用于溶酶体障碍的基因疗法制造技术

本公开在某些方面涉及用于治疗与异常的溶酶体功能相关的疾病例如帕金森氏病(PD)和高雪氏病的组合物和方法。在某些实施方式中，本公开提供了表达构建物，其包含单独的或与一种或多种PD相关基因相组合的编码β‑葡糖脑苷脂酶(GBA)或其部分的转入基因。在某些实施方式中，本公开提供了通过将这些表达构建物给药到需要的对象来治疗帕金森氏病的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于溶酶体障碍的基因疗法相关申请本申请要求2017年10月3日提交的题为“用于溶酶体障碍的基因疗法”(GENETHERAPIESFORLYSOSOMALDISORDERS)的美国临时申请系列号62/567,296、2017年10月3日提交的题为“用于溶酶体障碍的基因疗法”(GENETHERAPIESFORLYSOSOMALDISORDERS)的62/567,311、2017年10月3日提交的题为“用于溶酶体障碍的基因疗法”(GENETHERAPIESFORLYSOSOMALDISORDERS)的62/567,319、2018年10月3日提交的题为“用于溶酶体障碍的基因疗法”(GENETHERAPIESFORLYSOSOMALDISORDERS)的62/567,301和2017年10月3日提交的题为“用于溶酶体障碍的基因疗法”(GENETHERAPIESFORLYSOSOMALDISORDERS)的62/567,310在35U.S.C.119(e)下的利益，每个申请的全部内容通过引用并入本文。
技术介绍
高雪氏病是由于溶酶体酸性β-葡糖脑苷脂酶(Gcase，“GBA”)缺陷而引起的糖鞘脂代谢的罕见先天性错误。患者遭受非CNS症状和发现，包括肝脾肿大、导致全血细胞减少症的骨髓机能不全、肺部障碍和纤维化以及骨骼缺损。另外，大量患者遭受神经表现，包括有缺陷的扫视性眼球运动和凝视、痫性发作、认知缺陷、发育迟缓以及包括帕金森氏病在内的运动障碍。存在几种针对外周疾病以及造血骨髓和内脏的主要临床表现的疗法，包括如下所述的酶替代疗法，与缺陷型Gcase结合并提高稳定性的伴侣蛋白样小分子药物，以及阻断在高雪氏病中积累、导致症状和发现的底物的生产的底物降低疗法。然而，高雪氏病的其他方面(特别是影响骨骼和脑的方面)似乎难以治疗。
技术实现思路
除了高雪氏病患者(其在GBA1基因的两个染色体等位基因中具有突变)之外，在GBA1的仅仅一个等位基因中具有突变的患者也具有高度增加的帕金森氏病(PD)风险。包括步态困难、静息时震颤、僵硬以及经常抑郁、睡眠困难和认知能力下降在内的PD症状的严重性与酶活性降低的程度有关。因此，高雪氏病患者具有最严重的病程，而在GBA1中具有单个轻度突变的患者通常具有更为良性的病程。突变携带者也具有其他PD相关障碍(包括特征为执行功能障碍、精神病和PD样运动障碍的路易体痴呆症，以及伴有特征性运动和认知障碍的多系统萎缩症)的高风险。不存在改变这些障碍的不可阻挡的病程的疗法。酶例如Gcase(例如GBA1基因的基因产物)的缺陷以及与溶酶体功能或大分子向溶酶体的转运有关的许多基因(例如溶酶体膜蛋白1(LIMP)，也被称为SCARB2)中的常见变体，与PD风险提高相关。本公开部分是基于编码一种或多种PD相关基因例如Gcase、GBA2、鞘脂激活蛋白原(prosaposin)、颗粒蛋白前体(progranulin)、LIMP2、GALC、CTSB、SMPD1、GCH1、RAB7、VPS35、IL-34、TREM2、TMEM106B或任何上述基因(或其部分)的组合的表达构建物(例如载体)。在某些实施方式中，当在对象中表达时，本文中描述的基因产物的组合一起发挥作用(例如协同作用)，以减轻PD的一种或多种征兆和症状。因此，在某些情况下，本公开提供了一种分离的核酸，其包含编码Gcase(例如GBA1基因的基因产物)的表达构建物。在某些实施方式中，所述分离的核酸包含已被密码子优化(例如为了在哺乳动物细胞例如人类细胞中表达而被密码子优化)的Gcase编码序列。在某些实施方式中，所述编码Gcase的核酸序列编码包含SEQIDNO：14中阐述的(例如在NCBI参考序列NP_000148.2中阐述的)氨基酸序列的蛋白质。在某些实施方式中，所述分离的核酸包含SEQIDNO：15中阐述的序列。在某些实施方式中，所述表达构建物包含腺相关病毒(AAV)反向末端重复序列(ITR)，例如在所述编码Gcase蛋白的核酸序列两侧的AAVITR。在某些情况下，本公开提供了一种分离的核酸，其包含编码鞘脂激活蛋白原(例如PSAP基因的基因产物)的表达构建物。在某些实施方式中，所述分离的核酸包含已被密码子优化(例如为了在哺乳动物细胞例如人类细胞中表达而被密码子优化)的鞘脂激活蛋白原编码序列。在某些实施方式中，所述编码鞘脂激活蛋白原的核酸序列编码包含SEQIDNO：16中阐述的(例如在NCBI参考序列NP_002769.1中阐述的)氨基酸序列的蛋白质。在某些实施方式中，所述分离的核酸包含SEQIDNO：17中阐述的序列。在某些实施方式中，所述表达构建物包含腺相关病毒(AAV)反向末端重复序列(ITR)，例如在所述编码鞘脂激活蛋白原蛋白的核酸序列两侧的AAVITR。在某些情况下，本公开提供了一种分离的核酸，其包含编码LIMP2/SCARB2(例如SCARB2基因的基因产物)的表达构建物。在某些实施方式中，所述分离的核酸包含已被密码子优化(例如为了在哺乳动物细胞例如人类细胞中表达而被密码子优化)的SCARB2编码序列。在某些实施方式中，所述编码LIMP2/SCARB2的核酸序列编码包含SEQIDNO：18中阐述的(例如在NCBI参考序列NP_005497.1中阐述的)氨基酸序列的蛋白质。在某些实施方式中，所述分离的核酸包含SEQIDNO：29中阐述的序列。在某些实施方式中，所述表达构建物包含腺相关病毒(AAV)反向末端重复序列(ITR)，例如在所述编码SCARB2蛋白的核酸序列两侧的AAVITR。在某些情况下，本公开提供了一种分离的核酸，其包含编码GBA2蛋白(例如GBA2基因的基因产物)的表达构建物。在某些实施方式中，所述分离的核酸包含已被密码子优化(例如为了在哺乳动物细胞例如人类细胞中表达而被密码子优化)的GBA2编码序列。在某些实施方式中，所述编码GBA2的核酸序列编码包含SEQIDNO：30中阐述的(例如在NCBI参考序列NP_065995.1中阐述的)氨基酸序列的蛋白质。在某些实施方式中，所述分离的核酸包含SEQIDNO：31中阐述的序列。在某些实施方式中，所述表达构建物包含腺相关病毒(AAV)反向末端重复序列(ITR)，例如在所述编码GBA2蛋白的核酸序列两侧的AAVITR。在某些情况下，本公开提供了一种分离的核酸，其包含编码GALC蛋白(例如GALC基因的基因产物)的表达构建物。在某些实施方式中，所述分离的核酸包含已被密码子优化(例如为了在哺乳动物细胞例如人类细胞中表达而被密码子优化)的GALC编码序列。在某些实施方式中，所述编码GALC的核酸序列编码包含SEQIDNO：33中阐述的(例如在NCBI参考序列NP_000144.2中阐述的)氨基酸序列的蛋白质。在某些实施方式中，所述分离的核酸包含SEQIDNO：34中阐述的序列。在某些实施方式中，所述表达构建物包含腺相关病毒(AAV)反向末端重复序列(ITR)，例如在所述编码GALC蛋白的核酸序列两侧的AAVITR。在某些情况下，本公开提供了一种分离的核酸，其包含编码CTSB蛋白(本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的核酸，其包含两侧带有两个腺相关病毒(AAV)反向末端重复序列(ITR)的编码Gcase蛋白的表达构建物，其中/n(i)所述ITR中的至少一者包含相对于野生型AAV2 ITR(SEQ ID NO：29)修饰的“D”区；和/或/n(ii)所述Gcase蛋白由密码子优化的核酸序列编码。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171003 US 62/567,311;20171003 US 62/567,310;20171.一种分离的核酸，其包含两侧带有两个腺相关病毒(AAV)反向末端重复序列(ITR)的编码Gcase蛋白的表达构建物，其中
(i)所述ITR中的至少一者包含相对于野生型AAV2ITR(SEQIDNO：29)修饰的“D”区；和/或
(ii)所述Gcase蛋白由密码子优化的核酸序列编码。


2.根据权利要求1所述的分离的核酸，其中所述Gcase蛋白包含SEQIDNO：14中阐述的氨基酸序列或其部分。


3.根据权利要求1或2所述的分离的核酸，其中所述Gcase蛋白由密码子优化的核酸序列、任选地由SEQIDNO：15中阐述的核酸序列编码。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的分离的核酸，其中所述修饰的“D”区是相对于所述表达构建物位于所述ITR外侧的“D”序列。


5.根据权利要求1至4中任一项所述的分离的核酸，其中包含修饰的“D”序列的ITR是3’ITR。


6.根据权利要求1至5中任一项所述的分离的核酸，其还包含TRY序列，任选地其中所述TRY序列被阐述在SEQIDNO：28中。


7.一种分离的核酸，其包含两侧带有两个腺相关病毒(AAV)反向末端重复序列(ITR)的编码鞘脂激活蛋白原蛋白的表达构建物，其中
(i)所述ITR中的至少一者包含相对于野生型AAV2ITR(SEQIDNO：29)修饰的“D”区；和/或
(ii)所述鞘脂激活蛋白原蛋白由密码子优化的核酸序列编码。


8.根据权利要求7所述的分离的核酸，其中所述鞘脂激活蛋白原蛋白包含SEQIDNO：16中阐述的氨基酸序列或其部分。


9.根据权利要求7或8所述的分离的核酸，其中所述鞘脂激活蛋白原蛋白由密码子优化的核酸序列、任选地由SEQIDNO：17中阐述的核酸序列编码。


10.根据权利要求7至9中任一项所述的分离的核酸，其中所述修饰的“D”区是相对于所述表达构建物位于所述ITR外侧的“D”序列。


11.根据权利要求7至10中任一项所述的分离的核酸，其中包含修饰的“D”序列的ITR是3’ITR。


12.根据权利要求7至11中任一项所述的分离的核酸，其还包含TRY序列，任选地其中所述TRY序列被阐述在SEQIDNO：28中。


13.一种分离的核酸，其包含两侧带有两个腺相关病毒(AAV)反向末端重复序列(ITR)的编码SCARB2蛋白的表达构建物，其中
(i)所述ITR中的至少一者包含相对于野生型AAV2ITR(SEQIDNO：29)修饰的“D”区；和/或
(ii)所述SCARB2蛋白由密码子优化的核酸序列编码。


14.根据权利要求13所述的分离的核酸，其中所述SCARB2蛋白包含SEQIDNO：18中阐述的氨基酸序列或其部分。


15.根据权利要求13或14所述的分离的核酸，其中所述SCARB2蛋白由密码子优化的核酸序列或SEQIDNO：19中阐述的核酸序列编码。


16.根据权利要求13至15中任一项所述的分离的核酸，其中所述修饰的“D”区是相对于所述表达构建物位于所述ITR外侧的“D”序列。


17.根据权利要求13至16中任一项所述的分离的核酸，其中包含修饰的“D”序列的ITR是3’ITR。


18.根据权利要求13至17中任一项所述的分离的核酸，其还包含TRY序列，任选地其中所述TRY序列被阐述在SEQIDNO：28中。


19.一种分离的核酸，其包含两侧带有两个腺相关病毒(AAV)反向末端重复序列(ITR)的编码GBA2蛋白的表达构建物，其中
(i)所述ITR中的至少一者包含相对于野生型AAV2ITR(SEQIDNO：29)修饰的“D”区；和/或
(ii)所述GBA2蛋白由密码子优化的核酸序列编码。


20.根据权利要求19所述的分离的核酸，其中所述GBA2蛋白包含SEQIDNO：30中阐述的氨基酸序列或其部分。


21.根据权利要求19或20所述的分离的核酸，其中所述GBA2蛋白由密码子优化的核酸序列或SEQIDNO：31中阐述的核酸序列编码。


22.根据权利要求19至21中任一项所述的分离的核酸，其中所述修饰的“D”区是相对于所述表达构建物位于所述ITR外侧的“D”序列。


23.根据权利要求19至22中任一项所述的分离的核酸，其中包含修饰的“D”序列的ITR是3’ITR。


24.根据权利要求19至23中任一项所述的分离的核酸，其还包含TRY序列，任选地其中所述TRY序列被阐述在SEQIDNO：28中。


25.一种分离的核酸，其包含两侧带有两个腺相关病毒(AAV)反向末端重复序列(ITR)的编码GALC蛋白的表达构建物，其中
(i)所述ITR中的至少一者包含相对于野生型AAV2ITR(SEQIDNO：29)修饰的“D”区；和/或
(ii)所述GALC蛋白由密码子优化的核酸序列编码。


26.根据权利要求25所述的分离的核酸，其中所述GALC蛋白包含SEQIDNO：33中阐述的氨基酸序列或其部分。


27.根据权利要求25或26所述的分离的核酸，其中所述GALC蛋白由密码子优化的核酸序列或SEQIDNO：34中阐述的核酸序列编码。


28.根据权利要求25至27中任一项所述的分离的核酸，其中所述修饰的“D”区是相对于所述表达构建物位于所述ITR外侧的“D”序列。


29.根据权利要求25至28中任一项所述的分离的核酸，其中包含修饰的“D”序列的ITR是3’ITR。


30.根据权利要求25至29中任一项所述的分离的核酸，其还包含TRY序列，任选地其中所述TRY序列被阐述在SEQIDNO：28中。


31.一种分离的核酸，其包含两侧带有两个腺相关病毒(AAV)反向末端重复序列(ITR)的编码CTSB蛋白的表达构建物，其中
(i)所述ITR中的至少一者包含相对于野生型AAV2ITR(SEQIDNO：29)修饰的“D”区；和/或
(ii)所述CTSB蛋白由密码子优化的核酸序列编码。


32.根据权利要求31所述的分离的核酸，其中所述CTSB蛋白包含SEQIDNO：30中阐述的氨基酸序列或其部分。


33.根据权利要求31或32所述的分离的核酸，其中所述CTSB蛋白由密码子优化的核酸序列或SEQIDNO：36中阐述的核酸序列编码。


34.根据权利要求31至33中任一项所述的分离的核酸，其中所述修饰的“D”区是相对于所述表达构建物位于所述ITR外侧的“D”序列。


35.根据权利要求31至34中任一项所述的分离的核酸，其中包含修饰的“D”序列的ITR是3’ITR。


36.根据权利要求31至35中任一项所述的分离的核酸，其还包含TRY序列，任选地其中所述TRY序列被阐述在SEQIDNO：28中。


37.一种分离的核酸，其包含两侧带有两个腺相关病毒(AAV)反向末端重复序列(ITR)的编码SMPD1蛋白的表达构建物，其中
(i)所述ITR中的至少一者包含相对于野生型AAV2ITR(SEQIDNO：29)修饰的“D”区；和/或
(ii)所述SMPD1蛋白由密码子优化的核酸序列编码。


38.根据权利要求37所述的分离的核酸，其中所述SMPD1蛋白包含SEQIDNO：37中阐述的氨基酸序列或其部分。


39.根据权利要求37或38所述的分离的核酸，其中所述SMPD1蛋白由密码子优化的核酸序列或SEQIDNO：38中阐述的核酸序列编码。


40.根据权利要求37至39中任一项所述的分离的核酸，其中所述修饰的“D”区是相对于所述表达构建物位于所述ITR外侧的“D”序列。


41.根据权利要求37至40中任一项所述的分离的核酸，其中包含修饰的“D”序列的ITR是3’ITR。


42.根据权利要求37至41中任一项所述的分离的核酸，其还包含TRY序列，任选地其中所述TRY序列被阐述在SEQIDNO：28中。


43.一种分离的核酸，其包含两侧带有两个腺相关病毒(AAV)反向末端重复序列(ITR)的编码GCH1蛋白的表达构建物，其中
(i)所述ITR中的至少一者包含相对于野生型AAV2ITR(SEQIDNO：29)修饰的“D”区；和/或
(ii)所述GCH1蛋白由密码子优化的核酸序列编码。


44.根据权利要求43所述的分离的核酸，其中所述GCH1蛋白包含SEQIDNO：45中阐述的氨基酸序列或其部分。


45.根据权利要求43或44所述的分离的核酸，其中所述GCH1蛋白由密码子优化的核酸序列或SEQIDNO：46中阐述的核酸序列编码。


46.根据权利要求43至45中任一项所述的分离的核酸，其中所述修饰的“D”区是相对于所述表达构建物位于所述ITR外侧的“D”序列。


47.根据权利要求43至46中任一项所述的分离的核酸，其中包含修饰的“D”序列的ITR是3’ITR。


48.根据权利要求43至47中任一项所述的分离的核酸，其还包含TRY序列，任选地其中所述TRY序列被阐述在SEQIDNO：28中。


49.一种分离的核酸，其包含两侧带有两个腺相关病毒(AAV)反向末端重复序列(ITR)的编码RAB7L蛋白的表达构建物，其中
(i)所述ITR中的至少一者包含相对于野生型AAV2ITR(SEQIDNO：29)修饰的“D”区；和/或
(ii)所述RAB7L蛋白由密码子优化的核酸序列编码。


50.根据权利要求49所述的分离的核酸，其中所述RAB7L蛋白包含SEQIDNO：47中阐述的氨基酸序列或其部分。


51.根据权利要求49或50所述的分离的核酸，其中所述RAB7L蛋白由密码子优化的核酸序列或SEQIDNO：48中阐述的核酸序列编码。


52.根据权利要求49至51中任一项所述的分离的核酸，其中所述修饰的“D”区是相对于所述表达构建物位于所述ITR外侧的“D”序列。


53.根据权利要求49至52中任一项所述的分离的核酸，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿萨·阿贝利奥维奇，劳拉·赫克曼，赫维·莱茵，
申请(专利权)人：普利维尔治疗公司，
类型：发明
国别省市：美国;US