一种提高外源核酸转化效率的方法技术

一种提高外源核酸转化效率的方法，HGFI是一种灰树花真菌中产生的高表面活性蛋白，通过质粒DNA与HGFI的复配，提高利用外源核酸转化受体菌的效率。本方法大致可分为4步：1.毕赤酵母(Pichia pastoris)异源表达真菌疏水蛋白HGFI并纯化，获得纯度95％以上的HGFI蛋白，作为复配样品。2.将HGFI与质粒以固定比例10:1混合得到质粒浓度为10μg/mL的混合液。3.将混合液于30℃恒温培养箱中静置温浴1h。4.将处理后的质粒混合物以化学转化法转化入受体菌中。该转化方法使目前分子生物学中常用的工程菌大肠杆菌DH5α的转化率增加约60％，操作效率的提高可为科研工作者提供巨大便利。

【技术实现步骤摘要】
一种提高外源核酸转化效率的方法
本专利技术涉及生物分子操作
，尤其涉及一种外源DNA转化至某一种受体菌的方法。
技术介绍
DNA转化是现代分子生物学最基本和最常见的操作技术之一，在分子生物学遗传操作中占据基础地位。受体菌经转化可以获得外源DNA，从而表达出稳定的可遗传的性状。常见的转化方法大体可分为两类：1.化学转化，分为两个阶段，首先制备获得可以接受外源DNA的感受态细胞，其次DNA进入细胞并且稳定复制表达。化学转化法通常适用于革兰氏阴性菌转化。2.电穿孔转化。约5–10kV/cm的电压电击5–10μs即可使各种不同的细胞表面形成孔洞，因此可以促进外源DNA分子的吸收，该方法适用性较为普遍，包括革兰氏阳性和阴性细菌。转化效率的高低直接影响到前后实验的进展和工作效率。为了提高转化率，40年来科研工作者在上述两种基本转化方法基础上进一步改善和延伸出一些方法。但是这些方法在追求转化率的同时或多或少增加了转化流程的复杂性。就目前状况来看，转化率仍然是分子生物学发展瓶颈。高效的DNA转化效率对于在感受态细胞中基因的成功克隆和表达有着十分重本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高外源核酸转化效率的方法，该方法的具体步骤包括：/n1)毕赤酵母(Pichiapastoris)菌株异源表达真菌疏水蛋白HGFI并纯化，获得纯度95％以上的HGFI蛋白，作为复配样品；/n2)将HGFI与质粒以固定质量比例10:1混合得到质粒浓度为10μg/mL的混合液；/n3)将混合液于30℃恒温培养箱中静置温浴1h；/n4)将步骤3)处理后的质粒混合物以化学转化法转化至受体菌中。/n

【技术特征摘要】
1.一种提高外源核酸转化效率的方法，该方法的具体步骤包括：
1)毕赤酵母(Pichiapastoris)菌株异源表达真菌疏水蛋白HGFI并纯化，获得纯度95％以上的HGFI蛋白，作为复配样品；
2)将HGFI与质粒以固定质量比例10:1混合得到质粒浓度为10μg/mL的混合液；
3)将混合液于30℃恒温培养箱中静置温浴1h；
4)将步骤3)处理后的质粒混合物以化学转化法转化至受体菌中。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，相比于传统的化学转化方法，真菌疏水蛋白HGFI复配方法提升了外源核酸对受体菌感受态细胞的转化效率，平均提高幅度达到了60％。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔明强，刘宇杰，张梦晴，白艳玲，张秀明，徐海津，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：天津;12