尿液前列腺癌标志物组合及其在制备精准诊断试剂中的用途制造技术

本发明专利技术提供了一种尿液前列腺癌标志物组合及其在制备精准诊断试剂中的用途。本发明专利技术的标志物组合中，包括属于非编码RNA的基因、融合基因等。在尿液样品中，这些基因可呈现在前列腺癌患者以及正常患者中的表达差异，而对这些基因进行联合检测，可以呈现精准的检测结果，特异性和灵敏度非常理想。

【技术实现步骤摘要】
尿液前列腺癌标志物组合及其在制备精准诊断试剂中的用途
本专利技术属于疾病诊断
，更具体地，本专利技术涉及尿液分子标志物及其在制备精准诊断前列腺癌的试剂中的用途。
技术介绍
前列腺癌在欧美国家男性中是最常见的恶性肿瘤，发病率居首位。世界权威癌症统计数据杂志《CACancerJClin》统计表明，美国2017年新发前列腺癌病例161,360人，占男性恶性肿瘤发病率第一位(19％)，死亡率第三位(8％)。中国前列腺癌的发病率虽低于西方国家，但由于环境污染、饮食结构西方化及人口老龄化等因素，近年来前列腺癌的发病率有逐年上升趋势，尤其在经济发达地区发病率迅速升高，已位列中国男性癌症发病率的第六位，成为威胁中国老年男性健康的重要原因之一。早诊早治可显著提高前列腺癌的临床预后并降低死亡率。目前前列腺癌的早期诊断主要依赖于前列腺特异性抗原(prostatespecificantigen，PSA)和经直肠超声检查。目前血清PSA是筛选前列腺癌最重要的参考指标，然而PSA作为前列腺癌的筛查工具并不具有特异性，从而导致前列腺穿刺活检阴性率较高，也使得重复穿刺数增加。尤其是PSA处于“灰区”(4～10ng/mL)时，前列腺癌的检出率仅为25％左右，活检阴性率占70～80％。不必要的活检增加了前列腺出血及感染的风险，增加了患者焦虑情绪和穿刺时的痛苦，同时也导致了部分低危前列腺癌的过度治疗。而部分PSA水平不高的患者仍可罹患前列腺癌。因此，寻找一种更加精准的肿瘤标志物以供临床筛查、诊疗刻不容缓。研究发现，前列腺癌患者尿液中存在一些与肿瘤相关的生物标志物分子，因此采集尿液更为方便，尿液检测是一种无创性技术。但是，之前报道的检测方法常常需要直肠指检(DRE)或前列腺按摩以使得足够前列腺衍生的细胞能够进入尿液，同时需要离心分离尿液沉渣，存在操作繁琐，耗时长等问题。另外操作直肠指检会导致病人的不适，甚至炎症，极大影响了这些检测方法的普及和大面积推广。因此，迫切需要新的、无创伤性的检测方法，以帮助对前列腺疾病的诊断、预后、监测或治疗选择。
技术实现思路
本专利技术通过分析临床受试者晨尿初始段尿液样品中的多种基因标志物，开发了一种简洁的、非入侵性的测试方法，用于精准诊断前列腺癌患者。在本专利技术的第一方面，提供一种用于检测前列腺癌的试剂盒，包括：特异性检测人PCA3基因(非编码RNA)的检测试剂；特异性检测人MALAT1基因(非编码RNA)的检测试剂；特异性检测人TMPRSS2-ERG基因(融合基因)的检测试剂；特异性检测人SChLAP1基因(非编码RNA)的检测试剂；特异性检测人TTTY15-USP9Y基因(融合基因)的检测试剂；特异性检测人DLX1基因的检测试剂；和特异性检测人HOXC6基因的检测试剂；其中，所述的检测前列腺癌所针对的待测样本为尿液。在一个优选例中，所述特异性检测所述基因的检测试剂包括选自下组的试剂：特异性扩增所述基因的引物或特异性识别所述基因的探针；较佳地，特异性检测所述基因的检测试剂为特异性扩增所述基因的引物。在另一优选例中，所述特异性检测人PCA3基因的检测试剂为SEQIDNO:7和SEQIDNO:8所示核苷酸序列的引物。在另一优选例中，所述特异性检测人MALAT1基因的检测试剂为SEQIDNO:5和SEQIDNO:6所示核苷酸序列的引物。在另一优选例中，所述特异性检测人TMPRSS2-ERG基因的检测试剂为SEQIDNO:13和SEQIDNO:14所示核苷酸序列的引物。在另一优选例中，所述特异性检测人SChLAP1基因的检测试剂为SEQIDNO:11和SEQIDNO:12所示核苷酸序列的引物。在另一优选例中，所述特异性检测人TTTY15-USP9Y基因的检测试剂为SEQIDNO:15和SEQIDNO:16所示核苷酸序列的引物。在另一优选例中，所述特异性检测人DLX1基因的检测试剂为SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示核苷酸序列的引物。在另一优选例中，所述特异性检测人HOXC6基因的检测试剂为SEQIDNO:3和SEQIDNO:4所示核苷酸序列的引物。在另一优选例中，所述的试剂盒中还包括：特异性检测内参基因的检测试剂；较佳地，所述的特异性检测内参基因的检测试剂是针对人KLK3基因的引物；更佳地，所述的特异性检测内参基因的检测试剂是：SEQIDNO:9和SEQIDNO:10所示核苷酸序列的引物。在另一优选例中，所述的内参基因用于指示DNA提取和/或检测的质量。在另一优选例中，所述的前列腺癌为中国患者罹患的前列腺癌。在另一优选例中，所述的试剂盒是应用于对中国患者进行前列腺癌的筛查、检测或诊断的试剂盒。在另一优选例中，所述的引物各自独立地存在于所述试剂盒中，或被混合形成混合液。在另一优选例中，所述的尿液为全天不同时间点的尿液；较佳地，所述的尿液为晨尿；更佳地，所述的尿液为晨尿首段25-40mL尿液样品。在另一优选例中，所述的试剂盒中还包括选自下组的试剂(但不限于)：尿液保存液，RNA捕获液，洗涤液，洗脱液，磁珠，DNA聚合酶(如Taq酶)，dNTPs，质控品、阴性对照和/或说明书。在本专利技术的另一方面，提供人PCA3基因、人MALAT1基因、人TMPRSS2-ERG基因、人SChLAP1基因、人TTTY15-USP9Y基因、人DLX1基因和人HOXC6基因的用途，用于制备检测前列腺癌的试剂；其中，所述的检测前列腺癌所针对的待测样本为尿液；较佳地，所述的尿液为晨尿。在本专利技术的另一方面，提供特异性检测人PCA3基因、人MALAT1基因、人TMPRSS2-ERG基因、人SChLAP1基因、人TTTY15-USP9Y基因、人DLX1基因和人HOXC6基因的试剂的用途，用于制备检测前列腺癌的试剂盒；其中，所述的检测前列腺癌所针对的待测样本为尿液；较佳地，所述的尿液为晨尿。在一个优选例中，特异性检测所述基因的检测试剂包括选自下组的试剂：特异性扩增所述基因的引物或特异性识别所述基因的探针；较佳地，特异性检测所述基因的检测试剂为特异性扩增所述基因的引物。本专利技术的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。附图说明图1、分子标志物在不同时间点收集的匹配尿液中具有对等的含量。其中，FirstMorningVoid：早晨首次尿液(晨尿首段25-40mL)；Pre-DRE：直肠指检前尿液；Post-DRE：直肠指检后尿液。图2、内参基因校正。图3、在活检阳性肿瘤患者组中，七种尿液RNA评分均显著高于阴性对照组。图4、前列腺肿瘤中PCA3的特异性和敏感性评分。图5、多基因指标的特异性和敏感性评分，联合检测极大地提高了预测前列腺癌患病的风险。具体实施方式本专利技术人致力于前列腺癌的尿液检测标志物的研究，经过广泛的研究筛选，确定了7个特别适用于利用尿液样品进行前列腺癌诊断的敏感基因，它们是PCA3、MALAT1和SC本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测前列腺癌的试剂盒，包括：/n特异性检测人PCA3基因的检测试剂；/n特异性检测人MALAT1基因的检测试剂；/n特异性检测人TMPRSS2-ERG基因的检测试剂；/n特异性检测人SChLAP1基因的检测试剂；/n特异性检测人TTTY15-USP9Y基因的检测试剂；/n特异性检测人DLX1基因的检测试剂；和/n特异性检测人HOXC6基因的检测试剂；/n其中，所述的检测前列腺癌所针对的待测样本为尿液。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于检测前列腺癌的试剂盒，包括：
特异性检测人PCA3基因的检测试剂；
特异性检测人MALAT1基因的检测试剂；
特异性检测人TMPRSS2-ERG基因的检测试剂；
特异性检测人SChLAP1基因的检测试剂；
特异性检测人TTTY15-USP9Y基因的检测试剂；
特异性检测人DLX1基因的检测试剂；和
特异性检测人HOXC6基因的检测试剂；
其中，所述的检测前列腺癌所针对的待测样本为尿液。


2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，特异性检测所述基因的检测试剂包括选自下组的试剂：特异性扩增所述基因的引物或特异性识别所述基因的探针；较佳地，特异性检测所述基因的检测试剂为特异性扩增所述基因的引物。


3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述特异性检测人PCA3基因的检测试剂为SEQIDNO:7和SEQIDNO:8所示核苷酸序列的引物；
所述特异性检测人MALAT1基因的检测试剂为SEQIDNO:5和SEQIDNO:6所示核苷酸序列的引物；
所述特异性检测人TMPRSS2-ERG基因的检测试剂为SEQIDNO:13和SEQIDNO:14所示核苷酸序列的引物；
所述特异性检测人SChLAP1基因的检测试剂为SEQIDNO:11和SEQIDNO:12所示核苷酸序列的引物；
所述特异性检测人TTTY15-USP9Y基因的检测试剂为SEQIDNO:15和SEQIDNO:16所示核苷酸序列的引物；
所述特异性检测人DLX1基因的检测试剂为SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示核苷酸序列的引物；
所述特异性检测人HOXC6基因的检测试剂为SEQIDNO:3和SEQIDNO:4所示核苷酸序列的引物。


4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还包括：
特异性检测内参基因的检测试剂；较佳地，所述的特异性检测内参基因的检测试剂是针对人KLK3基因的引物；更佳地，所述的特异性检测内参基因的检测试剂是：SEQIDNO:9和SEQIDNO:10所示核苷酸序列的引物。


5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的尿液为直肠指检前或后的尿液，或为晨尿；或<...

【专利技术属性】
技术研发人员：王孝举，张祖洪，
申请(专利权)人：奥尔文泰生物科技杭州有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33