一种基于比色原理检测磷脂酶A2的方法及其应用技术

本发明专利技术中公开了一种基于比色原理检测磷脂酶A2的方法及其应用。该方法可以基于石墨烯量子点具有类天然酶催化活性，在过氧化氢存在的酸性条件下能够有效催化底物TMB氧化，伴随着溶液颜色由无色转化为蓝色。本发明专利技术在过氧化氢和TMB共同存在的酸性条件下，根据准样品溶液的吸光值及其浓度关系绘制标准曲线，进而计算得出未知样品溶液中磷脂酶A2的浓度；或在智能手机检测系统的基础上，通过图像采集和颜色分析，通过计算标准样品溶液在RGB颜色模型中B分量颜色平均值，得到磷脂酶A2线性浓度和颜色分量平均值之间的线性关系；进而计算得出未知样品溶液中磷脂酶A2的浓度，从而实现磷脂酶A2的灵敏、准确、便捷和可视化的检测。

【技术实现步骤摘要】
一种基于比色原理检测磷脂酶A2的方法及其应用
本专利技术属于医疗检测领域，特别涉及一种基于比色原理检测磷脂酶A2的方法及其应用。
技术介绍
磷脂酶A2是广泛分布于人体的磷脂酶家族成员之一，其能够特异性作用于磷脂分子的sn-2酯键，水解磷脂形成游离态的脂肪酸和溶血磷脂分子，这些产物在磷脂更新和细胞信息传递等生理过程中发挥重要作用。因此，磷脂酶A2的活性水平在机体炎症和组织损伤时对于信息传递和膜通道活化等病理过程中起关键性作用。例如，研究表明磷脂酶A2在急性胰腺炎发生时会出现过早激活和过度释放，并直接参与急性胰腺炎的发病过程。磷脂酶A2的检测已成为包括急性胰腺炎在内的炎症相关疾病诊断中一项重要的检测指标。测定磷脂酶A2活性的常用方法包括光学法、电化学法、免疫法和色谱质谱联用方法等。尽管已运用于实际应用中，这些方法依存在检测成本高、步骤繁琐且周期长、特异性低或依赖专业仪器设备等不足。比色法(colorimetry)是通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法，以生成有色化合物的显色反应为基础。其所需仪器简单，操作简便，是广泛应用于分析本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于比色原理检测磷脂酶A2的方法，其特征在于，为通过如下任一种方法实现：/n(A)基于显色法检测磷脂酶A2：/nS1、配制至少五个浓度的磷脂酶A2水溶液，然后分别加入包覆石墨烯量子点的脂质体混合后水浴反应，再加入3,3’,5,5’-四甲基联苯胺、H

【技术特征摘要】
1.一种基于比色原理检测磷脂酶A2的方法，其特征在于，为通过如下任一种方法实现：
(A)基于显色法检测磷脂酶A2：
S1、配制至少五个浓度的磷脂酶A2水溶液，然后分别加入包覆石墨烯量子点的脂质体混合后水浴反应，再加入3,3’,5,5’-四甲基联苯胺、H2O2和酸性溶液继续反应，待反应结束后测量紫外吸收光谱，得到吸光值；
S2、根据步骤S1测量得到的吸光值与磷脂酶A2水溶液的浓度绘制标准曲线；
S3、将待测样品与包覆石墨烯量子点的脂质体混合后水浴反应，然后加入3,3’,5,5’-四甲基联苯胺、H2O2和酸性溶液继续反应，待反应结束后测量紫外吸收光谱，得待测样品的吸光值；再根据步骤S2绘制的标准曲线获得待测样品中磷脂酶A2的浓度和/或含量；
(B)基于智能手机检测系统检测磷脂酶A2：
所述的基于智能手机检测系统包括依次连接的图像采集模块，图像预处理模块，颜色分析模块和检测结果显示模块；
所述的图像采集模块包括手机自带摄像头、比色皿和黑匣子，用于获取标准溶液和待测溶液的颜色图像；
所述的图像预处理模块为将获取的标准溶液和待测溶液的颜色图像转换为位图格式，以不同的颜色模型分析，用于获得标准溶液和待测溶液的颜色分量平均值；
所述的颜色分析模块为根据标准溶液的颜色分量平均值及其浓度绘制关系曲线；
所述的结果显示模块为待测溶液的颜色分量平均值和绘制的关系曲线，获得待测溶液的浓度和/或含量；
所述的基于智能手机检测系统检测磷脂酶A2，通过如下步骤实现：
S4、配制至少五个浓度的磷脂酶A2水溶液，然后分别加入包覆石墨烯量子点的脂质体混合后水浴反应，再加入3,3’,5,5’-四甲基联苯胺、H2O2和酸性溶液继续反应，待反应结束后用智能手机检测系统中的图像采集模块获取反应后的溶液的颜色图像；
S5、将步骤S4中获取颜色图像通过智能手机检测系统中的图像预处理模块，分别获取其颜色分量平均值；
S6、根据步骤S5中获取的颜色分量平均值和磷脂酶A2水溶液的浓度，通过智能手机检测系统中的颜色分析模块获得关系曲线；
S7、将包覆石墨烯量子点的脂质体加入到待测样品中，混合后水浴反应，再加入3,3’,5,5’-四甲基联苯胺、H2O2和酸性溶液继续反应，待反应结束后通过智能手机检测系统中图像采集模块和图像预处理模块测定待测溶液的颜色分量平均值，然后根据步骤S6中的关系曲线，计算得到待测溶液中磷脂酶A2的浓度和/或含量。


2.根据权利要求1所述的基于比色原理检测磷脂酶A2的方法，其特征在于，步骤S1、S3、S4和S7中所述的包覆石墨烯量子点的脂质体通过如下方法制备得到：
(1)将卵磷脂与胆固醇加入到氯仿中，超声使其分散均匀，然后旋蒸除去氯仿，得到脂质体薄膜；
(2)将石墨烯量子点溶液加入到脂质体薄膜中，冰浴超声分散均匀，得到混合溶液I；然后将混合溶液I通过聚碳酸酯膜反复挤压，得到混合溶液II；再将混合溶液II进行透析，得到包封石墨烯量子点的纳米脂质体；
步骤(1)中所述的卵磷脂与胆固醇的摩尔比为1～5：1；
步骤(2)中所述的石墨烯量子点与所述卵磷脂和胆固醇的总质量比为0.02～0.4:30；
步骤(2)中所述的石墨烯量子点溶液为石墨烯量子点水溶液，或将石墨烯量子点溶于磷酸缓冲溶液得到的溶液；
所述的石墨烯量子点溶液的浓度为0.01～0.2mg/mL。


3.根据权利要求2所述的基于比色原理检测磷脂酶A2的方法，其特征在于：
步骤(2)中所述的石墨烯量子点通过如下方法制备得到：
(i)将碳黑加入到浓硝酸溶液中，于130℃条件下搅拌回流反应，待反应结束后冷却至室温，吸取上清液，加热除酸至pH为5～7，得到溶液A；
(ii)将溶液A过滤，取滤液；然后将滤液进行离心，取上清液；再将上清液加入到超滤离心管中，离心，取清液；最后将清液进行透析，待透析结束后，冷冻干燥，得到石墨烯量子点；
步骤(i)中所述的碳黑为carbotvulcanXC-72碳黑；
步骤(i)中所述的浓硝酸溶液的浓度5～8mol/L；
步骤(i)中所述的回流反应为在油浴下进行回流反应；
步骤(i)中所述的回流反应的时间为24小时；
步骤(ii)中所述的过滤为依次用滤纸和针式过滤器进行过滤；<...

【专利技术属性】
技术研发人员：李楠，査勇超，周锐，牟宗霞，薛巍，周平，崔鑫，朱桦，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东;44