域，尤其涉及特异性针对SARS-COV-2病毒的DNA疫苗。
技术介绍
2003年的SARS-COV和2012年的MERS-COV在世界范围内感染了众多人群；2019年底爆发的SARS-COV-2群体感染也影响甚大，目前迫切需要开发针对SARS-COV-2的有效疫苗，如DNA疫苗。尽管人们寻求各种增强抗原效力的方式，但在这方面的努力成果仍然是有限且难以预料的。在一些个案中表现出抗原效力增强的方式往往又在另一些个案中表现出难以应用的劣势。例如，曾被试图用于增强抗原效力的Hsp70在自身免疫性疾病模型中引发免疫耐受（PrakkenBJ,WendlingU,vanderZeeR,etal.InductionofIL-10andinhibitionofexperimentalarthritisarespecificfeaturesofmicrobialheatshockproteinsthatareabsentforotherevolutionarilyconservedimmunodominantproteins[J].TheJournalofImmunology,2001,167(8):4147-4153.），甚至有些情况下Hsp70与肿瘤抗原Her2融合不但降低Her2DNA疫苗的有效性，而且还促进肿瘤进展（PakravanN,SoudiS,HassanZM.N-terminallyfusionofHer2/neutoHSP70decreasesefficiencyofHer2/neuDNAvaccine[J].CellStressandChaperones,2010,15(5):631-638.）。而且，当试图把SARSCOV-2的功能性亚基S1作为靶抗原用于制备疫苗时，由于该亚基S1的性质与常见抗原不同，例如其大小远超常见抗原，使得通常的抗原增效技术的可用性存疑，例如产生的应答（如有）是否是免疫有用的，产生的抗体（如有）是否是中和性/阻断性的，是否具有保护作用和/或细胞杀伤作用，都是未知的。试图使用辅助序列使抗原增效的努力其结果不但难以预料，而且甚至有可能导致负面效果。可见，增强抗原效力的尝试需要大量的努力和实验验证。另外，从安全性的角度，还需要克服DNA疫苗普遍存在的体内长期存续带来的潜在安全性问题，以及机体针对增效组分产生的不期望的抗体应答（即不期望的免疫原性）的安全性问题。
技术实现思路
本专利技术提供了持续、高效地诱导机体产生针对SARS-COV-2的体液免疫应答和细胞免疫应答两者且具有改善的安全性的DNA疫苗，满足了目前对SARS-COV-2病毒疫苗的迫切需要。因此，在一个方面，本专利技术提供了一种融合蛋白，其包含SEQIDNO:10中14-1294位的氨基酸序列或SEQIDNO:9编码的成熟多肽。在另一个方面，本专利技术提供了一种融合蛋白，其包含SEQIDNO:12中14-1094位的氨基酸序列或SEQIDNO:11编码的成熟多肽。在又一个方面，本专利技术提供了一种编码本文所述的融合蛋白的多核苷酸或包含所述多核苷酸序列的核酸分子。在又一个方面，本专利技术提供了一种载体，其包含本文所述的多核苷酸序列。在又一个方面，本专利技术提供了一种组合物，其包含：（1）本文所述的融合蛋白，或本文所述的多核苷酸，或本文所述的载体；和（2）药学上可接受的载体和/或赋形剂。在又一个方面，本专利技术提供了本文所述的融合蛋白、或本文所述的多核苷酸、或本文所述的载体、或本文所述的组合物在制备用于在有需要的受试者中治疗或预防SARS-COV-2病毒感染和/或相关疾病的药物中的用途。在又一个方面，本专利技术提供了一种在有需要的受试者中治疗或预防SARS-COV-2病毒感染和/或相关疾病的方法，其包括将本文所述的融合蛋白、或本文所述的多核苷酸、或本文所述的载体、或本文所述的组合物施用于所述受试者。在又一个方面，本专利技术提供了一种用于在有需要的受试者中治疗或预防SARS-COV-2病毒感染和/或相关疾病的试剂盒，其包括：（1）本文所述的融合蛋白、或本文所述的多核苷酸、或本文所述的载体、或本文所述的组合物；和（2）选自人GM-CSF、IL-2、IFN-γ和/或IL-17中的一种或多种的细胞因子、或编码所述细胞因子的多核苷酸、或包含所述多核苷酸的载体。在又一个方面，本专利技术提供了一种在有需要的受试者中治疗或预防SARS-COV-2病毒感染和/或相关疾病的方法，其包括：（1）将选自人GM-CSF、IL-2、IFN-γ和/或IL-17中的一种或多种的细胞因子、或编码所述细胞因子的多核苷酸、或包含所述多核苷酸的载体施用于所述受试者；然后（2）将本文所述的融合蛋白、或本文所述的多核苷酸、或本文所述的载体、或本文所述的组合物施用于所述受试者。当参考下面的详细描述和附图时，本专利技术的这些和其他实施方式将变得显而易见。此外，本申请中提到的专利和非专利文献均完整引入本文作为参考。附图说明图1：SARS-COV-2S1-Hsp70融合抗原蛋白及其表达载体的构建。图1A．融合抗原蛋白结构组成示意图；图1B．融合抗原蛋白的分子克隆表达载体构建示意图图2：SARS-COV-2S1-Hsp70融合抗原蛋白在293细胞中的表达的检测（WB）。图3：不同细胞因子DNA表达载体转染293细胞48小时后的细胞因子表达。图4：转染后的GFP载体的表达的荧光成像图。图5：用SARS-COV-2S1-Hsp70和SARS-COV-2S1-Hsp70(△200)DNA表达载体免疫小鼠，诱导小鼠产生SARS-COV-2S1蛋白特异性抗体。图6：SARS-COV-2S1-Hsp70和SARS-COV-2S1-Hsp70(Δ200)融合抗原蛋白诱导产生Hsp70蛋白特异性抗体。图7：SARS-COV-2S1-Hsp70融合抗原蛋白的构建促进其DNA表达载体在机体内的有效清除。泳道1：pVax1-SARS-COV-2S1+pVax1-Hsp70；泳道2：pVax1-SARS-COV-2S1-Hsp70；泳道3：pVax1-SARS-COV-2S1；泳道4：pVax1-Hsp70；泳道5：pVax1-SARS-COV-2S1-Hsp70(Δ200)。图8：SARS-COV-2S1-Hsp70和SARS-COV-2S1-Hsp70(△200)DNA表达载体免疫小鼠诱导产生的SARS-COV-2S1特异性抗体对SARS-COV-2S1蛋白与肺泡上皮细胞结合的抑制作用。图9：用SARS-COV-2-S1-Hsp70DNA和SARS-COV-2S1-Hsp70(△200)DNA表达载体免疫小鼠，刺激SARS-COV-2S1特异性T细胞产生IL-2和IFN-γ因子。图10：SARS-COV-2S1-Hsp70和SARS-COV-2S1-Hsp70(△200)DNA表达本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种融合蛋白，其包含SEQ ID NO: 10中14-1294位的氨基酸序列或SEQ ID NO: 9编码的成熟多肽。/n
【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白，其包含SEQIDNO:10中14-1294位的氨基酸序列或SEQIDNO:9编码的成熟多肽。
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其由SEQIDNO:10的氨基酸序列或SEQIDNO:10的14-1294位的氨基酸序列或SEQIDNO:9编码的成熟多肽组成。
3.权利要求1或2所述的融合蛋白，其中SEQIDNO:10中14-667位的氨基酸序列与671-1294位的氨基酸序列的位置互换。
4.一种融合蛋白，其包含SEQIDNO:12中14-1094位的氨基酸序列或SEQIDNO:11编码的成熟多肽。
5.根据权利要求4所述的融合蛋白，其由SEQIDNO:12的氨基酸序列或SEQIDNO:12的14-1094位的氨基酸序列或SEQIDNO:11编码的成熟多肽组成。
6.权利要求4或5所述的融合蛋白，其中SEQIDNO:12中14-667位的氨基酸序列与671-1094位的氨基酸序列的位置互换。
7.一种编码权利要求1-6中任一项所述的融合蛋白的多核苷酸序列或包含所述多核苷酸序列的核酸分子。
8.根据权利要求7所述的多核苷酸序列或核酸分子，其由SEQIDNO:9或SEQIDNO:11组成。
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【专利技术属性】
技术研发人员：吴炯，黄勇，
申请(专利权)人：艾立克北京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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