【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】与寡核苷酸相关联的颗粒相关申请的交叉引用本申请根据35U.S.C.§119(e)要求于2017年12月19日提交的美国临时专利号62/607,812的优先权，其内容通过引用以其全文并入本文。序列表的引用本申请是连同电子格式的序列表一起提交的。序列表被提供为题为Sequence_Listing_BDCRI_030WO.txt的文件，创建于2018年12月18日，大小是2.1千字节。将电子格式的序列表的信息通过引用以其全文并入本文。专利技术背景
本公开总体上涉及靶的分子条形码化的领域，并更具体地涉及靶捕获。
技术介绍
诸如使用与核酸条形码偶联的珠的条形码化的方法和技术对于细胞分析有用，特别是使用例如逆转录、聚合酶链式反应(PCR)扩增、和下一代测序(NGS)以解密基因表达谱来确定细胞的状态。然而，可以改善这些方法和技术的敏感性。
技术实现思路
本文的披露内容包括合成颗粒的实施例。在一些实施例中，所述合成颗粒包含：第一多个寡核苷酸条形码；和第二多个寡核苷酸条形码，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和所述第二多个寡核苷酸条形码中的每个包含相同的细胞标记序列并且包含分子标记序列，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少10个包含不同的分子标记序列，其中所述第一多个寡核苷酸条形码中的每个包含靶结合区，并且其中所述第二多个寡核苷酸条形码中的每个包含靶特异性靶结合区。在一些实施例中，所述第一多个寡核苷酸条形码的寡核苷酸条形码的靶结合区包...
【技术保护点】
1.一种合成颗粒，其包含：/n第一多个寡核苷酸条形码；以及/n第二多个寡核苷酸条形码，/n其中所述第一多个寡核苷酸条形码和所述第二多个寡核苷酸条形码中的每个包含相同的细胞标记序列和分子标记序列，/n其中所述第一多个寡核苷酸条形码和所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少10个包含不同的分子标记序列，/n其中所述第一多个寡核苷酸条形码中的每个包含靶结合区，并且/n其中所述第二多个寡核苷酸条形码中的每个包含靶特异性靶结合区。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171219 US 62/607,8121.一种合成颗粒，其包含：
第一多个寡核苷酸条形码；以及
第二多个寡核苷酸条形码，
其中所述第一多个寡核苷酸条形码和所述第二多个寡核苷酸条形码中的每个包含相同的细胞标记序列和分子标记序列，
其中所述第一多个寡核苷酸条形码和所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少10个包含不同的分子标记序列，
其中所述第一多个寡核苷酸条形码中的每个包含靶结合区，并且
其中所述第二多个寡核苷酸条形码中的每个包含靶特异性靶结合区。
2.如权利要求1所述的合成颗粒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码的寡核苷酸条形码的靶结合区包含靶特异性靶结合区。
3.如权利要求1所述的合成颗粒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码的寡核苷酸条形码的靶结合区包含聚(dT)区。
4.如权利要求1-3中任一项所述的合成颗粒，其中所述第二多个寡核苷酸条形码的寡核苷酸条形码包含聚(dT)区。
5.如权利要求1-4中任一项所述的合成颗粒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和所述第二多个寡核苷酸条形码的比率是在从1:10至10:1的范围内。
6.如权利要求1-5中任一项所述的合成颗粒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的每个包含样品标记序列。
7.如权利要求1-6中任一项所述的合成颗粒，其中所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少一个比所述第一多个寡核苷酸条形码中的至少一个更短。
8.如权利要求1-7中任一项所述的合成颗粒，其中所述靶结合区和所述靶特异性靶结合区具有至多50％序列同一性。
9.如权利要求1-8中任一项所述的合成颗粒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少两个具有不同长度。
10.如权利要求1-9中任一项所述的合成颗粒，其中所述第二多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中至少两个的序列是相同的。
11.如权利要求1-10中任一项所述的合成颗粒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少两个包含相同的序列。
12.如权利要求1-11中任一项所述的合成颗粒，其包含第一多个间隔子寡核苷酸，其中所述第一多个间隔子寡核苷酸中的每个不包含所述靶结合区和所述靶特异性靶结合区。
13.如权利要求12所述的合成颗粒，其中所述合成颗粒包含第二多个间隔子寡核苷酸，其中所述第二多个间隔子寡核苷酸中的每个不包含所述靶结合区和所述靶特异性靶结合区。
14.如权利要求1-13中任一项所述的合成颗粒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码中的至少一个比所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少一个更短。
15.如权利要求1-14中任一项所述的合成颗粒，其中所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少一个比所述第一多个寡核苷酸条形码中的至少一个更短。
16.如权利要求1-15中任一项所述的合成颗粒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少两个具有不同长度。
17.如权利要求1-16中任一项所述的合成颗粒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少两个的序列是相同的。
18.如权利要求1-17中任一项所述的合成颗粒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少两个包含相同的序列。
19.如权利要求1-18中任一项所述的合成颗粒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少100个包含不同的分子标记序列。
20.如权利要求1-19中任一项所述的合成颗粒，其中所述靶结合区包含靶特异性序列、寡聚(dT)序列、随机多聚体、或其任何组合。
21.如权利要求1-20中任一项所述的合成颗粒，其中所述第二多个寡核苷酸条形码中的两个寡核苷酸条形码的两个靶特异性靶结合区包含不同的靶特异性序列。
22.如权利要求1-21中任一项所述的合成颗粒，其中每个细胞标记序列包含至少6个核苷酸。
23.如权利要求1-22中任一项所述的合成颗粒，其中每个分子标记序列包含至少6个核苷酸。
24.如权利要求1-23中任一项所述的合成颗粒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的每个包含空间标记序列，并且其中所述空间标记序列彼此差异至少一个核苷酸。
25.如权利要求1-24中任一项所述的合成颗粒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的每个包含通用序列，其中所述通用序列是相同的。
26.如权利要求1-25中任一项所述的合成颗粒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少一个固定在所述合成颗粒上。
27.如权利要求1-25中任一项所述的合成颗粒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少一个部分固定在所述合成颗粒上。
28.如权利要求1-25中任一项所述的合成颗粒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少一个包封在所述合成颗粒中。
29.如权利要求1-25中任一项所述的合成颗粒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少一个部分包封在所述合成颗粒中。
30.如权利要求1-29中任一项所述的合成颗粒，其中所述合成颗粒是可破坏的。
31.如权利要求1-30中任一项所述的合成颗粒，其中所述合成颗粒包含珠。
32.如权利要求31所述的合成颗粒，其中所述珠包含磁珠。
33.如权利要求1-32中任一项所述的合成颗粒，其中所述合成颗粒包含可破坏的水凝胶颗粒。
34.如权利要求1-33中任一项所述的合成颗粒，
其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的每个包含接头官能团，
其中所述合成颗粒包含固体支持物官能团，并且
其中所述支持物官能团和所述接头官能团彼此相关联。
35.如权利要求34所述的合成颗粒，其中所述接头官能团和所述支持物官能团单独地选自下组，该组由以下各项组成：C6、生物素、链霉亲和素、一个或多个伯胺、一个或多个醛、一个或多个酮、及其任何组合。
36.一种试剂盒，其包含：
多个合成颗粒，其中每个合成颗粒包含：
第一多个寡核苷酸条形码；以及
第二多个寡核苷酸条形码，
其中所述第一多个寡核苷酸条形码和所述第二多个寡核苷酸条形码中的每个包含相同的细胞标记序列和分子标记序列，
其中所述第一多个寡核苷酸条形码和所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少10个包含不同的分子标记序列，
其中所述第一多个寡核苷酸条形码中的每个包含靶结合区，并且
其中所述第二多个寡核苷酸条形码中的每个包含靶特异性靶结合区；以及
用于使用所述多个合成颗粒的说明书。
37.如权利要求36所述的试剂盒，其中所述多个合成颗粒包含至少94个合成颗粒。
38.如权利要求36-37中任一项所述的试剂盒，其包含多个分区，每个分区包含所述多个合成颗粒中的合成颗粒。
39.如权利要求38所述的试剂盒，其中所述多个分区包含微孔阵列的微孔。
40.如权利要求38所述的试剂盒，其中所述多个分区包含多个液滴。
41.如权利要求36-40中任一项所述的试剂盒，其包含缓冲液。
42.如权利要求36-41中任一项所述的试剂盒，其包含盒。
43.如权利要求36-42中任一项所述的试剂盒，其包含用于逆转录反应的一种或多种试剂。
44.如权利要求36-43中任一项所述的试剂盒，其包含用于扩增反应的一种或多种试剂。
45.如权利要求36-44中任一项所述的试剂盒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码的寡核苷酸条形码的靶结合区包含靶特异性靶结合区。
46.如权利要求36-44所述的试剂盒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码的寡核苷酸条形码的靶结合区包含聚(dT)区。
47.如权利要求36-46中任一项所述的试剂盒，其中所述第二多个寡核苷酸条形码的寡核苷酸条形码包含聚(dT)区。
48.如权利要求36-47中任一项所述的试剂盒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和所述第二多个寡核苷酸条形码的比率是在从1:10至10:1的范围内。
49.如权利要求36-48中任一项所述的试剂盒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的每个包含样品标记序列。
50.如权利要求36-49中任一项所述的试剂盒，其中所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少一个比所述第一多个寡核苷酸条形码中的至少一个更短。
51.如权利要求36-50中任一项所述的试剂盒，其中所述靶结合区和所述序列特异性靶结合区具有至多50％序列同一性。
52.如权利要求36-51中任一项所述的试剂盒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少两个具有不同长度。
53.如权利要求36-52中任一项所述的试剂盒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少两个的序列是相同的。
54.如权利要求36-53中任一项所述的试剂盒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少两个包含相同的序列。
55.如权利要求36-54中任一项所述的试剂盒，其中每个合成颗粒包含第一多个间隔子寡核苷酸，其中所述第一多个间隔子寡核苷酸中的每个不包含靶所述结合区和所述靶特异性靶结合区。
56.如权利要求55所述的试剂盒，其中每个合成颗粒包含第二多个间隔子寡核苷酸，其中所述第二多个间隔子寡核苷酸中的每个不包含所述靶结合区和所述靶特异性靶结合区。
57.如权利要求36-56中任一项所述的试剂盒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码中的至少一个比所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少一个更短。
58.如权利要求36-57中任一项所述的试剂盒，其中所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少一个比所述第一多个寡核苷酸条形码中的至少一个更短。
59.如权利要求36-58中任一项所述的试剂盒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少两个具有不同长度。
60.如权利要求36-59中任一项所述的试剂盒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少两个的序列是相同的。
61.如权利要求36-60中任一项所述的试剂盒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少两个包含相同的序列。
62.如权利要求36-61中任一项所述的试剂盒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少100个包含不同的分子标记序列。
63.如权利要求36-62中任一项所述的试剂盒，其中所述靶结合区包含靶特异性序列、寡聚(dT)序列、随机多聚体、或其任何组合。
64.如权利要求36-63中任一项所述的试剂盒，其中所述第二多个寡核苷酸条形码中的两个寡核苷酸条形码的两个靶特异性靶结合区包含不同的靶特异性序列。
65.如权利要求36-64中任一项所述的试剂盒，其中每个细胞标记序列包含至少6个核苷酸。
66.如权利要求36-65中任一项所述的试剂盒，其中每个分子标记序列包含至少6个核苷酸。
67.如权利要求36-66中任一项所述的试剂盒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的每个包含空间标记序列，并且其中空间标记序列彼此差异至少一个核苷酸。
68.如权利要求36-67中任一项所述的试剂盒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的每个包含通用序列，其中通用序列是相同的。
69.如权利要求36-68中任一项所述的试剂盒，其中所述多个合成颗粒寡核苷酸中的至少一个固定在所述合成颗粒上。
70.如权利要求36-68中任一项所述的试剂盒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码中的至少一个部分固定在所述合成颗粒上。
71.如权利要求36-68中任一项所述的试剂盒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码中的至少一个包封在所述合成颗粒中。
72.如权利要求36-68中任一项所述的试剂盒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码中的至少一个部分包封在所述合成颗粒中。
73.如权利要求36-72中任一项所述的试剂盒，其中所述合成颗粒是可破坏的。
74.如权利要求36-73中任一项所述的试剂盒，其中所述合成颗粒包含珠。
75.如权利要求74所述的试剂盒，其中所述珠包含磁珠。
76.如权利要求36-75中任一项所述的试剂盒，其中所述合成颗粒包含可破坏的水凝胶颗粒。
77.如权利要求36-76中任一项所述的试剂盒
其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的每个包含接头官能团，
其中所述合成颗粒包含固体支持物官能团，并且
其中所述支持物官能团和所述接头官能团彼此相关联。
78.如权利要求77所述的试剂盒，其中所述接头官能团和所述支持物官能团单独地选自下组，该组由以下各项组成：C6、生物素、链霉亲和素、一个或多个伯胺、一个或多个醛、一个或多个酮、及其任何组合。
79.一种用于确定样品中靶的数量的方法，所述方法包括：
使用与合成颗粒相关联的第一多个寡核苷酸条形码，对第一多个靶的拷贝进行条形码化，以产生第一多个经条形码化的靶的拷贝；
使用与合成颗粒相关联的第二多个寡核苷酸条形码，对样品中第二多个靶的拷贝进行条形码化，以产生第二多个经条形码化的靶的拷贝，
其中所述第一多个寡核苷酸条形码和所述第二多个寡核苷酸条形码中的每个包含相同的细胞标记序列和分子标记序列，
其中所述第一多个寡核苷酸条形码和所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少10个包含不同的分子标记序列，
其中所述第一多个寡核苷酸条形码中的每个包含靶结合区，并且
其中所述第二多个寡核苷酸条形码中的每个包含靶特异性靶结合区，
使用所述第一多个寡核苷酸条形码和所述第二多个寡核苷酸条形码的分子标记序列评估所述第一多个靶和所述第二多个靶中的每个的数量。
80.如权利要求79所述的方法，其中所述第一多个寡核苷酸条形码的寡核苷酸条形码的靶结合区包含靶特异性靶结合区。
81.如权利要求79所述的合成颗粒，其中所述第一多个寡核苷酸条形码的寡核苷酸条形码的靶结合区包含聚(dT)区。
82.如权利要求79-81中任一项所述的合成颗粒，其中所述第二多个寡核苷酸条形码的寡核苷酸条形码包含聚(dT)区。
83.如权利要求79-82中任一项所述的方法，其中所述第一多个靶包含细胞的mRNA分子，并且其中所述第二多个靶包含所述细胞的DNA分子。
84.如权利要求79-82中任一项所述的方法，其中所述第一多个靶包含细胞的mRNA分子，并且其中所述第二多个靶包含感染所述细胞的病毒、细菌和/或真菌的RNA分子。
85.如权利要求79-84中任一项所述的方法，其中使用与所述合成颗粒相关联的所述第一多个寡核苷酸条形码对所述样品中所述第一多个靶的拷贝进行条形码化包括：将所述第一多个靶与所述合成颗粒上的所述第一多个寡核苷酸条形码杂交，其中使用与所述合成颗粒相关联的所述第二多个寡核苷酸条形码对所述样品中所述第二多个靶的拷贝进行条形码化包括：将所述第二多个靶与所述合成颗粒上的所述第二多个寡核苷酸条形码杂交。
86.如权利要求83-84中任一项所述的方法，其中对所述第一多个靶的拷贝进行条形码化包括：逆转录所述第一多个靶以产生所述第一多个靶的经条形码化的cDNA，并且其中对所述第二多个靶的拷贝进行条形码化包括：逆转录所述第二多个靶以产生所述第二多个靶的经条形码化的cDNA。
87.如权利要求86所述的方法，所述方法包括：使用第二链合成，扩增所述第一多个靶的经条形码化的cDNA和/或扩增所述第二多个靶的经条形码化的cDNA，以分别产生第一经双链化的经条形码化的靶和第二经双链化的经条形码化的靶。
88.如权利要求87所述的方法，所述方法包括：扩增所述第一经双链化的经条形码化的靶和所述第二经双链化的经条形码化的靶，以分别产生第一经标记的靶扩增子和第二经标记的靶扩增子。
89.一种用于捕获样品中靶的方法，所述方法包括：
使用与合成颗粒相关联的第一多个寡核苷酸条形码，对第一多个靶的拷贝进行杂交，以产生第一多个经条形码化的靶的拷贝；
使用与合成颗粒相关联的第二多个寡核苷酸条形码，对第二多个靶的拷贝进行杂交，以产生第二多个经条形码化的靶的拷贝，
其中所述第一多个寡核苷酸条形码和所述第二多个寡核苷酸条形码中的每个包含相同的细胞标记序列和分子标记序列，
其中所述第一多个寡核苷酸条形码和所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少10个包含不同的分子标记序列，
其中所述第一多个寡核苷酸条形码中的每个包含靶结合区，并且
其中所述第二多个寡核苷酸条形码中的每个包含靶特异性靶结合区。
90.如权利要求89所述的方法，其中所述第二多个经条形码化的靶的拷贝包含所述第二多个靶中靶的至少50％的拷贝。
91.如权利要求89所述的方法，其中所述第二多个经条形码化的靶的拷贝包含所述第二多个靶中靶的至少75％的拷贝。
92.如权利要求89所述的方法，其中所述第二多个经条形码化的靶的拷贝包含所述第二多个靶中靶的至少95％的拷贝。
93.如权利要求89所述的方法，其中所述第二多个经条形码化的靶的拷贝包含所述第二多个靶中各个靶的至少50％的拷贝。
94.如权利要求89所述的方法，其中所述第二多个经条形码化的靶的拷贝包含所述多个靶中各个靶的至少75％的拷贝。
95.如权利要求89所述的方法，其中所述第二多个经条形码化的靶的拷贝包含所述第二多个靶中各个靶的至少95％的拷贝。
96.如权利要求89-95中任一项所述的方法，其中所述第一多个靶和所述第二多个靶包含mRNA，所述方法包括：
逆转录所述第一多个靶，以产生所述第一多个靶的第一经条形码化的cDNA；并且
逆转录所述第二多个靶，以产生所述第二多个靶的第二经条形码化的cDNA。
97.如权利要求96所述的方法，所述方法包括：使用第二链合成，扩增所述第一条形码化的cDNA和所述第二经条形码化的cDNA，以分别产生第一经条形码化的双链靶和第二经条形码化的双链靶。
98.如权利要求97所述的方法，所述方法包括：扩增所述第一经条形码化的靶和所述第二经条形码化的靶，以分别产生第一经标记的靶扩增子和第二经标记的靶扩增子。
99.如权利要求79-98中任一项所述的方法，其中所述第一多个靶和所述第二多个靶来自单个细胞，所述方法包括将所述合成颗粒与所述单个细胞相关联。
100.如权利要求99所述的方法，其中所述单个细胞包括稀有细胞、肿瘤细胞、来自人的细胞、来自组织的细胞、来自肿瘤的细胞、被病毒多核苷酸感染的细胞、或其任何组合。
101.如权利要求99-100中任一项所述的方法，所述方法包括：在将所述合成颗粒与所述单个细胞相关联之后，裂解所述单个细胞。
102.如权利要求101所述的方法，其中裂解所述单个细胞包括将所述样品加热、使所述样品与洗涤剂接触、改变所述样品的pH、或其任何组合。
103.如权利要求99-102中任一项所述的方法，其中所述合成颗粒和所述单个细胞在相同的孔中。
104.如权利要求99-102中任一项所述的方法，其中所述合成颗粒和所述单个细胞在相同的液滴中。
105.如权利要求79-104中任一项所述的方法，其中所述第一多个靶和/或所述第二多个靶包含核糖核酸(RNA)、信使RNA(mRNA)、微小RNA、小干扰RNA(siRNA)、RNA降解产物、各自含有聚(A)尾的RNA、不含有任何聚(A)尾的RNA、病毒RNA、及其任何组合。
106.如权利要求79-105中任一项所述的方法，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和所述第二多个寡核苷酸条形码的比率是在从1:10至10:1的范围内。
107.如权利要求79-106中任一项所述的方法，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的每个包含样品标记序列。
108.如权利要求79-107中任一项所述的方法，其中所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少一个比所述第一多个寡核苷酸条形码中的至少一个更短。
109.如权利要求79-108中任一项所述的方法，其中所述靶结合区和所述靶特异性靶结合区具有至多50％序列同一性。
110.如权利要求79-109中任一项所述的方法，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少两个具有不同长度。
111.如权利要求79-110中任一项所述的方法，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少两个的序列是相同的。
112.如权利要求79-111中任一项所述的方法，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少两个包含相同的序列。
113.如权利要求79-112中任一项所述的方法，其中所述合成颗粒包含第一多个间隔子寡核苷酸，其中所述第一多个间隔子寡核苷酸中的每个不包含所述靶结合区和所述靶特异性靶结合区。
114.如权利要求113所述的方法，所述合成颗粒包含第二多个间隔子寡核苷酸，其中所述第二多个间隔子寡核苷酸中的每个不包含所述靶结合区和所述靶特异性靶结合区。
115.如权利要求79-114中任一项所述的方法，其中所述第一多个寡核苷酸条形码中的至少一个比所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少一个更短。
116.如权利要求79-115中任一项所述的方法，其中所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少一个比所述第一多个寡核苷酸条形码中的至少一个更短。
117.如权利要求79-116中任一项所述的方法，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少两个具有不同长度。
118.如权利要求79-117中任一项所述的方法，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少两个的序列是相同的。
119.如权利要求79-118中任一项所述的方法，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少两个包含相同的序列。
120.如权利要求79-119中任一项所述的方法，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少100个包含不同的分子标记序列。
121.如权利要求79-120中任一项所述的方法，其中所述靶结合区包含靶特异性序列、寡聚(dT)序列、随机多聚体、或其任何组合。
122.如权利要求79-121中任一项所述的方法，其中所述第二多个寡核苷酸条形码中的两个寡核苷酸条形码的两个靶结合区包含靶特异性序列。
123.如权利要求79-122中任一项所述的方法，其中每个细胞标记序列包含至少6个核苷酸。
124.如权利要求79-123中任一项所述的方法，其中每个分子标记序列包含至少6个核苷酸。
125.如权利要求79-124中任一项所述的方法，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的每个包含空间标记序列，并且其中空间标记序列彼此差异至少一个核苷酸。
126.如权利要求79-125中任一项所述的方法，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的每个包含通用序列，其中通用序列是相同的。
127.如权利要求79-125中任一项所述的方法，其中所述第一多个寡核苷酸条形码和/或所述第二多个寡核苷酸条形码中的至少一个固定在所述合成颗粒上。
128.如权利要求79-125中任一项所述的方法，其中所述第一多个寡核苷酸条形码中的至少一个部分固定在所述合成颗粒上。
129.如权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：格雷琴·因博恩·拉姆，艾琳·夏姆，
申请(专利权)人：贝克顿迪金森公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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