一种蛋白单磷酸尿苷酸化修饰的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种蛋白单磷酸尿苷酸化修饰的检测方法，本方法使用生物素标记的UTP(Biotin‑16‑UTP)为原料，在单磷酸尿苷酸转移酶YdiU作用下，发生UMP化修饰的蛋白同时也带有生物素标记。后续使用生物素‑链酶亲和素印迹法验证待测蛋白是否具有生物素标记。本发明专利技术具有简易，方便，高灵敏性等特点，可用于高通量筛选原核及真核细胞内发生单磷酸尿苷酸化的蛋白，结合质谱检测可确定修饰位点，为蛋白尿嘧啶单核苷酸化修饰的研究提供有效的鉴定和研究手段。

【技术实现步骤摘要】
一种蛋白单磷酸尿苷酸化修饰的检测方法
本专利技术涉及生物化学领域，具体地说，是涉及一种蛋白单磷酸尿苷酸化修饰的检测方法。
技术介绍
蛋白质是生命活动的承担者，蛋白质翻译后修饰可调控多种生命活动，其失调可造成癌症等多种疾病。其中，蛋白尿嘧啶单核苷酸化修饰(UMP化，UMPylation)于1975年首次在大肠杆菌中鉴定到，但UMP化修饰的底物蛋白仅限于谷氨酸合成酶体系，导致UMP化修饰一直未收到重视，尽管已发现四十多年，相应的修饰检测方法并未建立。随着蛋白修饰组学技术发展，近年来超过40个UMP化修饰的蛋白被鉴定出来，说明UMP化修饰在细菌生命活动的调控中起到重要的作用。由于缺少富集分离的方法，只有丰度很高的蛋白被鉴定到UMP修饰，保守估计细胞中可发生UMP化修饰的蛋白将是现有的十倍(400个以上)。寻找并鉴定细胞内可发生UMP化修饰的蛋白将为这一新型翻译后修饰研究提供关键基础。因此需要一种能有效解决上述问题的蛋白单磷酸尿苷酸化修饰的检测方法及应用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种蛋白单磷酸尿苷酸化修饰的检测方法及本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蛋白单磷酸尿苷酸化修饰的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/nA将YdiU蛋白及底物加入到反应体系后，混匀后加入Biotin-16-UTP 1μl，30-40℃反应1小时；/nB反应样品加入上样缓冲液后，使用12％的SDS-PAGE凝胶电泳，电泳后样品通过转膜到硝酸纤维素膜上后使用对染色剂全蛋白进行染色；/nC将含有样品的所述醋酸纤维素膜加入稀释后的辣根过氧化酶-亲和素抗体室温孵育30-60分钟；/nD洗膜并封闭5min-10min后即可使用ECL显色液显影。显影出的即为被单磷酸尿苷酸化修饰的蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.一种蛋白单磷酸尿苷酸化修饰的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
A将YdiU蛋白及底物加入到反应体系后，混匀后加入Biotin-16-UTP1μl，30-40℃反应1小时；
B反应样品加入上样缓冲液后，使用12％的SDS-PAGE凝胶电泳，电泳后样品通过转膜到硝酸纤维素膜上后使用对染色剂全蛋白进行染色；
C将含有样品的所述醋酸纤维素膜加入稀释后的辣根过氧化酶-亲和素抗体室温孵育30-60分钟；
D洗膜并封闭5min-10min后即可使用ECL显色液显影。显影出的即为被单磷酸尿苷酸化修饰的蛋白。


2.根据权利要求1所述的一种蛋白单磷酸尿苷酸化修饰的检测方法，其特征在于，所述底物采用GroEL191aa-376aa蛋白作为阳性对照。


3.根据权利要求1所述的一种蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：李冰清，杨银龙，岳盈盈，宋楠楠，李翠玲，
申请(专利权)人：山东省医学科学院基础医学研究所，
类型：发明
国别省市：山东;37